Name: Dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów GFP i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Poznaj dwie metody tworzenia modeli mysich niedoczynności przytarczyc: paratyreoidektomię z użyciem GFP oraz ablację toksyną błoniczą. Modele zachowują czynność tarczycy i umożliwiają badanie terapii analogami PTH.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez granty NIH R01-DK100584 oraz China State Key Laboratory of Oral Diseases Open Funding SKLOD2015OF01 (RB). Dziękujemy Wenping Zhao, Tadatoshi Sato i Kelly Lauter za pomoc.

To badanie zostało zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) Szpitala Ogólnego w Massachusetts. Przed rozpoczęciem należy uzyskać odpowiednią zgodę instytucjonalną na to badanie na zwierzętach. Niektóre techniki mogą wymagać dostosowania zgodnie z lokalnymi wymogami IACUC.
1. Myszy GFP-PTX
<ol>
	<li>Uzyskaj myszy PTHcre + i myszy Rosa-mTmG w wieku 8 - 10 tygodni do dalszego krycia.</li>
	<li>Krzyżowanie wsteczne myszy PTHcre + (mieszane 129; tło FVB) z myszami C57BL/6 przez 6 pokoleń, aby uzyskać myszy z tłem C57BL/6.</li>
	<li>Myszy wsobne PTHcre+ w celu uzyskania myszy PTHcre+/+17. 
	UWAGA: Aby przeprowadzić genotypowanie, wyekstrahuj DNA z czubka ogona i użyj go do PCR. Startery PCR do sprawdzania heterozygotyczności i homozygotyczności transgenu PTHcre są następujące: starter do przodu A, CCTGTCAAGGATGTGGAAGA, starter odwrotny A', TCAGATCACACCACACAGCA, starter do przodu B, CAGTTGTCTTTAGTTTACTCAGCATCAG, starter odwrócony B', GATAATCGCGAACATCTTCAGGTT17.</li>
	<li>Skrzyżowanie PTHcre+/+ mice16 z myszami Rosa-mTmG18. Odstawienie od łóżka PTHcre; mTmG szczenięta w wieku 4 tygodni.</li>
	<li>Znieczulenie 8 - 10 tygodniowego PTHcre; Myszy mTmG przez wstrzyknięcie dożylnie tribromoetanolu (Avertin) w dawce 0,6 mg/g masy ciała lub innych środków, takich jak ketamina/ksylazyna. Stosować buprenorfinę w dawce 0,1 mg/kg s.c. co 12 godzin jako środek przeciwbólowy przez 48 godzin po zabiegu zgodnie z zatwierdzonym protokołem. Zapewnić odpowiednią głębokość znieczulenia za pomocą odruchu wycofania szczypania palców u nóg lub w inny sposób. Ułóż zwierzę w pozycji leżącej.</li>
	<li>Rozciągnij i przygotuj brzuszną okolicę szyi, goląc skórę za pomocą ostrzy o pojedynczej krawędzi. Zdezynfekuj ogoloną skórę płatkiem antyseptycznym z jodonem powidonu.</li>
	<li>Przykryj zwierzę sterylnymi obłożnikami chirurgicznymi, aby zmniejszyć zanieczyszczenie pola operacyjnego i użyj autoklawowanych narzędzi mikrochirurgicznych do zabiegu chirurgicznego.</li>
	<li>Wytnij 2 cm podłużne nacięcie w skórze za pomocą skalpela chirurgicznego. Wypreparuj powięź i odepchnij gruczoły ślinowe na bok przez rozwarstwienie zakrzywionymi ząbkowanymi kleszczami.</li>
	<li>Pod mikroskopem preparacyjnym przy użyciu światła halogenowego i powiększenia 4 - 5x przeciąć i oddzielić mięśnie przytchawicze za pomocą ostrych końcówek kleszczy i odsłonić tchawicę.</li>
	<li>Zidentyfikuj tarczycę z prawym i lewym płatem znajdującym się obok tchawicy.</li>
	<li>Przełącz źródło światła na światło fluorescencyjne i uwidocznij dwa zielonofluorescencyjne przytarczyce. 
	UWAGA: Zazwyczaj dwa przytarczyce znajdują się na powierzchni tarczycy lub w jej pobliżu, ale czasami znajdują się dalej.</li>
	<li>Ostrożnie usuń zielone przytarczyce za pomocą kleszczy chirurgicznych i nożyczek. Użyj sterylnej gazy do hemostazy i dokładnie sprawdź wzdłuż tchawicy, aby upewnić się, że cała zielona tkanka została usunięta.</li>
	<li>Zamknij mięśnie przytchawicze przez przerwanie szwu za pomocą szwów 6-0 polyglactin 910. Zamknij nacięcie skóry za pomocą szwu Halsted za pomocą szwów 6-0 polyglactin 910.</li>
	<li>Opcjonalnie: Wstrzyknąć myszom sterylny, normalny 0,9% roztwór chlorku sodu o stężeniu 10 μl / g w celu wymiany płynów.</li>
	<li>Umieścić zwierzęta po operacji w oddzielnej klatce na ciepłym inkubatorze (37 °C) w celu odzyskania temperatury ciała. Gdy myszy się obudzą i znajdą się w pozycji leżącej, połóż na podłodze klatki granulkę i wodę z odrobiną żelatyny.</li>
	<li>Po okresie obserwacji pooperacyjnej trwającym 2 godziny należy zwrócić mysz do pomieszczenia dla zwierząt i postępować zgodnie z lokalnymi wymaganiami dotyczącymi opieki pooperacyjnej.</li>
	<li>3 dni po paratyreoidektomii należy pobrać 10 μl krwi ogonowej i zmierzyć zjonizowany we krwi Ca++ za pomocą analizatora, takiego jak analizator Ca++/pH układu gazometrycznego. Udana paratyreoidektomia skutkuje jonizacją Ca ++ we krwi równą lub niższą niż -2SD u myszy kontrolnych operowanych pozorowo (1,20 mmol / L w naszych eksperymentach n = 30).</li>
</ol>
2. Myszy PTH-cre-iDTR
<ol>
	<li>Zdobądź myszy PTHcre + i DTRfl / fl w wieku 8 - 10 tygodni do krycia.</li>
	<li>Krzyżowanie wsteczne myszy PTHcre (mieszane 129; tło FVB) z myszami C57BL/6 przez 6 pokoleń, aby uzyskać myszy z tłem C57BL/6.</li>
	<li>Chów wsobny myszy PTHcre+ (tło C57BL/6) w celu uzyskania PTHcre +/+ myszy < klasa sup = "xref">17. 
	UWAGA: Aby przeprowadzić genotypowanie, DNA z końcówek ogonów myszy zostało wyekstrahowane i wykorzystane do PCR. Startery genotypowania: starter do przodu A, CCTGTCAAGGATGTGGAAGA, starter odwrotny A', TCAGATCACACCACACAGCA, starter do przodu B, CAGTTGTCTTTAGTTTACTCAGCATCAG, starter odwrotny B', GATAATCGCGAACATCTTCAGGTT17.</li>
	<li>Połącz PTHcre+/+ mice16 z DTRfl/fl mice19, aby uzyskać myszy PTHcre-iDTR.</li>
	<li>Przygotować roztwór DT, rozcieńczając proszek toksyny błoniczej sterylnym roztworem soli fizjologicznej do stężenia 0,5 μg/ml. Przefiltrować jałowo i przechowywać podwielokrotności w temperaturze -80 °C.</li>
	<li>Wybierz 8-10 tygodniowe myszy PTHcre-iDTR do eksperymentu iniekcyjnego. Rozmrozić podwielokrotność DT do temperatury pokojowej, podać DT dootrzewnowo w stężeniu 5 μg/kg (10 μl/g) masy ciała zwierzęcia. Aby uzyskać maksymalną skuteczność i najmniejszą toksyczność, podawanie DT powtarza się w sumie 2 wstrzyknięcia w odstępie 3 dni17.</li>
	<li>3 dni po drugim wstrzyknięciu należy pobrać 10 μl krwi ogonowej od każdej myszy PTHcre-iDTR/PTHcre-iDTR-mTmG i zmierzyć poziom Ca++ we krwi za pomocą analizatora Ca++/pH systemu gazometrii. 
	UWAGA: Myszy z zjonizowanym we krwi Ca ++ niższym niż 1,18 mmol / L definiujemy jako myszy z niedoczynnością przytarczyc, co jest równe 2SD poniżej średniej myszy kontrolnych, którym wstrzyknięto nośnik (n = 22).</li>
</ol>

