Wydajna ekspresja komórek ssaków i jednoetapowe oczyszczanie zewnątrzkomórkowych glikoprotein do krystalizacji

Ogólnym celem tej techniki ekspresji białek ssaków jest wyprodukowanie miligramowych ilości natywnie pofałdowanych białek odpowiednich do badań strukturalnych, biofizycznych i funkcjonalnych. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest to szybki i prosty protokół uzyskiwania wydzielanych białek ssaków oraz stężenia w czystości wymaganego do badań strukturalnych. Ogólnie rzecz biorąc, stwierdzamy, że większość problemów z wydajnością białka wynika ze zdrowia i żywotności komórek.

Ścisłe monitorowanie żywotności komórek, a także monitorowanie poziomu cukru w pożywce, znacznie poprawia zarówno wydajność białka, jak i przedłuża przydatność komórek. Bardzo ważne jest również monitorowanie gęstości komórek. Stwierdzamy, że jeśli w dowolnym momencie przed transfekcją komórki przekroczą 2 miliony komórek na mililitr, to wydajność białka jest znacznie zmniejszona Aby przeprowadzić hodowlę na dużą skalę 2 93 komórek F, uzupełnij jeden litr pożywki 2 93 F 10 mililitrami 100 x glutaminy i pięcioma mililitrami 100 x paciorkowca pióra.