Name: Opracowanie systemu modelowego in vitro do badania interakcji Equus caballus IgE z jego receptorem o wysokim powinowactwie FcεRI (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Poznaj metodę pomiaru uwalniania mediatorów IgE-zależnych z komórek białaczkowych szczura w badaniach alergii u koni. Ta technika umożliwia ilościową analizę reakcji alergicznych i rozwój potencjalnych terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują dr Lyndzie Partridge za udzielanie porad i zaplecze laboratoryjne.

1) Przygotowanie linii komórkowej:
<ol>
	<li>Opracowanie linii komórkowej RBL-2H3.1 wykazującej ekspresję konnego FcεRIα:
	<ol>
		<li>Stosując podstawowe techniki hodowli tkankowych dla linii komórkowych monowarstwowych, należy przeprowadzić transfekcję rodzicielskich komórek RBL-2H3.1 przy użyciu plazmidu pEE6 zawierającego gen konnego FcεRIα (GenBank: Y18204.1) 28. Do 0,8 ml komórek o zagęszczeniu 1,2 x107 cells ml-1 należy dodać 2 μg μl-1 plazmidowego DNA. Komórki należy poddać elektroporacji przy 250 V 960 μF, używając elektrokubety o szerokości 0,4 cm, a następnie bezzwłocznie inkubować na lodzie przez 10 min.</li>
		<li>Komórki transformowane należy wyselekcjonować, stosując podłoże zawierające 0,4 g siarczanu genetycyny G418, a następnie pozostałe żywe komórki należy posortować metodą FACS, znakując je fluorescencynym przeciwciałem IgE. Otrzymaną linię komórkową RBL-2H3.1 wykazującą ekspresję konnego FcεRIα należy wykorzystać do badania 2, 3.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Sensytyzacja przeciwciałami przed analizą:
	<ol>
		<li>Komórki RBL-2H3.1 wykazujące ekspresję konnego FcεRIα należy zebrać z konfluentnej szalki Petriego. Po przemyciu komórki należy ponownie zawiesić w podłożu hodowlanym do zagęszczenia 5x105 cell ml-1.</li>
		<li>Do zawiesiny komórkowej należy dodać odpowiednie IgE do stężenia końcowego 1 ng ml-1, a następnie nanieść 100 μl komórek na płytkę 96-dołkową w kolumnach 1-6 i inkubować w 37 °C + 5% CO2 + 90% wilgotności względnej przez 16 hr. Po czasie inkubacji, a przed przeprowadzeniem testu uwalniania, należy sprawdzić dołki pod mikroskopem pod kątem konfluencji i adhezji komórek.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2) Analiza uwalniania:
<ol>
	<li>Przemywanie komórek:
	<ol>
		<li>Podgrzać bufor uwalniający (25 mM PIPES, 120 mM chlorku sodu, 5 mM chlorku potasu, 0,04 mM chlorku magnezu i 1 mM chlorku wapnia) do 37 °C w celu umożliwienia delikatnego przemycia komórek.</li>
		<li>Przemyć komórki, energicznie potrząsając płytką, aby usunąć medium hodowlane, a następnie dodać 100 μl ciepłego (37 °C) buforu uwalniającego. Powtórzyć czynność dwukrotnie.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Stymulacja antygenem:
	<ol>
		<li>Przygotować rozcieńczenia szeregowe antygenu (NIP-HSA lub DNP-HSA) o stężeniach 0 ng ml-1, 0,1 ng ml-1, 1 ng ml-1, 10 ng ml-1, 100 ng ml-1, 1 000 ng ml-1 i 10 000 ng ml-1 w buforze uwalniającym i podgrzać do 37 °C.</li>
		<li>Po drugim przemyciu komórek usunąć medium i zastąpić je 100 μl roztworów antygenu. Należy upewnić się, że do studni w tym samym rzędzie (np. A1-6) dodano tę samą stężenie antygenu.</li>
		<li>Przygotować kontrolę negatywną w rzędzie A, dodając antygen o stężeniu 0 ng ml-1. W kolejnych rzędach (B-G) dodawać rosnące stężenia antygenu, a w rzędzie H dodać bufor z Tritonem-X (5% Triton X-100), aby zlizować komórki, które będą służyć jako kontrola pozytywna. Inkubować w temperaturze 37 °C przez 20 min, aby umożliwić komórkom uwolnienie mediatorów.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie kontroli dla poszczególnych studni:
	<ol>
		<li>Po inkubacji przenieść 50 μl supernatantu z komórkami do drugiej połowy płytki (ze studni A1-6 do studni A7-12 itd.). Pozostałe 50 μl supernatantu usunąć i zastąpić 50 μl buforu z Tritonem-X, aby umożliwić pomiar ilości uwolnionych mediatorów w każdej studni w kolumnach 7-12 jako procentu całkowitej ilości mediatorów wewnątrz komórek w kolumnach 1-6.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Substrat enzymatyczny:</li>
	<li>Do wszystkich studni dodać 50 μl substratu β-heksosaminidazy (50 mM 4-nitrofenylo N-acetyl-β-D-glukozaminidu przygotowanego w DMSO i rozcieńczonego do 2 mM w buforze cytrynianowym: 0,2 M kwasu cytrynowego i 0,2 M octanu sodu, pH 4,5), aby umożliwić konwersję substratu do 4-nitrofenolu przez enzym β-heksosaminidazę. Inkubować płytki w temperaturze 37 °C przez 2 h.</li>
</ol>
<img alt="Reakcja chemiczna: schemat enzymatycznej konwersji 4-nitrofenylu z użyciem β-heksosaminidazy." fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig241.jpg" width="400" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 2.4.1">
<ol start="5">
	<li>Zatrzymanie reakcji:
	<ol>
		<li>Przerwij reakcję poprzez dodanie 150 μl buforu Tris (1 M Tris-HCl, pH 9) do każdego dołka; wysokie pH buforu zatrzymuje reakcję i powoduje, że 4-nitrofenol przybiera żółty kolor.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Odczyt i analiza wyników:
	<ol>
		<li>Odczytaj płytkę za pomocą spektrofotometru do płytek przy 405 nm, aby zmierzyć absorbancję żółtego koloru. Oblicz procent uwolnionej β-heksosaminidazy, korzystając z następującego wzoru:</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Równanie do analizy matematycznej; wzór (A7x100)/((A7x2)+A1)x2; obliczenia badawcze." fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig261.jpg" width="100" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 2.6.1">
<ol start="2">
	<li>Zastosuj ten wzór do każdej studzienki, a następnie oblicz średnią dla każdego rzędu. A1 i A7 oznaczają położenie studzienek w płytce 96-dołkowej. Przedstaw na wykresie zależność procentowego uwalniania β-heksosaminidazy (które odpowiada całkowitemu uwalnianiu mediatorów) od stężenia antygenu 2, 3.</li>
</ol>