<ol><li>Brandi, M. L., Brown, E. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBrandi%2C+ML+%22Hypoparathyroidism%22">Hypoparathyroidism</a>. , Springer. (2015).</li>
<li>van Abel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+control+of+renal+Ca%282%2B%29+transport+proteins+by+parathyroid+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Coordinated control of renal Ca(2+) transport proteins by parathyroid hormone.</a> Kidney Int. 68, 1708-1721 (2005).</li>
<li>Sebastian, E. M., Suva, L. J., Friedman, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+intermittent+PTH%281-34%29+and+PTH%287-34%29+on+bone+microarchitecture+and+aortic+calcification+in+experimental+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Differential effects of intermittent PTH(1-34) and PTH(7-34) on bone microarchitecture and aortic calcification in experimental renal failure.</a> Bone. 43, 1022-1030 (2008).</li>
<li>Rodriguez-Ortiz, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+deficiency+reduces+circulating+levels+of+FGF23%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Calcium deficiency reduces circulating levels of FGF23.</a> J Am Soc Nephrol. 23, 1190-1197 (2012).</li>
<li>Liao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+Fibroblast+Growth+Factor+23+and+Biochemical+and+Bone+Histomorphometric+Alterations+in+a+Chronic+Kidney+Disease+Rat+Model+Undergoing+Parathyroidectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Relationship between Fibroblast Growth Factor 23 and Biochemical and Bone Histomorphometric Alterations in a Chronic Kidney Disease Rat Model Undergoing Parathyroidectomy.</a> PloS one. 10, e0133278(2015).</li>
<li>Fox, J., Care, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+low+calcium+and+low+phosphorus+diets+on+the+intestinal+absorption+of+water+in+intact+and+parathyroidectomized+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif+Tissue+Int%22%5BJournal%5D)">Effect of low calcium and low phosphorus diets on the intestinal absorption of water in intact and parathyroidectomized pigs.</a> Calcif Tissue Int. 31, 253-255 (1980).</li>
<li>Finco, D. R., Brown, S. A., Ferguson, D. C., Crowell, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+parathyroidectomy+of+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Selective parathyroidectomy of the dog.</a> Can J Vet Res. 57, 288-292 (1993).</li>
<li>Can, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+allotransplantation+in+rabbits+without+cultivation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Parathyroid allotransplantation in rabbits without cultivation.</a> Int J Clin Exp Med. 7, 280-284 (2014).</li>
<li>Dunn, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanoblasts+in+the+stroma+of+the+parathyroid+glands+of+strain+C58+mice%5BTitle%5D)+AND+%22j+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Melanoblasts in the stroma of the parathyroid glands of strain C58 mice.</a> j Natl Cancer Inst. 10, 725-733 (1949).</li>
<li>CRIVER. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.criver.com/products-services/basic-research/rodent-surgery/soft-tissue-procedures">http://www.criver.com/products-services/basic-research/rodent-surgery/soft-tissue-procedures</a> (2010).</li>
<li>Sakai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+development+in+immobilized+bone+is+suppressed+by+parathyroidectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Metab%22%5BJournal%5D)">Osteoclast development in immobilized bone is suppressed by parathyroidectomy in mice.</a> J Bone Miner Metab. 23, 8-14 (2005).</li>
<li>Miao, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+abnormalities+in+Pth-null+mice+are+influenced+by+dietary+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Skeletal abnormalities in Pth-null mice are influenced by dietary calcium.</a> Endocrinology. 145, 2046-2053 (2004).</li>
<li>Gunther, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+ablation+of+parathyroid+glands+reveals+another+source+of+parathyroid+hormone%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetic ablation of parathyroid glands reveals another source of parathyroid hormone.</a> Nature. 406, 199-203 (2000).</li>
<li>Hough, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activating+calcium-sensing+receptor+mutation+in+the+mouse+is+associated+with+cataracts+and+ectopic+calcification%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Activating calcium-sensing receptor mutation in the mouse is associated with cataracts and ectopic calcification.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 13566-13571 (2004).</li>
<li>Hannan, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Calcilytic+Agent+NPS+2143+Rectifies+Hypocalcemia+in+a+Mouse+Model+With+an+Activating+Calcium-Sensing+Receptor+%28CaSR%29+Mutation%3A+Relevance+to+Autosomal+Dominant+Hypocalcemia+Type+1+%28ADH1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The Calcilytic Agent NPS 2143 Rectifies Hypocalcemia in a Mouse Model With an Activating Calcium-Sensing Receptor (CaSR) Mutation: Relevance to Autosomal Dominant Hypocalcemia Type 1 (ADH1).</a> Endocrinology. 156, 3114-3121 (2015).</li>
<li>Libutti, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+gland-specific+deletion+of+the+mouse+Men1+gene+results+in+parathyroid+neoplasia+and+hypercalcemic+hyperparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Parathyroid gland-specific deletion of the mouse Men1 gene results in parathyroid neoplasia and hypercalcemic hyperparathyroidism.</a> Cancer Res. 63, 8022-8028 (2003).</li>
<li>Bi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+Toxin-+and+GFP-Based+Mouse+Models+of+Acquired+Hypoparathyroidism+and+Treatment+with+a+Long-Acting+Parathyroid+Hormone+Analog%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Diphtheria Toxin- and GFP-Based Mouse Models of Acquired Hypoparathyroidism and Treatment with a Long-Acting Parathyroid Hormone Analog.</a> J Bone Miner Res. , (2015).</li>
<li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45, 593-605 (2007).</li>
<li>Buch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Cre-inducible+diphtheria+toxin+receptor+mediates+cell+lineage+ablation+after+toxin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A Cre-inducible diphtheria toxin receptor mediates cell lineage ablation after toxin administration.</a> Nat Methods. 2, 419-426 (2005).</li>
<li>Dunn, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanoblasts+in+the+stroma+of+the+parathyroid+glands+of+strain+C58+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Melanoblasts in the stroma of the parathyroid glands of strain C58 mice.</a> J Natl Cancer Inst. 10, 725-733 (1949).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Demonstrujemy technikę paratyreoidektomii pod kontrolą GFP przy użyciu transgenicznych myszy z selektywną ekspresją GFP w przytarczycach. W PTHcre; U myszy mTmG, podwójna fluorescencja (zielony GFP w komórkach z ekspresją Cre i czerwony pomidor w komórkach bez ekspresji Cre) umożliwiła nam wyraźną identyfikację i precyzyjne usunięcie wszystkich gruczołów przytarczyc bez usuwania tarczycy. Chociaż preferujemy stosowanie myszy mTmG o podwójnej fluorescencji w celu identyfikacji fluorescencyjnej czerwonej tkanki nieprzytarczycowej, nasza procedura powinna również działać dobrze przy użyciu pojedynczych fluorescencyjnych zwierząt, takich jak pomidor czerwony (B6. Mysz Cg-Ct(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J). Zabieg jest stosunkowo łatwy do wykonania, wymaga około 20 minut na mysz i skutkuje ciężkim i utrzymującym się fenotypem przytarczyc.
Ponadto kolejną zaletą przytarczyc GFP-dodatnich jest łatwość wykrywania nieprawidłowych przytarczyc. Nasze badania wykazują błędną lokalizację przytarczyc u około jednej czwartej myszy B6 (ryc. 1), które są łatwo wykrywane w naszym modelu mysim przez zieloną fluorescencję. W przeciwieństwie do tyreoidektomii, nasza technika pozwala uniknąć usunięcia tarczycy, co wiąże się z późniejszą koniecznością wymiany hormonów tarczycy i nieznanym efektem usunięcia komórek C tarczycy wytwarzających kalcytoninę. Znakowane fluorescencyjnie przytarczyce mogą być również wykorzystywane do innych badań, które wymagają izolacji przytarczyc. Ograniczeniem tego modelu jest wymóg poddania się zabiegowi chirurgicznemu. Wymagane są podstawowe umiejętności mikrochirurgiczne oraz mikroskop preparacyjny z fluorescencyjnym źródłem światła.
Zademonstrowano drugą technikę generowania myszy z niedoczynnością przytarczyc, która eliminuje potrzebę operacji. Myszy PTHcre-iDTR leczone toksyną błonicy wykazują łagodniejszy fenotyp niedoczynności przytarczyc, ale po prostu wymagają wstrzyknięcia DT dootrzewnowo myszy. Kluczową częścią generowania tego modelu była optymalizacja dawki i schematu dawkowania. Wysokie dawki DT prowadziły do toksyczności, ale niskie dawki zmniejszały skuteczność tego podejścia. Ustaliliśmy, że schemat dawkowania składający się z 2 wstrzyknięć w dawce 5 μg/kg, podawanych w odstępie 3 dni, powodował wiarygodną i stabilną hipokalcemię z zerową lub minimalną śmiertelnością.
Ostatecznie mamy nadzieję, że te dwa podejścia dostarczą użytecznych mysich modeli nabytej niedoczynności przytarczyc. Korzystając z nowatorskiego, długo działającego PTH, odnotowaliśmy pierwsze zastosowanie obu tych modeli w określaniu skuteczności nowych leków na niedoczynność przytarczyc17.

