Dostrajanie kolumny przepływu z równoległymi segmentami i włączanie detekcji multipleksowej

Ogólnym celem tej procedury HPLC jest dostrojenie równoległej kolumny przepływu segmentowego, aby umożliwić wykrywanie multipleksowe. Metoda ta odpowiada na kluczowe pytania w obszarach zdrowia i dobrego samopoczucia, nauk o środowisku, kryminalistyki i wszelkich dziedzin, które wymagają analizy złożonych próbek, takich jak odkrycia biologiczne. Technika ta pozwala na kompleksową analizę próbki, a jednocześnie dostarcza informacji o chemicznej i bioaktywnej naturze substancji w złożonych mieszaninach.

Protokoły wielokrotnego wykrywania pozwalają również na szybką analizę. Metoda ta umożliwia opracowanie strategii określania chemicznego odcisku palca złożonych mieszanin, takich jak kawa i wino, umożliwiając producentom odróżnienie swoich produktów od tanich podróbek. Początkowo może wydawać się niekonwencjonalne, aby nie wysyłać całej próbki tylko do jednego detektora w celu dokładnej analizy.

Jednak stężenie analitu w każdym strumieniu przepływu jest wyższe niż całkowity strumień przepływu konwencjonalnej kolumny. Aby rozpocząć, ustaw instrument HPLC ze 100% wodą UE i czystym metanolem odpowiednio dla faz ruchomych A i B. Jeśli ma być używany detektor MS, dodaj 0,1% kwasu mrówkowego do obu faz ruchomych, a następnie przepłucz pompy HPLC zgodnie z instrukcjami producenta.

Montaż MS UV VS. I detektory DPPH. Zgodnie z instrukcjami producenta. Upewnij się, że komponenty są odpowiednio rozmieszczone, tak aby martwa objętość w przewodach detektora była minimalna.

Następnie ustaw długość fali detektora UV VISTA na długość fali specyficzną dla próbki tutaj. 280 nanometrów dla detektora MS. Użyj trybu dodatniego do całkowitej liczby jonów lub analizy TIC z metodą pełnego wykrywania skanowania.

Zrównoważyć temperaturę i przepływ gazu w detektorze MS do następujących wartości. Temperatura parownika 500 stopni Celsjusza, temperatura kapilary 350 stopni Celsjusza, przepływ gazu pomocniczego 40 jednostek, przepływ gazu przemiatania pięciu jednostek, szybkość gazu w osłonie 60 jednostek i napięcie natryskiwania 3,5 kilowolta. Aby przygotować odczynnik rodnikowy DPPH, zacznij od rozpuszczenia 25 miligramów rodnika DPPH w 250 mililitrach metanolu w kolbie miarowej.

Dodaj 250 mikrolitrów kwasu mrówkowego do roztworu i sonikuj roztwór przez 10 minut. Następnie przykryj kolbę i folię, aby zapobiec ekspozycji na światło. Następnie przepłucz pompę roztworem rodnika DPPH zgodnie z zaleceniami producenta w celu skonfigurowania systemu DPPH radical.

Upewnij się, że przewód pompy jest przymocowany do wlotu trójnika, a następnie podłącz cewkę reakcyjną o pojemności 100 mikrolitrów do wylotu trójnika. Podłącz detektor do drugiego końca obudowy ENC cewki reakcyjnej, cewki reakcyjnej i grzałki kolumny. Na koniec ustaw detektor DPPH radical UV V na 520 nanometrów.

Aby skonstruować równoległy przepływ segmentowy lub kolumnę PSF, najpierw podłącz wlot kolumny do przyrządu HPLC. Następnie użyj kawałka rurki, aby podłączyć centralny port do detektora MS. Użyj przewodów o tych samych wymiarach, aby podłączyć jeden port kolumny peryferyjnej do detektora UV VS, a drugi do elementu T systemu detekcji rodników DPPH.

Zablokuj wszystkie nieużywane porty peryferyjne za pomocą ograniczników kolumn. Dostosuj natężenie przepływu HPLC do jednego mililitra na minutę 100% ruchomej fazy B dla kolumny o średnicy 4,6 milimetra, średnicy wewnętrznej i długości 250 milimetrów. Równowaga przez 20 minut.

Aby rozpocząć dostrajanie systemu PSF, najpierw rozerwij puste naczynia zbiorcze. Użyj tych fiolek do oddzielnego zbierania fazy ruchomej z UV VS. I radykalne porty DPPH. Zwrócić uwagę na czas zbierania i zebrać co najmniej 500 miligramów rozpuszczalnika do każdego naczynia.

Następnie zważyć naczynia zbiorcze, aby określić masę fazy ruchomej i podzielić masę przez gęstość metanolu, aby obliczyć objętość fazy ruchomej pobranej z każdego portu. Na koniec określ natężenie przepływu do detektora MS i oblicz proporcje przepływu wszystkich detektorów jako procent całkowitego przepływu, zgodnie z zapisem w protokole tekstowym. Jeśli proporcje przepływu znacznie odbiegają od wartości idealnych, w razie potrzeby dodaj dodatkowe przewody, aby wyregulować ciśnienie wsteczne i powtórzyć proces zbierania i obliczeń.

Na koniec ustaw natężenie przepływu pompy odczynnika rodnikowego DPPH tak, aby odpowiadało natężeniu przepływu portu wylotowego podłączonego do detektora. Przeprowadzono multipleksową analizę HPLC na próbce kawy. Możliwość rejestracji DPPH rodnikowego UV VS. A Ms.Chromatogramy jednocześnie pozwalają związkom w próbce, które pozytywnie zareagowały na rodnik DPPH, łatwo dopasować do odpowiedzi UV vs.

I MS w oparciu o wyrównanie czasu retencji, w którym zaobserwowano pozytywną odpowiedź z detektora MSS TIC, zarejestrowano masę cząsteczkową piku. Łatwość dopasowywania pików między różnymi procesami wykrywania pozwala na szybką i bardziej wydajną formę badań przesiewowych i charakteryzacji złożonej próbki, takiej jak kawa Po opanowaniu technikę tę można skonfigurować w ciągu zaledwie około godziny i przygotować do analizy próbki Zgodnie z tą procedurą. W celu uzyskania dodatkowych informacji o próbce można zastosować inne detektory, takie jak fluorescencja współczynnika załamania światła i detekcja chemiczna, takie jak luminescencja chemiczna.

Po obejrzeniu tego filmu należy zdać sobie sprawę z tego, jak ważne są procesy detekcji multipleksowania w celu lepszego zrozumienia złożonej próbki. Co więcej, detekcja multipleksowa za pomocą równoległych segmentowych kolumn przepływowych jest niezwykle skutecznym sposobem prowadzenia eksploracji biologicznej.