<ol><li>Taudou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Alpha+Chain+of+Human+Fc%CE%B5RI+in+Transfected+Rat+Basophilic+Leukemia+Cells%3A+Functional+Activation+after+Sensitization+with+Human+Mite-Specific+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Arch+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE.</a> Int Arch Allergy Immunol. 100 (4), 344-350 (1993).</li>
<li>Sabban, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Fc%CE%B5RI+Receptor%22">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity FcεRI Receptor</a>. , The University of Sheffield. Sheffield. (2011).</li>
<li>Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Receptor+Fc%CE%B5RI%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor FcεRI.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 153 (1-2), 6-10 (2013).</li>
<li>Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+IgE+mediates+stimulus+secretion+coupling+in+rat+basophilic+leukemia+cells+transfected+with+the+a+chain+of+the+human+high-affinity+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor.</a> Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).</li>
<li>Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+canine-human+Fc+IgE+chimeric+antibodies+for+the+determination+of+the+canine+IgE+domain+of+interaction+with+Fc%CE%B5RI%CE%B1%5BTitle%5D)+AND+%22MolImmunol%22%5BJournal%5D)">Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with FcεRIα.</a> MolImmunol. 45 (8), 2262-2268 (2008).</li>
<li>Rashid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Diagnostic+and+therapeutic+applications+of+rat+basophilic+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22MolImmunol%22%5BJournal%5D)">Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells.</a> MolImmunol. 52 (3-4), 224-228 (2012).</li>
<li>Cohen, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asthma+in+antiquity%3A+the+Ebers+Papyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy+Proc%22%5BJournal%5D)">Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus.</a> Allergy Proc. 13 (3), 147-154 (1992).</li>
<li>Dudler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+link+between+catalytic+activity%2C+IgE-independent+mast+cell+activation%2C+and+allergenicity+of+bee+venom+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2.</a> J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).</li>
<li>Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+allergens+stimulate+the+release+of+mediators+of+the+allergic+response+from+cells+of+mast+cell+lineage+in+the+absence+of+sensitization+with+antigen-specific+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE.</a> Eur J Immunol. 26 (12), 2972-2980 (1996).</li>
<li>Smyth, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+molecular+basis+of+pro-allergenic+effects+of+cigarette+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke.</a> Environ Sci Technol. 34 (7), 1370-1374 (2000).</li>
<li>Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27hygiene+hypothesis%27+for+autoimmune+and+allergic+diseases%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22ClinExpImmunol%22%5BJournal%5D)">The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update.</a> ClinExpImmunol. 160 (1), 1-9 (2010).</li>
<li>Eder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+environmental+and+genetic+factors+on+allergen-specific+immunoglobulin-E+levels+in+sera+from+Lipizzan+horses%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses.</a> Equine Vet J. 33 (7), 714-720 (2001).</li>
<li>Cook, W. R., Rossdale, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+syndrome+of+%27Broken+Wind%27+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The syndrome of 'Broken Wind' in the horse.</a> Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).</li>
<li>Eyre, P., Lewis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+systemic+anaphylaxis+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Acute systemic anaphylaxis in the horse.</a> Br. J. Pharmacol. 48 (3), 426-437 (1973).</li>
<li>Bruggink, M. Global betting stable, but some countries suffer recession. , International Federation of Horseracing Authorities. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664">http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664</a> (2009).</li>
<li>Wagner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE+in+horses%3A+occurrence+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">IgE in horses: occurrence in health and disease.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 132 (1), 21-23 (2009).</li>
<li>Hellberg, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+insect+bite+hypersensitivity%3A+immunoblot+analysis+of+IgE+and+IgG+subclass+responses+to+Culicoidesnubeculosus+salivary+gland+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 113 (1-2), 99-112 (2006).</li>
<li>Schaffartzik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+insect+bite+hypersensitivity%3A+what+do+we+know%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Equine insect bite hypersensitivity: what do we know.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 147 (3-4), 113-126 (2012).</li>
<li>Künzle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE-bearing+cells+in+bronchoalveolar+lavage+fluid+and+allergen-specific+IgE+levels+in+sera+from+RAO-affected+horses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+A+PhysiolPatholClin+Med%22%5BJournal%5D)">IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses.</a> J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54 (1), 40-47 (2007).</li>
<li>Tahon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+tests+compared+to+intradermal+testing+in+horses+with+recurrent+airway+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction.</a> Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).</li>
<li>Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+anti-equine+IgE+antibodies+with+specificity+for+different+epitopes+on+the+immunoglobulin+heavy+chain+of+native+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 92 (1-2), 45-60 (2003).</li>
<li>Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoclonal+antibodies+specific+for+native+equine+IgE+and+their+application+to+monitor+total+serum+IgE+responses+in+Icelandic+and+non-Icelandic+horses+with+insect+bite+dermal+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 112 (3-4), 156-170 (2006).</li>
<li>McAleese, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+expression+of+the+extra-cellular+part+of+the+alpha+chain+of+the+equine+high-affinity+IgE+receptor+and+its+use+in+the+detection+of+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 110 (1-2), 187-191 (2006).</li>
<li>Ledin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+therapeutic+antibody+responses+against+IgE+in+dogs%2C+an+animal+species+with+exceptionally+high+plasma+IgE+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels.</a> Vaccine. 24 (1), 66-74 (2006).</li>
<li>Siraganian, R. P., Hook, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histamine+release+and+assay+methods+for+the+study+of+human+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Manual+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Histamine release and assay methods for the study of human allergy.</a> Manual of Clinical Immunology. , American Society for Microbiology. Washington, D. C. (1980).</li>
<li>Neuberger, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hapten-specific+chimaericIgE+antibody+with+human+physiological+effector+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function.</a> Nature. 314 (6008), 268-270 (1985).</li>
<li>Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Protein+Phosphorylation+and+Ca2%2B+Mobilization+in+a+low+secreting+variant+of+the+rat+basophilic+leukemia+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 269 (30), 19300-19306 (1994).</li>
<li>McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+sequencing+of+the+horse+and+sheep+high-affinity+IgE+receptor+alpha+chain+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22Immunogenetics%22%5BJournal%5D)">Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA.</a> Immunogenetics. 1 (51), 878-881 (2000).</li>
<li>Hongtu, Y. Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease. , The University of Sheffield. (2010).</li>
<li>Sabban, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+pan-anti-allergy+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22JIBTVA%22%5BJournal%5D)">Towards a pan-anti-allergy vaccine.</a> JIBTVA. 2 (2), 15-27 (2013).</li>
<li>Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+bioassay+to+detect+reaginic+antibodies+from+the+serum+of+horses+affected+with+recurrent+airway+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction.</a> Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych w niniejszej pracy.