Od czasu pierwszego systematycznego opisu gruczołów przytarczyc u człowieka i kilku innych gatunków przez Sandströma w 1880 roku 1, zrozumienie znaczenia tego małego organu endokrynnego dla fizjologii i choroby człowieka stale się poprawia. Przytarczyce wydzielają parathormon (PTH), główny regulator metabolizmu wapnia. PTH jest również ważnym hormonem dla homeostazy fosforanów i obrotu kostnego 1,2. Przypadkowe usunięcie lub uszkodzenie przytarczyc podczas operacji szyi jest najczęstszą przyczyną niedoczynności przytarczyc, choroby charakteryzującej się niskim poziomem wapnia we krwi, niskim PTH i podwyższonym poziomem fosforu 1.
Aby lepiej badać nabytą niedoczynność przytarczyc i testować nowe terapie, potrzebne są niezawodne i łatwo dostępne modele myszy. Myszy są szeroko wykorzystywane w badaniach, ponieważ u tego gatunku dostępna jest szeroka gama narzędzi genetycznych, co pozwala na zaawansowane badania mechanistyczne in vivo. Jednakże, podczas gdy chirurgiczna paratyreoidektomia (PTX) może być stosowana u szczurów 2,3,4,5, oraz większych ssaków 6,7,8, jest to technicznie bardzo trudne ze względu na mały rozmiar gruczołów i ich zmienny rozkład anatomiczny 9. Dlatego tyreo-przytarczyce (TPTX) jest zwykle wykonywana u myszy, u których tarczyca i przytarczyce są usuwane razem 10. Jednak niski poziom hormonów tarczycy jest potencjalnym czynnikiem zakłócającym w eksperymentach, komplikując ten model. Ponadto limfocyty C w obrębie tarczycy, które wytwarzają kalcytoninę, hormon ważny w homeostazie wapnia u gryzoni, są również tracone po usunięciu tarczycy 11.
Istnieje kilka genetycznych modeli niedoczynności przytarczyc u myszy, w tym mysz PTH-null 12, mysz GCM2-null 13, oraz mysz Nuf z mutacją aktywującą w receptorze wyczuwającym wapń (CaSR) 14,15. Jednak te wady genetyczne są już obecne podczas rozwoju embrionalnego, a zatem funkcja przytarczyc jest upośledzona już podczas embriogenezy. Może to wpływać na rozwój narządów, takich jak szkielet. Kontrastuje to z pacjentami z pooperacyjną niedoczynnością przytarczyc, którzy nabywają chorobę w późniejszym życiu. Co więcej, niektóre z tych modeli myszy wykazują wczesną śmiertelność i zmniejszoną płodność, co dodatkowo komplikuje ich użytkowanie 12,13,14.
Opracowaliśmy dwa nowe modele myszy dla nabytej niedoczynności przytarczyc. Wykorzystanie genetycznie zmodyfikowanych myszy, które wykazują ekspresję GFP specyficznie w przytarczycach, pozwala na łatwą identyfikację przytarczyc do chirurgicznego usunięcia bez usuwania tarczycy. Ta mysz została wygenerowana przez skrzyżowanie myszy PTH-Cre, która wyraża rekombinazę Cre pod kontrolą promotora PTH o mocy 5,5 kb 16 z myszą ROSAmTmG. Wynikowy PTHcre; Myszy mTmG wyrażają zielone białko fluorescencyjne specyficznie w komórkach przytarczyc. Drugi model myszy wykorzystuje ten sam PTH-Cre, tym razem do usunięcia kasety STOP z indukowalnej myszy DTR, co powoduje ekspresję receptora toksyny błoniczej specyficznie w przytarczycach. Ogólnoustrojowe podawanie DT niszczy komórki przytarczyc, powodując niedoczynność przytarczyc zwierząt bez operacji.
Dwa modele myszy przedstawione w tym badaniu wykazują stabilny fenotyp hipokalcemiczny w ciągu trzymiesięcznego okresu obserwacji. Procedury są łatwe do wykonania, fenotyp jest powtarzalny, a myszy z niedoczynnością przytarczyc wykazują wysoki wskaźnik przeżywalności 17.

