Name: Kompleksowy program autopsji dla osób ze stwardnieniem rozsianym (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-19T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Poznaj metodę szybkiej autopsji do badania patogenezy stwardnienia rozsianego z wykorzystaniem MRI in situ i analizy molekularnej tkanek mózgowych. Technika ta umożliwia kompleksowe badania immunohistochemiczne oraz RNA.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby również podziękować Dr. Christopherowi Nelsonowi za pomoc redakcyjną. Program autopsji jest częściowo wspierany przez NS097303 grantowe R35 dla BDT. Prace w laboratorium RD są wspierane przez granty NINDS (NS096148) i National Multiple Sclerosis Society, USA (RG 5298).

<ol><li>Trapp, B. D., Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%3A+an+immune+or+neurodegenerative+disorder%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis: an immune or neurodegenerative disorder?</a> Annual Review of Neuroscience. 31, 247-269 (2008).</li>
<li>Chang, A., Nishiyama, A., Peterson, J., Prineas, J., Trapp, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-positive+oligodendrocyte+progenitor+cells+in+adult+human+brain+and+multiple+sclerosis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">NG2-positive oligodendrocyte progenitor cells in adult human brain and multiple sclerosis lesions.</a> Journal of Neuroscience. 20, 6404-6412 (2000).</li>
<li>Chang, A., Tourtellotte, W. W., Rudick, R., Trapp, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Premyelinating+oligodendrocytes+in+chronic+lesions+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Premyelinating oligodendrocytes in chronic lesions of multiple sclerosis.</a> New England Journal of Medicine. 346, 165-173 (2002).</li>
<li>Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+chronic+lesions+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the chronic lesions of multiple sclerosis.</a> Brain. 131, 2366-2375 (2008).</li>
<li>Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+remyelination%3A+A+new+target+for+repair+therapies+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cortical remyelination: A new target for repair therapies in multiple sclerosis.</a> Annals of Neurology. 72, 918-926 (2012).</li>
<li>Dutta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+as+a+cause+of+axonal+degeneration+in+multiple+sclerosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction as a cause of axonal degeneration in multiple sclerosis patients.</a> Annals of Neurology. 59, 478-489 (2006).</li>
<li>Dutta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+ciliary+neurotrophic+factor+%28CNTF%29+signalling+pathway+in+cortical+neurons+of+multiple+sclerosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Activation of the ciliary neurotrophic factor (CNTF) signalling pathway in cortical neurons of multiple sclerosis patients.</a> Brain. 130, 2566-2576 (2007).</li>
<li>Dutta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demyelination+causes+synaptic+alterations+in+hippocampi+from+multiple+sclerosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Demyelination causes synaptic alterations in hippocampi from multiple sclerosis patients.</a> Annals of Neurology. 69, 445-454 (2011).</li>
<li>Dutta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+demyelination+and+memory+dysfunction+are+associated+with+increased+levels+of+the+neuronal+microRNA+miR-124+and+reduced+AMPA+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Hippocampal demyelination and memory dysfunction are associated with increased levels of the neuronal microRNA miR-124 and reduced AMPA receptors.</a> Annals of Neurology. 73, 637-645 (2013).</li>
<li>Trapp, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+transection+in+the+lesions+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Axonal transection in the lesions of multiple sclerosis.</a> New England Journal of Medicine. 338, 278-285 (1998).</li>
<li>Trapp, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+neuronal+densities+and+cerebral+white+matter+demyelination+in+multiple+sclerosis%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cortical neuronal densities and cerebral white matter demyelination in multiple sclerosis: a retrospective study.</a> Lancet Neurology. 17, 870-884 (2018).</li>