Podsumowując, wyniki tego badania wykazały, że gdy komórki RBL-2H3.1 eksprymujące FcεRIα koni są uwrażliwione na IgE koni i prowokowane antygenem, dają szczytowe uwalnianie mediatora na poziomie 36,68% ± 4,88% całkowitej ilości mediatora wewnątrz komórek, w porównaniu z komórkami rodzicielskimi RBL-2H3.1 bez ekspresji FcεRIα koni.
W związku z tym test ten stanowi użyteczne narzędzie do badania i badania reakcji alergicznych koni in vitro. Pozwala to na określenie ilości mediatora uwal...

Alergia jest znana od tysiącleci. Leczenie astmy zostało opisane w starożytnym egipskim tekście medycznym znanym jako papirus Ebersa (~1550 p.n.e.) i omówiono ziołowe środki lecznicze do jej leczenia 7.
Dzisiaj alergia jest klasyfikowana jako reakcja nadwrażliwości typu I, gdzie ramię układu odpornościowego limfocytu T pomocniczego typu 2 (TH2) steruje produkcją przeciwciał immunoglobuliny E (IgE) w odpowiedzi na antygeny środowiskowe zwane alergenami. Są to różnorodne substancje, które często wchodzą w interakcje z komórkami układu odpornościowego i stymulują syntezę i wydzielanie cytokin prozapalnych, w tym interleukiny-4 i interleukiny-13 8, 9, podobnie jak cząsteczki dymu papierosowego lub cząstek spalin z silników wysokoprężnych, które zwiększają syntezę IgE 10.
Wzrost objawów alergicznych w krajach uprzemysłowionych w ciągu ostatnich 50 lat został przypisany połączeniu efektu zanieczyszczeń środowiska i tendencji do bardziej oczyszczonego środowiska, które razem przesuwają odpowiedź immunologiczną w kierunku profilu zdominowanego przez cytokiny TH2, jak proponuje 'Hipoteza Higieny' 11.
Jak wspomniano powyżej, ludzie nie są jedynymi ssakami dotkniętymi alergią. Warto zauważyć, że konie i psy mogą również rozwijać klasyczne reakcje alergiczne, a badanie przeprowadzone przez 12 wykazało, że podobnie jak u ludzi, alergia na konie jest przypisywana czynnikom genetycznym i środowiskowym. W związku z tym zwierzęta te stanowią dobre modele do badania wzajemnych oddziaływań między genetycznymi i środowiskowymi przyczynami alergii, jej progresji od uczulenia do choroby oraz możliwych strategii interwencyjnych po wystąpieniu objawów klinicznych
W 1887 roku Stömmer był pierwszą osobą, która opisała podobieństwo między astmą ludzką i końską 13, wpływ histaminy na układ sercowo-naczyniowy koni jest bardzo podobny do wpływu na ludzki układ krążenia 14. Konie są również kamieniem węgielnym branży wyścigów konnych, która jest warta 72 miliardy dolarów, a obroty zakładami wynoszą 115 miliardów dolarów rocznie 15.
Większość współczesnych koni wyścigowych to potomkowie niewielkiej liczby koni arabskich hodowanych przez Lady Anne Blunt od 1878 roku. Współczesne konie wyścigowe są powszechnie hodowane wsobnie w celu selekcji pod kątem zdolności wydajnościowych. Są podatne na zaburzenia genetyczne, z których jedną jest podatność na narastanie reakcji alergicznych. Mają również 1000 razy wyższy poziom IgE w surowicy niż nawet najciężej uczuleni ludzie16. Reakcje alergiczne koni objawiają się zwykle nadwrażliwością na ukąszenia owadów (IBH) 17, 18. IBH powoduje zapalenie skóry z powodu ukąszeń owadów z rodzaju Culicoides. Inną formą choroby alergicznej koni jest nawracająca niedrożność dróg oddechowych (RAO), która objawia się w płucach i drogach oddechowych. Charakteryzuje się świszczącym oddechem i utrudnionym oddechem. RAO często występuje w odpowiedzi na zarodniki pleśni, a wysokie poziomy IgE specyficzne dla alergenu odnotowano u koni cierpiących na RAO w jednym z badań 19, chociaż inne badanie tego nie potwierdziło 20.