<table><tbody><tr><td>Myszy ROSAmT/mG</td><td>Myszy Jackson Laboratory</td><td>7676</td><td></td></tr><tr><td>PTH-Cre</td><td>Myszy</td> iDTRmice Jackson Laboratory <td>7900</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 poliglaktyna 910 z igłą</td><td>Ethicon, Inc</td><td>J510G</td><td></td></tr><tr><td>Bezpieczne żyletki jednokrawędziowe</td><td>Amerykańska firma</td> <td>zajmująca się maszynką do golenia66-0089</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowa</td><td>maszynka do golenia z piór skalpela Co., LTD</td><td>72042-11</td><td></td></tr><tr><td>Podkładki przygotowawcze z powidonem i jodem</td><td>Dynarex Corporation</td><td>1108</td><td></td></tr><tr><td>Gaza warstwowa</td><td>Busse. Inc</td><td>BHD707</td><td></td></tr><tr><td>0,9% roztwór chlorku sodu</td><td>HOSPIRA Worldwide, Inc</td><td>07983-09</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 29 g strzykawka insulinowa</td><td>BECTON DICKINSON</td><td>329622</td><td></td></tr><tr><td>Serwety chirurgiczne do nacięć</td><td>3M</td><td>6640EZ</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumstar Biology</td><td>Roboz Surgical Instrument Co., Inc</td><td>RS-4984</td><td></td></tr><tr><td>Mikro nożyczki sprężynowe do preparowania</td><td>Roboz Surgical Instrument Co., Inc</td><td>RS-5605</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt igły</td><td>MILTEX., Inc</td><td>V98-42</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-tribromethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>2-metylo-2-butanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>152463</td><td>Do rozpuszczenia 2,2,2-tribrometalu</td></tr><tr><td>Toksyna błonicy w proszku</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0564</td><td>Rozpuścić w 0,9% roztworze chlorku sodu o stężeniu 1 mg/ml jako roztwór podstawowy w -80 &#176; C</td></tr><tr><td>Multicap Probówki kapilarne do pobierania krwi</td><td>Siemens Healthcare Diagnostics Ltd</td><td>855578</td><td>Do pobierania krwi w analizie iCa2+ za pomocą RapidLab 348 Analizator Ca2+/pH</td></tr><tr><td>RapidLab 348 Ca2+/pH</td><td>Siemens Healthcare</td><td></td><td>Do analizy iCa2+</td></tr></tbody></table>

dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów gfp i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej

Two Techniques to Create Hypoparathyroid Mice: Parathyroidectomy Using GFP Glands and Diphtheria-Toxin-Mediated Parathyroid Ablation

Niedoczynność przytarczyc (HP) to zaburzenie charakteryzujące się niskim poziomem PTH, który prowadzi do hipokalcemii, hiperfosfatemii i niskiego obrotu kostnego. Najczęstszą przyczyną choroby jest przypadkowe usunięcie przytarczyc podczas operacji tarczycy. Potrzebne są nowatorskie terapie HP, ale ich testowanie wymaga wiarygodnych modeli zwierzęcych nabytego HP. 
Tutaj demonstrujemy generowanie dwóch modeli myszy nabytych HP. W modelu GFP-PTX myszy z białkiem zielonej fluorescencji (GFP) ulegającym specyficznej ekspresji w przytarczycach (PTHcre-mTmG) stworzono przez skrzyżowanie myszy PTHcre + z myszami Rosa-mTmGfl / fl. Zielone fluoryzujące przytarczyce można łatwo zidentyfikować pod fluorescencyjnym mikroskopem preparacyjnym, a paratyreoidektomię wykonuje się w mniej niż 20 minut. Po operacji pod kontrolą fluorescencji myszy są głęboko hipokalcemiczne. W przeciwieństwie do tradycyjnej tyreo-przytarczyc, to precyzyjne podejście chirurgiczne pozostawia tarczycę i funkcję tarczycy nienaruszone. Drugi model, który nie wymaga operacji, opiera się na podejściu opartym na toksynie błoniczej. Myszy PTHcre-iDTR, które wyrażają receptor toksyny błoniczej (DT) specyficznie w przytarczycach, zostały wygenerowane przez skrzyżowanie indukowalnej myszy DTR z myszą PTHcre. Komórki przytarczyc stają się w ten sposób wrażliwe na toksynę błoniczą (DT) i mogą być selektywnie niszczone przez systemowe wstrzykiwanie myszom DT. Uzyskany fenotyp hipokalcemiczny, jest stabilny.