<li>Young, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+correlates+of+decreased+axonal+Na%2B%2FK%2B+ATPase+in+chronic+multiple+sclerosis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Imaging correlates of decreased axonal Na+/K+ ATPase in chronic multiple sclerosis lesions.</a> Annals of Neurology. 63, 428-435 (2008).</li>
<li>Fisher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+correlates+of+axonal+swelling+in+chronic+multiple+sclerosis+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Imaging correlates of axonal swelling in chronic multiple sclerosis brains.</a> Annals of Neurology. 62, 219-228 (2007).</li>
<li>Moll, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+correlates+of+leukocyte+accumulation+and+CXCR4%2FCXCL12+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Archieves+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Imaging correlates of leukocyte accumulation and CXCR4/CXCL12 in multiple sclerosis.</a> Archieves of Neurology. 66, 44-53 (2009).</li>
<li>Moll, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis+normal-appearing+white+matter%3A+pathology-imaging+correlations%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis normal-appearing white matter: pathology-imaging correlations.</a> Annals of Neurology. 70, 764-773 (2011).</li>
<li>Nakamura, K., Chen, J. T., Ontaneda, D., Fox, R. J., Trapp, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T1-%2FT2-weighted+ratio+differs+in+demyelinated+cortex+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">T1-/T2-weighted ratio differs in demyelinated cortex in multiple sclerosis.</a> Annals of Neurology. 82, 635-639 (2017).</li>
<li>Chen, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinically+feasible+MTR+is+sensitive+to+cortical+demyelination+in+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Clinically feasible MTR is sensitive to cortical demyelination in MS.</a> Neurology. 80, 246-252 (2013).</li>
<li>Nakamura, K., Fox, R., Fisher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CLADA%3A+cortical+longitudinal+atrophy+detection+algorithm%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">CLADA: cortical longitudinal atrophy detection algorithm.</a> Neuroimage. 54, 278-289 (2011).</li>
<li>Sled, J. G., Zijdenbos, A. P., Evans, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nonparametric+method+for+automatic+correction+of+intensity+nonuniformity+in+MRI+data%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+of+Medical+imaging%22%5BJournal%5D)">A nonparametric method for automatic correction of intensity nonuniformity in MRI data.</a> IEEE Transactions of Medical imaging. 17, 87-97 (1998).</li>
<li>Fisher, E., Cothren, J. R. M., Tkach, J. A., Masaryk, T. J., Cornhill, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knowledge-based+3D+segmentation+of+the+brain+in+MR+images+for+quantitative+multiple+sclerosis+lesion+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE+3034%2C+Medical+Imaging%22%5BJournal%5D)">Knowledge-based 3D segmentation of the brain in MR images for quantitative multiple sclerosis lesion tracking.</a> Proc. SPIE 3034, Medical Imaging. , 19-25 (1997).</li>
<li>Avants, B. B., Epstein, C. L., Grossman, M., Gee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symmetric+diffeomorphic+image+registration+with+cross-correlation%3A+evaluating+automated+labeling+of+elderly+and+neurodegenerative+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Image+Analysis%22%5BJournal%5D)">Symmetric diffeomorphic image registration with cross-correlation: evaluating automated labeling of elderly and neurodegenerative brain.</a> Medical Image Analysis. 12, 26-41 (2008).</li>
<li>Jenkinson, M., Bannister, P., Brady, M., Smith, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+optimization+for+the+robust+and+accurate+linear+registration+and+motion+correction+of+brain+images%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Improved optimization for the robust and accurate linear registration and motion correction of brain images.</a> Neuroimage. 17, 825-841 (2002).</li>
<li>Lewis, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+brain+revisited%3A+opportunities+and+challenges+in+postmortem+studies+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">The human brain revisited: opportunities and challenges in postmortem studies of psychiatric disorders.</a> Neuropsychopharmacology. 26, 143-154 (2002).</li>
