Od konstruktów do kryształów – w kierunku określania struktury β-baryłkowych białek błony zewnętrznej

Ogólnym celem tej metody jest uzyskanie miligramowych ilości białek beta błony zewnętrznej, które ulegną krystalizacji i defraktorii. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie fałdowania i transportu białek błonowych, takie jak sposób białka beta-beczkowe są wprowadzane do błon komórkowych. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest ona odporna na białka beta-beczkowe.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które są nowe w tej metodzie, będą miały trudności, ponieważ wybór detergentów do oczyszczania, krystalizacji i defrakcji jest trudny. Jeremy Guerin, doktor habilitowany z laboratorium Susan Buchanan, zademonstruje procedurę, wraz ze mną i kolegami z laboratorium. Rozpocznij tę procedurę od budowy wektora ekspresyjnego T7 zawierającego zoptymalizowane pod kątem kodonu docelowe białko błony zewnętrznej lub gen OMP do ekspresji in vivo do błony, jak opisano w protokole tekstowym.