Badania nad alergią koni koncentrowały się na próbie monitorowania i neutralizacji IgE koni poprzez opracowanie przeciwciał monoklonalnych anty-końskich IgE (mAbs) 21, 22. Ponadto w badaniu przeprowadzonym przez 23 omówiono wytwarzanie domen zewnątrzkomórkowych receptora łańcucha α receptora Fc o wysokim powinowactwie (FcεRIα) w celu wykrycia i ilościowego określenia IgE w surowicy koni. Powiązane badanie przeprowadzone przez Ledin24 omawia nowe podejście mające na celu neutralizację IgE w surowicy poprzez pobudzanie układu odpornościowego za pomocą immunogenu własnego/niewłasnego. We wszystkich tych badaniach brakowało jednak skutecznego testu, który przetestowałby bezpieczeństwo i skuteczność ich protokołów. W niniejszym artykule przedstawiamy teraz taki system testowy mający zastosowanie w badaniu strategii diagnostycznych i terapeutycznych istotnych dla układu koniowatych, w którym na komórkach RBL-2H3.1 wykazujących ekspresję FcεRIα oceniano uwalnianie β-heksozaminidazy, jako wskaźnika degranulacji mediatora komórkowego. Protokół ten opiera się na wcześniejszych publikacjach 25, 4, 5, 2, 3 opisujących inżynierię komórek RBL transfekowanych genem kodującym domenę wiążącą IgE receptora o wysokim powinowactwie do IgE różnych gatunków. Protokół wyjaśnia, jak przeprowadzić test uwalniania β-heksozaminidazy, którego wyniki przedstawiono jako średnią ± odchylenie standardowe z potrójnych eksperymentów.
Test uwalniania został po raz pierwszy opracowany przez Siraganian i Hook 25 do badania alergii u ludzi. Grupa laboratoryjna kierowana przez dr Reubena Siraganiana opracowała również linię komórkową RBL. Te komórki RBL zostały opracowane w celu ekspresji ludzkiego FcεRIα, a protokół został opublikowany przez 4. Ostatnim elementem testu było opracowanie plazmidu pSV w artykule Neuberger 26, który opisał wytwarzanie przeciwciał IgE poprzez klonowanie genu łańcucha ciężkiego poniżej genu myszy dla regionu zmiennego IgE, który jest ukierunkowany na hapten 4-hydroksy-3-nitro-fenacetyl (NP), powstałe przeciwciało chimeryczne było w pełni funkcjonalne. Zdolność do opracowania dowolnej IgE ukierunkowanej na ten sam hapten, przy jednoczesnym klonowaniu jego receptora na powierzchni komórek RBL, zaowocowała standaryzacją testu, dzięki czemu jest on użytecznym protokołem do pomiaru degranulacji komórek bazofilowych.
Test ma swoje plusy i minusy. Zaletą testu jest jego zdolność adaptacji do stosowania w dowolnym systemie ssaków, nasze laboratorium wykorzystało go zatem do testowania degranulacji w systemach ludzkich, psich i konnych, a jest to osiągalne po prostu poprzez syntezę IgE organizmu i klonowanie jego receptora na powierzchni komórek RBL.
Z drugiej strony, wadą testu jest to, że komórki RBL są bardzo wrażliwe na zmiany termiczne, mechaniczne i pH, co sprawia, że dają różne poziomy degranulacji w ramach tego samego testu. W związku z tym zdecydowanie zaleca się, aby testy były zawsze powtarzane w trzech egzemplarzach, a następnie pobierana była z nich średnia. Co więcej, komórki RBL mają tendencję do przesuwania się w kierunku fenotypu nieuwalniającego, jeśli są pozostawione w hodowli tkankowej przez dłuższy czas (>10 tygodni) 27, co sprawia, że ich utrzymanie jest uciążliwe. Są również podatne na infekcje bakteriami mykoplazmowymi, które nie są widoczne pod mikroskopem świetlnym i nie zmieniają morfologii komórki, ale drastycznie zmieniają jej poziom degranulacji. W związku z tym konieczne są regularne badania na obecność mykoplazmy.