<li>Chomyk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+methylation+in+demyelinated+multiple+sclerosis+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">DNA methylation in demyelinated multiple sclerosis hippocampus.</a> Scientific Reports. 7, 8696(2017).</li>
<li>Huynh, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenome-wide+differences+in+pathology-free+regions+of+multiple+sclerosis+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Epigenome-wide differences in pathology-free regions of multiple sclerosis brains.</a> Nature Neuroscience. , (2014).</li>
<li>Ishii, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+myelin+proteome+and+comparative+analysis+with+mouse+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Human myelin proteome and comparative analysis with mouse myelin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. U. S. A. 106, 14605-14610 (2009).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Opisujemy protokół, który został wykorzystany do szybkiego pozyskania i przetworzenia tkanek od ponad 150 osób ze stwardnieniem rozsianym. Ważną cechą tego protokołu jest to, że naukowcy, którzy wykorzystują tkankę, są również odpowiedzialni za ustalenie protokołu i pobranie tkanki. Zapewnia to elastyczność w zaspokajaniu potrzeb naukowych poszczególnych projektów badawczych. Kilka aspektów tego protokołu zwiększa jego użyteczność. Pacjenci są zwykle dobrze scharakteryzowani przed śmiercią, ponieważ wielu z nich było obserwowanych przez neurologów w naszym centrum. Krytycznym etapem jest przetwarzanie pobranych tkanek wkrótce po śmierci, co zwiększa jakość zamrożonej tkanki w porównaniu z niektórymi innymi bankami mózgu. Umożliwia to prowadzenie badań molekularnych, które mają ogromną wartość w opisywaniu zmian w transkrypcyjnych i translacyjnych produktach genowych, które są niezbędne do uzasadnienia obserwacji histologicznych i immunocytochemicznych. Wykorzystanie danych morfologicznych/immunocytochemicznych i molekularnych w wielu przypadkach zwiększa wiarygodność wniosków. Najlepiej ilustruje to nasz opis zmian w genach mitochondrialnych w korze mózgowej i zmian w genach neuronalnych w demielinizowanych hipokampach. W szybkim tempie opracowywane są nowe protokoły profilowania genów, a zamrożona tkanka w naszym banku powinna dostarczyć wysokiej jakości RNA do analizy tkanek i pojedynczych komórek.
Innym cenionym aspektem naszego protokołu są krótko ustalone wycinki mózgu. Tkanki te są cięte na swobodnie pływające odcinki o grubości 30 μm. Sekcje te są idealne do stosowania mikroskopii konfokalnej do analizy dwóch lub więcej antygenów w trzech wymiarach. Dobrymi przykładami są interakcje premielinizacyjnych procesów oligodendrocytów z dystroficznymi aksonami w przewlekłych zmianach SM, a także identyfikacja pojedynczych połączeń aksonalnych z transektowanymi opuszkami retrakcyjnymi aksonów. Jest to przeciwieństwo rutynowego stosowania skrawków parafiny o grubości 7 μm, gdzie obrazy 3D nie są możliwe. Tkanki zatopione w parafinie mają wielką wartość dla niektórych pytań, zwłaszcza dla ilościowego oznaczania gęstości neuronów w półkulowych odcinkach o grubości 7 μm. W związku z tym nasze protokoły przetwarzania tkanek są zróżnicowane i zapewniają elastyczność, aby zapewnić utrwalone i szybko zamrożone tkanki.
Kolejną unikalną cechą naszego protokołu jest pośmiertny rezonans magnetyczny mózgu in situ. Rezonans magnetyczny mózgu jest niezastąpionym biomarkerem choroby SM. Dlatego niezbędne jest ustalenie patologicznych korelatów nieprawidłowych sygnałów MRI. Nasze badania wykazały, że zarówno tylko T2, jak i T2T1MTR ROI są często mielinizowane. Odkrycie to potwierdza potrzebę bardziej szczegółowych metod obrazowania, które niezawodnie rozróżniają mielinizowaną i zdemielinizowaną istotę białą mózgu. MRI wydaje się być czuły na wykrywanie mieliny, ale nasze badania pokazują, że nawet kombinacja T1/T2/MTR nie jest specyficzna do identyfikacji mielinizacji. Nasz protokół pośmiertny stanowi idealną platformę do testowania zdolności nowych metod obrazowania do rozróżniania mielinizowanej i zdemielinizowanej istoty białej mózgu. Rezonans magnetyczny stanowi również idealne narzędzie do przekładania wyników nauk podstawowych na praktykę kliniczną, biorąc pod uwagę zastosowanie MRI w naszych badaniach translacyjnych i jego szerokie zastosowanie kliniczne u żywych pacjentów.
