Respirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny funkcji mitochondriów w przepuszczalnych i nienaruszonych komórkach

Ogólnym celem tej procedury jest zastosowanie respirometrii o wysokiej rozdzielczości do określenia zużycia tlenu w mitochondriach. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące zespołów i chorób związanych z dysfunkcją mitochondriów, takich jak; sepsa, różne choroby neurologiczne i zaburzenia związane z wiekiem. Główną zaletą tej techniki jest to, że ma wyższą czułość i możliwość przeprowadzania eksperymentów z substratem na sprzężonych miareczkowaniach inhibitorów z niewielką liczbą próbek biologicznych, takich jak nienaruszone lub przepuszczalne komórki.

Procedurę zademonstruje Sandra Nansoz, technik z mojego laboratorium. Przed rozpoczęciem zabiegu należy skalibrować polarograficzne czujniki tlenu powietrzem, a następnie ponownie zawiesić komórki w buforze oddechowym do stężenia jeden razy dziesięć do szóstego na mililitr i zastąpić pożywkę oddechową w jednej komorze oksygramu 2,1 mililitra zawiesiny komórek. Zamknij komorę korkiem i ustaw mieszadło magnetyczne w komorze na 700 obrotów na minutę.