<table><tbody><tr><td>RBL-2H3.1 Ekspresja Fc i epsilonu koni; RI&alfa;</td><td>-</td><td></td> <td>Wyprodukowano w laboratorium</td></tr><tr><td>IgE koni anty NIP-HSA</td> <td>-</td><td></td> <td>Wyprodukowano w laboratorium</td></tr><tr><td>96 Well Plate</td><td>Sigma</td><td></td> <td>CLS3595-Multi</td></tr> <tr><td>Channel Pipette</td><td>Anachem</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Inkubator</td><td>Galaxy R</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Kwas 4hydroksy-5-jodo-3-nitrofenylooctowy</td><td>Cambridge Research Biochemicals</td><td>N-1070-1</td><td>NIP-OH został sprzężony z albuminą surowicy ludzkiej w celu wytworzenia NIP-HSA w laboratorium</td></tr><tr><td>Dinitrofenyl sprzężony z albuminą surowicy ludzkiej</td><td>Sigma</td><td>A6661</td><td>Skrócony spektrofotometr płytkowy DNP-HSA</td></tr><tr><td></td><td>Anthos Labtec HT2</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>-Rury</td><td>Sigma</td><td>P1851-Chlorek</td><td></td></tr> <tr><td>sodu</td><td>Sigma</td><td>S7653-Chlorek</td><td></td></tr> <tr><td>potasu</td><td>Sigma</td><td>P9333-Chlorek</td><td></td></tr> <tr><td>magnezu</td><td>Sigma</td><td>M2670-Chlorek</td><td></td></tr> <tr><td>wapnia</td><td>Sigma</td><td>C1016-Triton</td><td></td></tr> <tr><td>x100</td><td>Sigma</td> X100-4-nitrofenylo <td></td><td></td></tr><tr><td>N-acetylo-&beta;-D-glukozaminid</td><td>Sigma</td><td>N9376</td><td>Roztwór podstawowy zwany substratem &beta;-heksozaminidazy został przygotowany w 50mM przygotowanym w DMSO</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Sigma</td><td>D2650-Kwas</td><td></td></tr> <tr><td>cytrynowy</td><td>Sigma</td><td></td> <td>251275-octan</td></tr> <tr><td>sodu</td><td>Sigma</td><td>S7670-Tris</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>T5941</td><td>-</td></tr></tbody></table>

opracowanie systemu modelowego in vitro do badania interakcji equus caballus ige z jego receptorem o wysokim powinowactwie fcεri

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

Interakcja IgE z jego receptorem Fc o wysokim powinowactwie (FcεRI), po której następuje prowokacja antygenowa, jest główną ścieżką w reakcjach alergicznych zależnych od IgE. W wyniku wysokiego powinowactwa wiązania między IgE i FcεRI, wraz z ciągłym wytwarzaniem IgE przez limfocyty B, alergie zwykle utrzymują się przez całe życie, a obecnie nie ma trwałego lekarstwa. Konie, zwłaszcza konie wyścigowe, które są powszechnie wsobne, to gatunek ssaków, który jest bardzo podatny na rozwój reakcji nadwrażliwości, co może poważnie wpłynąć na ich wydajność. Fizjologiczne reakcje na uczulenie alergiczne u koni odzwierciedlają reakcje obserwowane u ludzi i psów. W niniejszej pracy opisano rozwój systemu testów in situ do ilościowej oceny uwalniania mediatorów odpowiedzi alergicznej odnoszącej się do układu koniowatych. W tym celu gen kodujący końskie FcεRIα został transfekowany i poddany ekspresji na powierzchni rodzicielskich komórek białaczki bazofilowej szczura (RBL-2H3.1). Produkt genu transfekowanego łańcucha α koni utworzył funkcjonalny kompleks receptorowy z endogennymi łańcuchami β i γ szczura 1. Powstały w ten sposób system testowy ułatwił ocenę ilości mediatora wydzielanego z transfekowanych komórek RBL-2H3.1 koni transfekowanych FcεRIα po uczuleniu na IgE koni i prowokacji antygenowej przy użyciu uwalniania β-heksozaminidazy jako odczytu 2, 3. Uwalnianie mediatora osiągnęło szczyt na poziomie 36,68% ± 4,88% przy 100 ng ml-1 antygenu. Test ten został zmodyfikowany w stosunku do poprzednich testów stosowanych do badania reakcji alergicznych ludzi i psów 4, 5. Wykazaliśmy również, że ten rodzaj systemu testowego ma wiele zastosowań w opracowywaniu narzędzi diagnostycznych i ocenie bezpieczeństwa potencjalnych strategii interwencji terapeutycznej w chorobach alergicznych 6, 2, 3.