Podczas gdy krojenie krótkich i długich plastrów, a także mrożonych zapewnia przewagę w przetwarzaniu tkanek w wielu trybach dla różnych badań, istnieją pewne ograniczenia związane z tą metodą. Ocena całej struktury może być ograniczona, ponieważ jej części mogą być przetwarzane w różny sposób na sąsiednich plasterkach. Duża objętość banku tkanek daje jednak możliwość zbadania struktury będącej przedmiotem zainteresowania u wielu osób w celu poprawy pobierania próbek. Innym ogólnym ograniczeniem badań z wykorzystaniem tkanek pośmiertnych jest to, że są one przekrojowe. W tym kontekście należy interpretować wnioski dotyczące harmonogramu i postępu zmian. Może wystąpić błąd selekcji w stosunku do pacjentów, którzy oddają swoje tkanki, co może ograniczyć uogólnienie danych na wszystkich pacjentów ze stwardnieniem rozsianym. Ponieważ większość dawców umiera z powodu powikłań zaawansowanego stwardnienia rozsianego, ekstrapolacja wyników od tych pacjentów na osoby we wcześniejszych stadiach stwardnienia rozsianego może nie być właściwa. Niemniej jednak otrzymaliśmy tkanki od młodszych pacjentów, którzy zmarli z powodu schorzeń niezwiązanych ze stwardnieniem rozsianym (tj. ostry zawał mięśnia sercowego, przedawkowanie leków, samobójstwo). Zakres naszego protokołu nie obejmuje pobierania próbek z innych narządów (np. przewodu pokarmowego i szpiku kostnego), które są związane ze stwardnieniem rozsianym. Wierzymy, że mocne strony programu znacznie przeważają nad jego ograniczeniami.

Jednym z najlepszych sposobów badania choroby jest zbadanie samej chorej tkanki. Stanowi to wyzwanie dla tych, którzy badają choroby ośrodkowego układu nerwowego (OUN). Biopsje chorego mózgu i rdzenia kręgowego są niezwykle rzadkie i zwykle obejmują nietypowe przypadki. Wskaźniki autopsji osób z chorobami OUN drastycznie spadły w ostatnich latach, a gdy są wykonywane, często nie zapewniają szybkiego pobrania tkanek. Wyzwania te doprowadziły do powstania banków mózgu skoncentrowanych na chorobie, w tym kilku skoncentrowanych na pobieraniu tkanek od osób ze stwardnieniem rozsianym (SM). Stwardnienie rozsiane jest chorobą OUN o podłożu zapalnym, która niszczy mielinę, oligodendrocyty (komórki tworzące mielinę), neurony i aksony. Większość pacjentów ze stwardnieniem rozsianym ma dwufazowy przebieg choroby, który rozpoczyna się napadami niepełnosprawności neurologicznej ze zmiennym powrotem do zdrowia, który ostatecznie ewoluuje w stopniowo postępującą chorobę, która prawdopodobnie ma charakter neurodegeneracyjny1. W przypadku większości mózgów dawców stwardnienia rozsianego odstępy pośmiertne (PMI) między śmiercią a przetwarzaniem tkanek przekraczają 24 godziny. Chociaż tkanki te dostarczyły cennych informacji na temat patologicznych zmian w mózgach osób ze stwardnieniem rozsianym, nie nadają się do bardziej zaawansowanych badań molekularnych, które mogą dostarczyć potężnych informacji na temat patofizjologii choroby. Dotyczy to w szczególności badań profilowania genów, które wymagają nienaruszonego RNA.