Lokalizacja przytarczyc
W pierwszej kolejności zarejestrowano rozmieszczenie przytarczyc u 54 myszy PTHcre-mTmG w obserwacji pod fluorescencyjnym mikroskopem sekcyjnym. U 74% (40/54) myszy stwierdzono dwie zielone przytarczyce (Rycina 1A, C, E), natomiast u 26% (14/54) myszy wystąpiła dodatkowa, trzecia przytarczyca (Rycina 1B, D, F). Nie zaobserwowano żadnej myszy z pojedynczą przytarczycą lub więcej niż trzema przytarczycami. Zazwyczaj przytarczyce znajdowały się w pobliżu górnej krawędzi tarczycy (58%, 71/122; Rycina 1A(1,2), B(1,2), C(2), D(1,2), E(2), F(3)). 27% (33/122) przytarczyc znajdowało się w pobliżu dolnej krawędzi tarczycy (Rycina 1C(1), D(3), F(1)), a 13% (16/122) było zlokalizowanych w oddaleniu od tarczycy (Rycina 1B(3), E(1), F(2)). Nasze wyniki są zgodne z wcześniejszymi doniesieniami dotyczącymi zmiennych lokalizacji przytarczyc i stanowią ich rozwinięcie20.
Myszy GFP-PTX
Cały zabieg, od znieczulenia do zamknięcia nacięcia skóry, trwał około 20 min na mysz. Współczynnik przeżywalności myszy pooperacyjnych w ciągu 3-miesięcznego okresu obserwacji wyniósł 96,3% (53/55). U 92,4% (49/53) myszy GFP-PTX stwierdzono poziomy zjonizowanego wapnia o 2 SD niższe od średniej u myszy kontrolnych poddanych operacji pozorowanej lub jeszcze niższe. Fenotyp niedoczynności przytarczyc u myszy GFP-PTX (hipokalcemia, niski poziom PTH i podwyższone stężenie fosforanów w surowicy) był stabilny przez cały 3-miesięczny czas obserwacji. Co ważne, funkcja tarczycy nie różniła się od zwierząt z operacją pozorowaną 3 miesiące po zabiegu (TSH = 42 ± 24 vs. 30 ± 15 mU/L, p = 0,171; T4 = 3,0 ± 0,6 vs. 3,1 ± 0,9 µg/dL, p = 0,707 (Rysunek 2).
Myszy PTH-cre-iDTR
Myszy PTH-Cre-iDTR po wstrzyknięciu DT rozwinęły niedoczynność przytarczyc (niski poziom zjonizowanego wapnia we krwi, podwyższony poziom fosforu we krwi oraz nieodpowiednio niskie lub prawidłowe poziomy PTH). Wcześniej zgłosiliśmy, że niewielka liczba komórek dodatnich pod kątem PTH unika ablacji toksyną błoniczą, co wyjaśnia mierzalny poziom krążącego PTH, a w konsekwencji nieco łagodniejszy fenotyp tych myszy17.
Niedoczynność przytarczyc u myszy GFP-PTX oraz myszy PTH-cre-iDTR
Znaczące obniżenie poziomu Ca++ we krwi oraz poziomu PTH w surowicy zaobserwowano u myszy GFP-PTX 3 dni po operacji w porównaniu do poziomów u myszy poddanych operacji pozorowanej (Ca++ = 1.05 ± 0.40 vs. 1.30 ± 0.03 mmol/L, p &lt; 0.05; PTH=32 ± 22 vs. 580 ± 137 pg/mL, p &lt; 0.05). Fenotyp niedoczynności przytarczyc był stabilny podczas 3-miesięcznego okresu obserwacji (Rycina 3A, przedrukowano za zgodą z (reference#17)). Po 2 iniekcjach DT w dawce 5 µg/kg w odstępach 3-dniowych (dawka i schemat zoptymalizowane pod kątem użycia minimalnej ilości DT w celu uzyskania maksymalnego fenotypu niedoczynności przytarczyc), u myszy PTH-cre-iDTR, którym wstrzyknięto DT, wystąpiła istotna hipokalcemia oraz obniżony poziom PTH w porównaniu z myszami z grupy kontrolnej otrzymującymi nośnik, co utrzymywało się przez 90-dniowy okres obserwacji (Ca++ = 1.10 ± 0.07 mmol/L vs. 1.26 ± 0.05 mmol/L, p &lt; 0.05; PTH = 218 ± 156 pg/mL vs. 572 ± 164 pg/mL, p &lt; 0.05) (Rycina 3B, przedrukowano za zgodą z (reference#17)).
<img alt="Obrazowanie fluorescencyjne podczas operacji tarczycy; seria schematów; wizualizacja markerów anatomicznych; proces chirurgiczny." src="/files/ftp_upload/55010/55010fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Reprezentatywne obrazy różnych lokalizacji przytarczyc u 54 myszy PTHcre-mTmG pod fluorescencyjnym mikroskopem sekcyjnym. Myszy miały albo dwie (A, C, E), albo trzy (B, D, F) zielone przytarczyce. Większość przytarczyc znajdowała się w pobliżu górnej krawędzi (A(1,2), B(1,2), C(2), D(1,2), E(2), F(3) lub w pobliżu dolnej krawędzi tarczycy (C(1), D(3), F(1)). W rzadkich przypadkach niektóre były zlokalizowane ektopowo (B(3), E(1), F(2)). <a href="https://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/55010/55010fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Poziomy TSH i T4 we krwi po GFP-PTX; wykres słupkowy w porównaniu z grupą kontrolną (sham); analiza hormonalna." src="/files/ftp_upload/55010/55010fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Poziomy TSH i T4 u myszy GFP-PTX. 3 miesiące po GFP-PTX pobrano surowicę do pomiaru TSH i T4. U myszy GFP-PTX stwierdzono stężenia TSH (42 ± 24 mU/L) (A) oraz stężenia T4 (3,0 ± 0,6 μg/dL) (B), które nie różniły się od wartości u myszy kontrolnych (TSH = 30 ± 15 mU/L, p = 0,171, n = 11, T4 = 3,1 ± 0,9, p = 0,707, n = 11). <a href="https://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/55010/55010fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykresy poziomu Ca\^{++} we krwi i PTH; analiza długoterminowa po operacji GFP-PTX i wstrzyknięciu DT." src="/files/ftp_upload/55010/55010fig3.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Poziomy Ca++ we krwi i PTH u myszy GFP-PTX oraz myszy PTH-cre-iDTR po wstrzyknięciu DT. Zarówno myszy GFP-PTX (A), jak i myszy PTH-cre-iDTR po wstrzyknięciu DT (B) wykazywały stabilną hipokalcemię oraz obniżone poziomy PTH w ciągu 3-miesięcznego okresu obserwacji (N = 6 - 8, ***p &lt; 0.001) (reprodukcja za zgodą z odniesienia#17). <a href="https://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/55010/55010fig3large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.</a>

Myszy z nabytą niedoczynnością przytarczyc byłyby przydatne do badania nowych terapii lekowych na niedoczynność przytarczyc. Zademonstrowano dwie procedury tworzenia takich myszy. Mysz GFP-PTX jest generowana przez chirurgiczną paratyreoidektomię pod kontrolą zielonych fluoryzujących przytarczyc. Drugie, niechirurgiczne podejście opiera się na specyficznej dla przytarczyc ekspresji receptora toksyny błoniczej.

Dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów GFP i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej

Hypoparathyroidism (HP) is a disorder characterized by low levels of PTH which lead to hypocalcemia, hyperphosphatemia, and low bone turnover. The most ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest stworzenie dwóch modeli mysich nabytego niedoczynności przytarczyc, które są łatwe w obsłudze, wykazują stabilny fenotyp i pozostawiają funkcję tarczycy nienaruszoną. Główną zaletą tych dwóch modeli jest to, że umożliwiają one precyzyjne usunięcie przytarczyc u myszy – albo poprzez operację prowadzoną z wykorzystaniem fluorescencji, albo poprzez specyficzną dla PTH ekspresję receptora toksyny błoniczej, co pozwala na selektywne ukierunkowanie i zniszczenie komórek bez zakłócania pracy sąsiadującej tarczycy. Mamy nadzieję, że nasze modele mysie pozwolą na udzielenie odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie niedoczynności przytarczyc.Na przykład, czy terapie analogami PTH mogą pomóc w utrzymaniu prawidłowego poziomu wapnia w surowicy bez zwiększania wydalania wapnia z moczem? Modele te mogą być również wykorzystywane do badania innych kwestii klinicznych w niedoczynności przytarczyc. Na przykład, czy niedoczynność przytarczyc wpływa na wytrzymałość kości i czy zmienia się ona pod wpływem leczenia?Odpowiedzi na takie pytania są trudne do uzyskania u pacjentów, jednak w tym celu można wykorzystać wspomniane modele mysie. Należy rozpocząć od znieczulenia myszy w wieku od 8 do 10 tygodni, wykazujących ekspresję GFP specyficznie w przytarczycach, zgodnie z zatwierdzonym protokołem. Zwierzę należy ułożyć w pozycji grzbietowej i upewnić się, że głębokość znieczulenia jest odpowiednia, sprawdzając brak odruchu cofania łapy po uciśnięciu palca lub stosując inną metodę.Rozciągnij brzuszny odcinek szyi i przygotuj obszar do operacji poprzez ogolenie futra. Zdezynfekuj ogoloną skórę za pomocą antyseptycznego wkładki z jodopowidonomem, a następnie przygotuj miejsce nacięcia, stosując chirurgiczne mycie i płukanie alkoholem zgodnie z zatwierdzonym protokołem. Następnie przykryj zwierzę sterylnymi chustami chirurgicznymi, aby ograniczyć zanieczyszczenie pola operacyjnego.Po wykonaniu skalpelem chirurgicznym nacięcia podłużnego o długości 2 centymetrów, należy użyć zakrzywionych pęset z ząbkami do rozdzielenia powięzi i odsunąć ślinianki na bok. Następnie, obserwując pole operacyjne przez mikroskop stereoskopowy, należy za pomocą ostrych pęset przeciąć i rozdzielić mięśnie przytchawicze, aby odsłonić tchawicę. Należy zidentyfikować prawy i lewy płat tarczycy znajdujące się obok tchawicy.Następnie przełącz źródło światła na światło fluorescencyjne i zwizualizuj dwie zielone fluorescencyjne przytarczyce. Gryzonie zazwyczaj posiadają tylko dwie przytarczyce. Jeśli nie można zidentyfikować dwóch przytarczyc obok tarczycy po każdej stronie, należy podejrzewać ektopowe położenie przytarczyc i przeprowadzić dokładne poszukiwania wzdłuż tchawicy.Następnie za pomocą pęsety chirurgicznej i nożyczek ostrożnie usuń zielone przytarczyce i dokładnie sprawdź obszar wzdłuż tchawicy, aby upewnić się, że cała zielona tkanka została usunięta. Do hemostazy użyj sterylnej gazy. Zamknij mięśnie przytchawicze za pomocą szwów przerywanych.Zamknąć nacięcie skóry szwami typu Halstead. Umieścić zwierzę pooperacyjne w oddzielnej klatce na podkładce grzewczej w celu przywrócenia temperatury ciała. Po przebudzeniu myszy umieścić na dnie klatki pokarm w formie peletu, wodę oraz niewielką ilość pożywienia żelowego.Po dwugodzinnym okresie obserwacji pooperacyjnej należy przenieść mysz z powrotem do pomieszczenia dla zwierząt. Trzy dni po paratyreidektomii należy przeanalizować 10 µL krwi z ogona pod kątem stężenia wapnia zjonizowanego, korzystając z analizatora, takiego jak system do analizy gazometrii krwi, wapnia i pH. Jeśli paratyreidektomia przebiegła pomyślnie, stężenie zjonizowanego wapnia we krwi będzie równe lub niższe niż minus dwa odchylenia standardowe wartości uzyskanych u myszy z grupy kontrolnej poddanych operacji pozorowanej.Rozpocznij od przygotowania roztworu toksyny błoniczej poprzez rozcieńczenie proszku toksyny błoniczej w sterylnym roztworze soli fizjologicznej do stężenia 0,5 µg/ml. Roztwór przefiltruj sterylnie i podziel na alikwoty. Wstrzyknij 5 µg/kg masy ciała toksyny błoniczej myszom w wieku od 8 do 10 tygodni, wykazującym specyficzną ekspresję receptorów toksyny błoniczej w przytarczycach.Trzy dni po drugim wstrzyknięciu toksyny błoniczej należy przeanalizować 10 µL krwi z ogona pod kątem poziomu zjonizowanego wapnia, analogicznie jak poprzednio. Poniżej przedstawiono reprezentatywne obrazy różnych lokalizacji przytarczyc u myszy wykazujących ekspresję GFP specyficznie w przytarczycach. Myszy posiadały dwie lub trzy zielone przytarczyce.Większość przytarczyc znajdowała się w pobliżu górnej lub dolnej krawędzi tarczycy. W rzadkich przypadkach niektóre przytarczyce były zlokalizowane ektopowo. Jedną z zalet naszego modelu mysiego jest fakt, że tarczyca pozostaje nienaruszona.Na tej rycinie przedstawiono poziomy TSH u myszy GFP-PTX trzy miesiące po paratyreidektomii. Rycina ta przedstawia pomiary T4. U myszy GFP-PTX stężenia TSH oraz stężenia T4 nie różniły się od wartości u myszy kontrolnych.Na tym obrazie przedstawiono poziomy wapnia we krwi oraz poziomy PTH u myszy GFP-PTX. Na tym obrazie przedstawiono poziomy wapnia we krwi oraz poziomy PTH u myszy PTHcre-iDTR po wstrzyknięciu toksyny błoniczej. Zarówno u myszy GFP-PTX, jak i u myszy PTHcre-iDTR po wstrzyknięciu DT wystąpiła stabilna hipokalcemia oraz obniżone poziomy PTH w trzymiesięcznym okresie obserwacji.Po opanowaniu techniki, cała procedura paratyreidektomii z prowadzeniem GFP może zająć około 20 minut. Pojedyncza iniekcja toksyny błoniczej zajmuje nie więcej niż minutę, jeśli jest przeprowadzana prawidłowo. W wyniku tej procedury u myszy rozwija się niedoczynność przytarczyc, dzięki czemu mogą one służyć jako przedkliniczny model choroby.Można sformułować pytania badawcze, takie jak skuteczność różnych analogów hormonu PTH w leczeniu niedoczynności przytarczyc. Należy pamiętać, że toksyna błonicza jest niebezpieczna i pracownicy powinni posiadać standardowe szczepienia przeciwko toksynie błoniczej. Podczas wykonywania tych procedur należy zawsze stosować osobiste środki ochrony, takie jak maski i rękawiczki.