Komórki rodzicielskie RBL-2H3.1 oraz komórki przetransfekowane genem receptora FcεRIα konia zostały najpierw uwrażliwione mysim przeciwciałem IgE przeciwko DNP-HSA, a następnie stymulowane antygenem DNP-HSA. Mysie IgE wiąże się z endogennym szczurzym receptorem w obu liniach komórkowych, pełniąc tym samym funkcję kontrolną w celu sprawdzenia zdolności obu linii do uwalniania mediatorów (Rysunek 1 A). Jest to istotna weryfikacja, którą należy przeprowadzać rutynowo, ponieważ przy przedłużonym pasażowaniu ...

Obecne badanie opisuje rozwój i zastosowania genetycznie modyfikowanego systemu testowego opartego na transfekcji komórek białaczki bazofilnej szczurów z genem FcεRIα konia. Transfekowane komórki wyrażają funkcjonalny receptor, w którym uwalnianie mediatorów odpowiedzi alergicznej może być aktywowane przez IgE i antygen.

Opracowanie systemu modelowego in vitro do badania interakcji Equus caballus IgE z jego receptorem o wysokim powinowactwie FcεRI

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest zmierzenie ilości uwalniania mediatora zależnego od IgE z komórek białaczki bazofilowej RAD. Objawy alergii są spowodowane uwalnianiem mediatorów, takich jak histamina. Histamina nie jest jedynym mediatorem uwalnianym przez bazofile, są komórki tuczne.Suma wszystkich mediatorów, które są uwalniane przez te komórki, powoduje oznaki i objawy natychmiastowej i opóźnionej nadwrażliwości. Ludzie nie są jedynymi organizmami, które cierpią na alergię, na którą cierpią również psy i konie. W celu dalszego rozwoju badań i znalezienia metod leczenia alergii, takich jak szczepionki, wymagany jest test uwalniania w celu ilościowego określenia ilości mediatorów uwolnionych w wyniku leczenia badawczego, jeśli takie istnieją.To jest powód tego testu uwalniania. Test wydany przez mediatora RBL dla systemu ludzkiego został po raz pierwszy opracowany i opublikowany przez Iana i Hooka w 1986 roku. Później został opracowany dla systemu DOC, a teraz dla systemu konnego.Modyfikacje są tak proste, jak zmiana interesujących nas białek. Wiadomością o linii komórkowej była białaczka Rat Baso lub linia komórkowa RBL dwie H 3.1 wyrażające łańcuch alfa końskich receptorów seryny R o wysokiej zawartości FNT i fcf do gęstości komórek 500 000 komórek na mililitr. Dodaj interesujące Cię przeciwciało IgE do końcowego stężenia jednego nanograma na mililitr.Dodaj 100 mikrolitrów mieszanki do płytki glebowej 96 i inkubuj przez 16 godzin w temperaturze 37 stopni. Dzięki temu komórki przylegają do powierzchni studzienki, a przeciwciało wiąże się z płukaniem receptora. Dwa razy pożywka zawierająca pozostałe niezwiązane przeciwciało i martwe komórki ze 100 mikrolitrami ciepłego buforu o temperaturze 37 stopni.Odrzucić bufor z ostatniego przemywania i zastąpić go 100 mikrolitrami antygenu będącego przedmiotem zainteresowania w stężeniu będącym przedmiotem zainteresowania. Po 20 minutach inkubacji w temperaturze 37 stopni przenieś 50 mikrolitrów natynki SUP zawierającej mediatory uwalniania do nowej studzienki i zastąp pozostały supernatant buforem Triton X o pojemności 50 mikrolitrów, aby ułożyć komórki i uwolnić pozostałe mediatory wewnątrz komórek. Przy 50 mikrolitrach 2 milionów molowców beta hx.Wielodniowy substrat rozpuszczony w buforze cytrynianowym. Po dwugodzinnej inkubacji w temperaturze 37 stopni dodaj 150 mikrolitrów buforu tris do każdej studzienki, zmieniając dołek na żółty. Zmierz absorbancję koloru przy 405 nanometrach Po 16 godzinach.Ogrzej bufor do oznaczania uwalniania, znany również jako bufor Iana w temperaturze 37 stopni. Przygotować również gradient stężeń antygenu w buforze uwalniającym przy stężeniach. Zero 0,1 1 10, 100, 1000 i 10 000 nanogramów na mililitr.Następnie ogrzej się w 37 stopniach. Umyj studzienki, szybko przesuwając naczynie, aby usunąć pożywkę i delikatnie dodaj 100 mikrolitrów buforu o ciepłym uwalnianiu w kierunku ścianek studzienek. Ma to na celu zmniejszenie stresu komórkowego spowodowanego różnicą temperatur, co powoduje przedwczesne uwalnianie mediatorów.Naczynie należy umyć