Aby przezwyciężyć ograniczenia omówione powyżej, opracowaliśmy program szybkiego dawstwa tkanek, który pozwala na MRI/patologiczne korelacje. Protokół ten zapewnia dobrze zachowane tkanki odpowiednie do nowoczesnych badań molekularnych i umożliwia bezpośrednie porównanie patologii mózgu i nieprawidłowości MRI w mózgach SM. Program dawstwa tkanek stwardnienia rozsianego Cleveland Clinic istnieje od ponad 20 lat. Ten program szybkiego dawstwa tkanek polega na pozyskiwaniu mózgów i rdzeni kręgowych od osób ze stwardnieniem rozsianym i innymi powiązanymi autoimmunologicznymi schorzeniami neurologicznymi. Program ma na celu uzyskanie rezonansu magnetycznego in situ w ciągu 6 godzin od śmierci, a następnie usunięcie mózgu i rdzenia kręgowego w celu przetworzenia tkanek.
Rekrutacja 
Dawstwo uzyskuje się na podstawie zgody przedśmiertnej uzyskanej bezpośrednio od pacjentów (za zgodą wstępną) lub od najbliższej rodziny po śmierci. Pacjenci, którzy wyrazili na to zgodę, są zazwyczaj identyfikowani z populacji klinicznej w Mellen Center for Multiple Sclerosis Treatment and Research w Cleveland w stanie Ohio. Chociaż pierwszeństwo w rekrutacji do programu szybkiego dawstwa tkanek mają pacjenci, którzy byli obserwowani w badaniach podłużnych, jest on otwarty dla wszystkich pacjentów przyjmowanych w ośrodku. Uczestnicy, którzy zapiszą się przed śmiercią, otrzymują instrukcje dla członków rodziny lub opiekunów, aby skontaktowali się z zespołem badawczym, zarówno w momencie śmierci, jak i gdy śmierć jest uważana za nieuchronną. Drugą metodą, w której osoby mogą przystąpić do programu dawstwa tkanek, jest zgoda najbliższej rodziny w momencie śmierci. Stan Ohio wymaga, aby przypadki zgonów były kierowane do federalnej organizacji zajmującej się pobieraniem narządów o nazwie LifeBanc, która działa w 20 hrabstwach północno-wschodniego Ohio. LifeBanc przeprowadza badania przesiewowe wszystkich zgonów pod kątem rozpoznania stwardnienia rozsianego, co jest wykluczeniem z dawstwa narządów. Poczyniono ustalenia, aby LifeBanc powiadomił badaczy z programu dawstwa tkanek SM o wszystkich zgonach z powiązaną diagnozą stwardnienia rozsianego, które wystąpiły w promieniu 75 mil od kliniki w Cleveland. Następnie personel Programu Dawstwa Tkanek kontaktuje się z najbliższymi krewnymi i personelem szpitala i uzyskuje zgodę na dawstwo tkanek mózgu i rdzenia kręgowego. Te dwie metody rekrutacji przedśmiertnej i pośmiertnej za pośrednictwem LifeBanc skutkują około 10-12 dawstwami mózgu rocznie. Wprowadzono zmiany w górnej granicy wieku zgonu, aby zarządzać liczbą skierowań pochodzących z LifeBanc.
Pozyskiwanie darowizn<br />
Program wymaga 24-godzinnej ochrony, 365 dni w roku przez członków programu dawstwa tkanek w celu pobrania tkanek. Scentralizowany system powiadomień e-mail/pager/tekstowych na urządzenia mobilne jest używany przez zespół kliniczny zajmujący się dawstwem tkanek. Firma LifeBanc otrzymuje numery telefonów do kontaktu z personelem dyżurnym w sprawie programu dawstwa tkanek. Członkowie są powiadamiani o zgonie przez świadczeniodawców szpitala/najbliższych krewnych (za wstępną zgodą) lub przez LifeBanc i inne źródła skierowań. W pierwszej kolejności określa się czas zgonu i możliwość pobrania tkanek. Zgony są następnie badane pod kątem stanów, które potencjalnie skutkują niską jakością tkanki, w tym przedłużonego niedotlenienia przedśmiertnego, masywnej destrukcyjnej tkanki mózgowej (np. Duży krwotok śródczaszkowy, rozległe udary dwupółkulowe, rozległe obciążenie guza), przedłużone wspomaganie respiratora (>3 dni) i długotrwałe stosowanie środków wazoaktywnych (>3 dni) przed śmiercią. Kiedy lekarz sądowy jest zaangażowany w zgon, neurolog prowadzący badanie może porozmawiać z lekarzem sądowym, aby zbadać sposób na otrzymanie tkanek w odpowiednim czasie bez uszczerbku dla odpowiedzialności lekarza sądowego. Jeśli wyczuwa się, że tkanka żywa jest obecna, uzyskuje się pisemną zgodę (jeśli nie została uzyskana przed ubojem) i przygotowuje się do transportu ciała. Następnie kontaktuje się z wcześniej zakontraktowaną firmą transportową zmarłego w celu transportu do ośrodków MRI w Cleveland Clinic. Dba się o to, aby ciało pozostawało w temperaturze pokojowej i nie było umieszczane w lodówce, ponieważ niższa temperatura ciała wiąże się ze zmianami w charakterystyce sygnału MRI.