two-techniques-to-create-hypoparathyroid-mice-parathyroidectomy-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Film wyjaśnia krokową metodę chirurgiczną do ortotopowego wszczepienia fragmentu guza od dawcy nowotworowego do trzustki myszy z nienowotworowym biorcą w celu rozwoju raka trzustki. Ortotopowo wszczepiony PDAC może dokładniej uchwycić mikrośrodowisko tkanek ludzkiego raka trzustki niż konwencjonalne modele podskórne (SC).

Ortotopowy przeszczep guza homograftu: technika generowania mysich modeli guza trzustki

Ten film opisuje procedurę ortotopowej inokulacji komórek raka tarczycy do tarczycy mysich modeli, które mogą następnie służyć jako cenna platforma do oceny kancerogenezy i odkrywania potencjalnych strategii leczenia.

Ortotopowa inokulacja komórek raka tarczycy do mysiej tarczycy: procedura ustalania ortotopowego modelu myszy raka tarczycy

Generacja ortotopowego mysiego modelu anaplastycznego raka tarczycy jest opisana tutaj. Technika ta polega na chirurgicznym umieszczaniu ludzkich komórek anaplastycznego raka tarczycy w tarczycy myszy z niedoborem odporności, tworząc w ten sposób bardziej istotne klinicznie warunki do badania postępu choroby, a także do badań przesiewowych innowacyjnych interwencji terapeutycznych.

Ortotopowy mysi model anaplastycznego raka tarczycy

Ten artykuł przedstawia zaktualizowane podejście do klasycznego systemu chimery kury przepiórczej do badania formowania się narządów, poprzez połączenie nowatorskich procedur eksperymentalnych in vitro i in ovo.

Dwuetapowe podejście do badania wczesnych i późnych etapów powstawania narządów w modelu ptasim: paradygmat organogenezy grasicy i przytarczyc

Do tej pory rozwój metod identyfikacji przytarczyc (PG) jest ograniczony przez brak modeli zwierzęcych w badaniach przedklinicznych. W tym miejscu tworzymy prosty i skuteczny model szczura do śródoperacyjnego obrazowania PG i oceniamy jego skuteczność, wykorzystując nanocząstki tlenku żelaza jako nowy środek kontrastowy PG.

Opracowanie prostego i skutecznego modelu szczura do śródoperacyjnego obrazowania przytarczyc

Ustalono kilka typów zwierzęcych modeli zapalenia tarczycy Hashimoto, podobnie jak spontaniczne autoimmunologiczne zapalenie tarczycy u myszy NOD. Myszy H-2h4 to prosty i niezawodny model do indukcji HT. W tym artykule opisano to podejście i oceniono proces patologiczny w celu lepszego zrozumienia mysiego modelu SAT.

Generacja modelu spontanicznego autoimmunologicznego zapalenia tarczycy u myszy

Zwierzęcy model nabytej niedoczynności przytarczyc (HypoPT) jest kluczowy dla zrozumienia, jak HypoPT wpływa na homeostazę jonów mineralnych i do weryfikacji skuteczności nowych metod leczenia. W tym miejscu przedstawiono technikę generowania modelu szczura nabytej niedoczynności przytarczyc (AHypoPT) za pomocą paratyreoidektomii (PTX) przy użyciu nanocząstek węgla.

Generowanie szczurów z niedoczynnością przytarczyc za pomocą przytarczyc wspomaganej nanocząstkami węgla

Ten protokół przedstawia procedurę przeprowadzania tyreoidektomii za pomocą bezgazowego endoskopowego dostępu trans-pachowego tyreoidektomii (GETTA).

Bezgazowa endoskopowa tyreoidektomia z dostępu przeporodowego

Transustna robotyczna całkowita tyreoidektomia i obustronne centralne regionalne wycięcie węzłów chłonnych przy użyciu trzech portów bez nacięcia pachowego są wykonalne i bezpieczne dla wczesnego stadium raka brodawkowatego tarczycy. Tutaj przedstawiamy techniki operacyjne tej operacji.

Przezustna robotyczna całkowita tyreoidektomia i obustronne rozwarstwienie centralnych regionalnych węzłów chłonnych w przypadku raka brodawkowatego tarczycy

Ten protokół przedstawia szybką i nieśmiercionośną metodę pozyskiwania przytarczyc od świń. Procedura składa się z trzech głównych etapów: preparatyki świńskiej w znieczuleniu, jednostronnego pobrania grasicy oraz identyfikacji ex vivo i ekstrakcji przytarczyc wewnątrz grasicy.

Pobieranie przytarczyc od żywych świń dawców i identyfikacja ex vivo

Poznaj dwie metody tworzenia modeli mysich niedoczynności przytarczyc: paratyreoidektomię z użyciem GFP oraz ablację toksyną błoniczą. Modele zachowują czynność tarczycy i umożliwiają badanie terapii analogami PTH.

Dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów GFP i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej (Wideo) | JoVE Journal

Dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów GFP i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej

Przeglądaj więcej filmów