dwukrotnie. Odrzucić bufor o końcowym uwalnianiu, umyć i dodać 100 mikrolitrów antygenu, zaczynając od zerowego stężenia antygenu w rzędzie A dla kontroli ujemnej i schodząc w dół gradientu stężeń od rzędów B do G, a na końcu do plasterków Triton X, bufor w rzędzie H. To dla kontroli pozytywnej. Inkubować płytkę przez 20 minut w temperaturze 37 stopni.Jest to punkt, w którym komórki uwalniają mediatory po okresie inkubacji. Przenieś 50 mikrolitrów cieczy z każdej studzienki do odpowiedniej studzienki. W kolumnach od siódmej do dwunastej całkowicie usunąć pozostałą ciecz i wyrzucić ją w miejscach od pierwszej do szóstej i zastąpić 50 mikrolitrami buforu do lizy Triton X.Dodaj 50 mikrolitrów przygotowanego podłoża do wszystkich 96 dołków naczynia. Inkubować w temperaturze 37 stopni przez dwie godziny. Beta H, wiele dni zamienia substrat na cztery nitrofenol.Po okresie inkubacji zatrzymaj reakcję, dodając 150 mikrolitrów buforu tris, zmieniając cztery nitrofenol na żółty kolor. Odczytaj płytkę za pomocą spektrofotometru płytkowego o długości 405 nanometrów. Po zmierzeniu danych dotyczących absorbancji obliczyć całkowitą ilość mediatorów wewnątrz komórek w pozycji studzienek A jeden, mnożąc je.Jego odpowiedni dobrze na pozycji siedem na dwa i dodanie wyniku do wartości na jedynce. Dzieje się tak dlatego, że podczas eksperymentu mamy supinat zawierający opozycję mediatorów uwalniania A, gdy przenieśliśmy ją do nowej opozycji studzienki. Siódemka.Powtórz obliczenia dla pozostałych studni. Oblicz procent mediatorów uwalniania w opozycji studzienki, A siedem z obliczonych całkowitych mediatorów wewnątrz komórek, mnożąc wartość pozycji A siedem przez dwa. Ponownie, ponieważ podczas eksperymentu mamy supernat zawierający mediatory Reese'a.Gdy przenieśliśmy go do nowego, pomnóż ten iloczyn przez 100 i podziel ten iloczyn przez odpowiednią całkowitą wartość mediatorów wewnątrz komórek dla tej pozycji. Daje to procent mediatorów uwalniania dla pęcznienia. Powtórz obliczenia dla pozostałych studzienek, ponieważ sześć fal w każdym rzędzie jest kwestionowanych przez to samo średnie stężenie antygenu.Wartości te i oblicz odchylenie standardowe, wykreśl te wartości na wykresie w następujący sposób. Wykres pokazuje, że wraz ze wzrostem stężenia antygenu uwalnianych jest więcej mediatorów, aż osiągnie szczyt na poziomie 100 nanogramów na mililitr, po czym uwalnianie mediatora zmniejsza się wraz ze wzrostem stężenia antygenu. Ostateczny wynik eksperymentu powinien wyglądać jak te wykresy, jak widać na wykresie B. Test uwalniania kontrolnego w kolorze jasnoniebieskim nie zawiera przeciwciał IgE, a zatem nie wykazuje zmian w uwalnianiu mediatorów wraz ze wzrostem stężenia antygenu.Porównaj to z wynikiem eksperymentalnym w kolorze ciemnoniebieskim, który może zawierać przeciwciało IgE. Jest to przykład szczepionki anty-IgE testowanej pod kątem bezpieczeństwa. Z tego wykresu w kolorze czerwonym jasno wynika, że surowica anty-IgE łączy krzyżowo receptory na powierzchni komórki, powodując degranulację komórek RBL, tak jak to widać w kontroli pozytywnej na fioletowo w porównaniu z kontrolą negatywną na szaro, co czyni tę szczepionkę niebezpieczną.Test ten jest bardzo przydatny, ponieważ może mierzyć uwalnianie mediatora lub jego opóźnienie podczas testowania potencjalnych leków przeciwalergicznych lub szczepionek, które można również dostosować do układów ludzkich, psów lub koni, jak pokazano, test może określić pomyślne zablokowanie lub nieskuteczne zablokowanie uwalniania mediatora podczas testowania przeciwciał przeciwalergicznych.

development-an-vitro-model-system-for-studying-interaction-equus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film pokazuje zdarzenia wywołane przez FcγRIIIa, zainicjowane przez przeciwciała terapeutyczne w ludzkich komórkach NK. Platforma sztucznej stymulacji ułatwia badanie dalszych funkcji efektorowych, obejmujących przegrupowanie cytoszkieletu, degranulację, produkcję chemokin/cytokin oraz szlaki sygnałowe, w których pośredniczą części FcγRIIIa i Fc przeciwciał zaangażowanych w wiązanie.

