Identyfikacja i izolacja oligopotencjalnych i zaangażowanych w linię przodków szpiku szpiku

Metoda ta może być pomocna dla hematologów i immunologów badających produkcję i funkcję komórek szpikowych, w tym neutrofili, monocytów i komórek dendrytycznych. Główną zaletą tej techniki jest to, że umożliwia bardziej precyzyjną identyfikację podzbiorów progenitorów szpiku niż poprzednie strategie. Aby wzbogacić komórki szpiku kostnego dla komórek progenitorowych przez sortowanie komórek aktywowane magnetycznie lub MACS, należy osadzać komórki przez wirowanie i ponownie zawiesić osad w 40 mikrolitrach buforu barwiącego MACS na jeden raz 10 do siedmiu komórek szpiku kostnego.

Aby zubożyć zróżnicowane komórki dodatnie pod względem linii, dodaj 10 mikrolitrów koktajlu przeciwciał biotyny na jeden raz 10 do siedmiu komórek i wymieszaj przez pipetowanie przez 10-minutową inkubację w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Pod koniec inkubacji dodać 30 mikrolitrów buforu barwiącego na jeden razy 10 do siedmiu komórek z mieszaniem, a następnie 20 mikrolitrów mikrogranulek antybiotyny na jeden razy 10 do siedmiu komórek. Po 15 minutach w temperaturze czterech stopni Celsjusza umyj komórki jednym mililitrem buforu barwiącego na jeden raz 10 do siedmiu komórek i ponownie zawieś osad w 500 mikrolitrach świeżego buforu barwiącego do jednego razy 10 do ośmiu komórek.