Historia kliniczna 
Historia kliniczna obejmuje szczegółowe informacje na temat rozpoznania stwardnienia rozsianego, wystąpienia objawów, zastosowanych metod leczenia, wyników badań klinicznych i paraklinicznych (potencjały wywołane, wyniki płynu mózgowo-rdzeniowego, optyczna koherentna tomografia), kompozytu funkcjonalnego stwardnienia rozsianego i rozszerzonej skali niepełnosprawności (EDSS; rzeczywista lub szacunkowa), które są zbierane z dokumentacji medycznej (jeśli jest dostępna) oraz bezpośredniego wywiadu z najbliższymi krewnymi. Pobierany jest również przedśmiertny rezonans magnetyczny.

<table><tbody><tr><td>Przeciwciała</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biotynylowane kozie przeciwciała anty-mysie</td><td>IgG Vector Laboratories</td><td>BA-9200</td><td>Rozcieńczenie 1:500 dla półkuli; 1:1,000 dla 30&mikro; m swobodnie pływający. RRID: AB_2336171</td></tr><tr><td>Biotynylowany kozioł anty-króliczy IgG</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA-1000</td><td>rozcieńczenie 1:500.</td></tr><tr><td>Biotynylowany kozioł anty-szczurzy IgG</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA-9400</td><td>1:500 rozcieńczenie dla półkuli; 1:1,000 dla 30&mikro; m swobodnie pływający. <silny>RRID</silny>: AB_2336208</td></tr><tr><td>Białko kwasu fibrylarnego glejowego (GFAP)</td><td>Dako</td><td>Z0334</td> 1<td>:700 rozcieńczenie dla półkuli. <silny>RRID</silny>: AB_10013382</td></tr><tr><td>HuR, mysz IgG, klon 3A2</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-5261</td><td>1:500 dla 30&mikro; m swobodnie pływający. RRID: AB_627770</td></tr><tr><td>Główny kompleks zgodności tkankowej (MHC) klasa II HLA-DR CR3/43</td><td>Dako</td><td>Mo746</td> 1<td>:250 rozcieńczenie dla półsfery; 1:500 dla 30 &mikro; m swobodnie pływający. RRID: AB_2313661</td></tr><tr><td>Neurofilament niefosforylowany (SMI32)</td><td>Biolegend</td><td>801701</td><td>rozcieńczenie 1:5 000 dla półkuli; 1:2,500 dla 30 i mikro; m swobodnie pływający. RRID: AB_2564642</td></tr><tr><td>Fosforylowany neurofilament (SMI31)</td><td>Biolegend</td><td>801601</td><td>rozcieńczenie 1:5,000 dla półkuli; 1:2,500 dla 30 i mikro; m swobodnie pływający. RRID: AB_2564641</td></tr><tr><td>Białko proteolipidowe (PLP)</td><td>Prezent od Wendy Macklin</td><td></td><td>Rozcieńczenie 1:250 dla IHC; alternatywne przeciwciała anty-PLP dostępne na rynku.</td></tr>Bibuła filtracyjna <tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>125 mm</td><td>Whatman</td><td>1452-125</td><td>Do filtrowania PFA.</td></tr><tr><td>50% Mikroskopia elektronowa aldehydu glutarowego</td><td>Sciences</td><td>16320</td><td>Klasa mikroskopii elektronowej.</td></tr><tr><td>Cytoseal</td><td>ThermoScientific</td><td>8310-16</td><td></td></tr><tr><td>Glikol etylenowy</td><td>Fisher Chemical</td><td>BP230-4</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893</td><td>400 mL/2 L Roztwór krioprotekcji.</td></tr><tr><td>Filtr strzykawkowy Millex-HV, 0,45 &mikro; m, PVDF, 33 mm, sterylizowany promieniami gamma</td><td>Millipore-Sigma</td><td>SLHV033RB</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehydowa</td><td>mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>19200</td><td>Forma Prills.</td></tr><tr><td>Poliwinylopirolidon (PVP-40)</td><td>Fisher Chemical</td><td>BP220-212</td><td></td></tr><tr><td>Azydek sodu</td><td>Fisher Chemical</td><td>S227I</td><td>2 g/2 L Bufor Sorensona.