Test sztucznej aktywacji in vitro do badania aktywacji receptora Fc przez przeciwciała

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) jest uznanym zwierzęcym modelem stwardnienia rozsianego. Myszy C57BL/6 są immunizowane peptydem 35-55 (MOG) glikoproteiny oligodendrocytów mieliny (MOG) (MOG35-55), co powoduje narastający porażenie wiotkie spowodowane przez autoreaktywne komórki odpornościowe w ośrodkowym układzie nerwowym. Omówione zostaną protokoły indukcji i monitorowania choroby.

Glikoproteina oligodendrocytów mielinowych (MOG35-55) indukowana eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego (EAE) u myszy C57BL / 6

Tutaj prezentujemy protokół rozwoju i walidacji ilościowej metody PCR używanej do wykrywania i kwantyfikacji DNA EHV-2 w płynach oddechowych koni. Protokół walidacji EHV-2 qRT-PCR obejmuje trzyczęściową procedurę: opracowanie, scharakteryzowanie samego testu qRT-PCR oraz scharakteryzowanie całej metody analitycznej.

Opracowanie i walidacja ilościowej metody PCR do diagnostyki herpeswirusa koniowatego-2 w płynach oddechowych

Pierwotna hodowla bydlęcych komórek śródbłonka rogówki została wykorzystana do zbadania mechanizmu przejścia śródbłonka rogówki na mezenchym. Ponadto wykorzystano model kriouszkodzenia śródbłonka rogówki szczura, aby zademonstrować przejście śródbłonka rogówki i mezenchymów in vivo.

Modele in vitro i in vivo do badania przejścia śródbłonka rogówki i mezenchymów

W tym raporcie prezentujemy protokół, który pozwala badaczowi na wygenerowanie mysiego modelu wewnątrzgałkowego zapalenia błony naczyniowej oka. Ten uznany model, częściej określany jako eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie błony naczyniowej oka (EAU), obejmuje wiele aspektów chorób u ludzi. W tym miejscu opiszemy, jak indukować i monitorować postęp choroby za pomocą kilku odczytów.

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie błony naczyniowej oka: wewnątrzgałkowy model zapalny myszy

Aby wywołać eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia, zwierzęcy model stwardnienia rozsianego, myszy są immunizowane emulsją typu woda w oleju zawierającą autoantygen i kompletny adiuwant Freunda. Chociaż istnieje kilka protokołów przygotowania tych emulsji, tutaj przedstawiono szybki, prosty i ustandaryzowany protokół homogenizacji do przygotowania emulsji.

Szybka, prosta i standaryzowana metoda homogenizacji do przygotowania emulsji antygenowych/adiuwantowych do wywołania eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

Enteroidy pojawiają się jako nowy model do badania fizjologii i patofizjologii tkanek, opracowywania leków i medycyny regeneracyjnej. W tym miejscu opisujemy system hodowli 2D enteroidów pochodzących z komórek pierwotnych bydła, który umożliwia kohodowlę z odpowiednimi typami komórek tkankowych. Model ten oferuje przewagę translacyjną w modelowaniu badań żołądkowo-jelitowych.

Opracowanie dwuwymiarowego systemu hodowli jednowarstwowej bydła pochodzącego z enteroidów pierwotnych do zastosowań w translacyjnych badaniach biomedycznych

Ten protokół opisuje szczegółowe etapy wstępnego wdrażania mikroskopii immunoelektronowej, skupiając się na badaniu obwodów synaptycznych i lokalizacji białek w siatkówce.

Badanie obwodów siatkówki i lokalizacji molekularnej poprzez wstępne osadzenie mikroskopii immunoelektronowej

Glej jelitowy staje się coraz bardziej rozpoznawalny ze względu na swoją rolę w homeostazie jelit i procesach chorobowych, w tym powikłaniach pooperacyjnych. Pacjenci koni powracający do zdrowia po laparotomii zwiadowczej w nagłych wypadkach cierpią na wysokie ryzyko wystąpienia stanów zapalnych pooperacyjnych, co podkreśla znaczenie ustalenia powtarzalnej hodowli pierwotnych komórek glejowych jelit koni do badania.

Posiew glejowy jelitowy koni i zastosowanie do badania neuronalnego mechanizmu zapalnego w kolce koni

Badanie pokazuje rolę skóry w modulacji odpowiedzi immunologicznych u myszy poprzez immunizację epikutanną (EC). Szczepienie EC antygenem białkowym może hamować odpowiedzi immunologiczne w przypadku nadwrażliwości kontaktowej lub odwracać supresję indukowaną przez skórę, gdy jest połączona z molekularnymi wzorcami związanymi z patogenem. Szczepienia EC wykazują obiecujące zastosowanie jako skuteczne, bezigłowe podejście do immunoterapii.

Model murinowy immunomodulacji indukowanej przez skórę

Poznaj metodę pomiaru uwalniania mediatorów IgE-zależnych z komórek białaczkowych szczura w badaniach alergii u koni. Ta technika umożliwia ilościową analizę reakcji alergicznych i rozwój potencjalnych terapii.

Opracowanie systemu modelowego in vitro do badania interakcji Equus caballus IgE z jego receptorem o wysokim powinowactwie FcεRI (Wideo) | JoVE Journal

Opracowanie systemu modelowego in vitro do badania interakcji Equus caballus IgE z jego receptorem o wysokim powinowactwie FcεRI

Przeglądaj więcej filmów