Wysokoprzepustowy pomiar skuteczności ponownego uszczelniania błony plazmatycznej w komórkach ssaków

Test ten został opracowany w celu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie biologii błon plazmatycznych i ustalenia, jak skutecznie uszkodzone komórki mogą ponownie uszczelnić błonę plazmatyczną. Technika ta może być wykorzystana do pomiaru skuteczności ponownego uszczelniania błony plazmatycznej w wysokiej przepustowości oraz do identyfikacji określonych białek i odpowiadających im szlaków, które pośredniczą w ponownym uszczelnianiu błony plazmatycznej. Zacznij od dodania 20 mililitrów 2,5 razy 10 do piątej komórki HeLa na mililitr zawiesiny pożywki wzrostowej do sterylnej miski na pipety i użyj 10-mililitrowej pipety serologicznej, aby dokładnie wymieszać komórki.

Następnie za pomocą mikropipety wielokanałowej wysiewaj 100 mikrolitrów komórek na studzienkę w trzech egzemplarzach na 96-dołkowej płaskiej, przezroczystej płytce z czarnym polistyrenem poddanym kulturze tkankowej. Należy pamiętać, że jednorodne rozmieszczenie komórek jest kluczem do udanego eksperymentu, ponieważ porównania między wszystkimi warunkami eksperymentalnymi wymagają równoważnej liczby komórek. Po 24 godzinach w nawilżonym inkubatorze do hodowli komórkowych w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% CO2 podgrzej czytnik płytek do 37 stopni Celsjusza i ustaw konfigurację optyczną na monochromator, tryb odczytu na fluorescencję, a typ odczytu na kinetyczny.