</td></tr><tr><td>Fosforan sodu dwuzasadowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>98,8 g/2 L Bufor Sorensona.</td></tr><tr><td>Sodu fosforan jednozasadowy jednowodny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td>14,352 g/2 L bufor Sorensona.</td></tr><tr><td>Sacharoza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PVP40-500G</td><td></td></tr><tr><td>VectaStain ABC Kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td> 1<td>:1,000 rozcieńczenie A i B. <silny>RRID</mocny>: AB_2336819</td></tr><tr><td>Wodoodporny tusz do rysowania</td><td>Higgins</td><td>44201</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3S</td><td>Klasa histologiczna.</td></tr><tr><td>Sprzęt</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3T MRI Magnetom Prisma</td><td>Siemens Healthineers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7T MRI Agilent 830AS</td><td>Siemens Healthineers</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kompleksowy program autopsji dla osób ze stwardnieniem rozsianym

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

Opisujemy program szybkiego dawstwa tkanek dla osób ze stwardnieniem rozsianym (SM), który wymaga od naukowców i techników dyżurów 24/7, 365 dni w roku. Uczestnicy wyrażają zgodę na oddanie swojego mózgu i rdzenia kręgowego. Większość pacjentów była obserwowana przez neurologów w Cleveland Clinic Mellen Center for Cle Treatment and Research. Ich przebieg kliniczny i niepełnosprawność neurologiczna są dobrze scharakteryzowane. Wkrótce po śmierci ciało jest transportowane do Centrum Obrazowania SM, gdzie mózg jest skanowany in situ za pomocą rezonansu magnetycznego (MRI) 3 T. Ciało jest następnie przenoszone do sali autopsji, gdzie usuwa się mózg i rdzeń kręgowy. Mózg jest podzielony na dwie półkule. Jedną półkulę natychmiast umieszcza się w pudełku do krojenia, a naprzemienne plastry o grubości 1 cm są albo utrwalane w 4% paraformaldehydzie na dwa dni, albo szybko zamrażane w suchym lodzie i 2-metylobutanie. Krótko utrwalone wycinki mózgu są przechowywane w roztworze do krioprezerwacji i wykorzystywane do analiz histologicznych i immunocytochemicznego wykrywania wrażliwych antygenów. Zamrożone plastry są przechowywane w temperaturze -80 °C i wykorzystywane do badań molekularnych, immunocytochemicznych i hybrydyzacji in situ/zakresu RNA. Drugą półkulę umieszcza się w 4% paraformaldehydzie na kilka miesięcy, umieszcza w pudełku do krojenia, ponownie skanuje w skanerze rezonansu magnetycznego (MR) 3 T i kroi na plasterki o grubości centymetra. Pośmiertne obrazy MR in situ (MRI) są rejestrowane razem z wycinkami mózgu o grubości 1 cm, aby ułatwić korelacje MRI z patologią. Wszystkie wycinki mózgu są fotografowane i identyfikowane są zmiany w istocie białej mózgu. Rdzeń kręgowy jest cięty na 2 cm segmenty. Alternatywne segmenty są utrwalane w 4% paraformaldehydzie lub szybko zamrażane. Szybkie pobranie tkanek pośmiertnych komórek SM pozwala na analizę patologiczną i molekularną mózgu i rdzenia kręgowego SM oraz patologiczne korelacje nieprawidłowości MRI mózgu. Jakość tych szybko przetworzonych tkanek pośmiertnych (zwykle w ciągu 6 godzin od śmierci) ma ogromne znaczenie dla badań nad stwardnieniem rozsianym i zaowocowała wieloma odkryciami o dużym znaczeniu.

Stwardnienie rozsiane jest zapalną chorobą demielinizacyjną, na którą nie ma lekarstwa. Analiza tkanki mózgowej dostarcza ważnych wskazówek do zrozumienia patogenezy choroby. W tym miejscu omawiamy metodologię i dalszą analizę tkanki mózgowej stwardnienia rozsianego pobranej za pomocą unikalnego programu szybkiej autopsji działającego w Cleveland Clinic.

Kompleksowy program autopsji dla osób ze stwardnieniem rozsianym

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Celem naszych badań jest poznanie patogenezy stwardnienia rozsianego. Aby osiągnąć ten cel, opracowaliśmy program szybkiej autopsji, aby uzyskać i zbadać mózgi osób ze stwardnieniem rozsianym. Istnieją dwa szczególne aspekty naszego programu autopsji, pierwszym z nich jest to, że jest on szybki. Zbieramy dane o tym, że mózg umiera poniżej sześciu do ośmiu godzin.Pozwala to na prowadzenie najnowocześniejszych badań molekularnych. Drugim aspektem jest to, że wykonujemy rezonans magnetyczny in situ, zanim poruszymy mózgiem. Pozwala to na skorelowanie zmian patologicznych ze zmianami w obrazowaniu mózgu.Demonstracja wizualna pozwala widzom zrozumieć, w jaki sposób organizujemy naszą przestrzeń i czas, aby osiągnąć optymalne rezultaty. Przetwarzanie tkanek, które odbywa się szybko i ostrożnie, pozwala na analizę RNA, barwienie immunologiczne, immunoblotting i korelacje MRI. Nowi badacze mogą mieć problemy z przetwarzaniem tkanek o słabej integralności tkanki.Unikanie długiego czasu fiksacji pośmiertnej jest ważne, a prążki rdzenia tkankowego MRI mogą być trudne, dlatego konsultacja z ekspertami ds. analizy MRI może być bardzo przydatna. Procedurę zademonstrują Emilie Christie i Christina Volsko. Technicy z naszego laboratorium.Po obrazowaniu rezonansu magnetycznego in situ zważ i sfotografuj mózg, a następnie umieść przyczepioną oponę twardą w pojemniku z 4% paraformaldehydem lub PFA. Oddziel móżdżek i pień mózgu od mózgu i sfotografuj mózg. Za pomocą sondy oddzielić nerwy wzrokowe, skrzyżowanie i drogi oddechowe, a następnie wyciąć strukturę skalpelem.Oddziel półkule mózgowe wzdłużnie i sfotografuj każdą półkulę z osobna. Nałóż tusz na pierwszorzędową korę ruchową lub PMC na lewą półkulę, ponownie sfotografuj tkankę i umieść tkankę w pojemniku o pojemności 3,3 litra w celu długiego utrwalenia. Aby wyciąć PMC dla prawej półkuli, usuń pokrywające opony mózgowe i ponownie sfotografuj tkankę.Następnie należy przeciąć PMC za pomocą skalpela. Następnie sfotografuj wycięty PMC obok półkuli. Pokrój PMC na sześć równych sekcji i narysuj aspekt rostralny każdej sekcji.Następnie umieść co drugą sekcję w pojemnikach wypełnionych PFA w celu krótkiego zamocowania. I zatrzaskowo zamroź pozostałe sekcje do przechowywania w szczelnie zamkniętych torebkach do zamrażania, w lodówce numer jeden. Przetnij prawą półkulę od przodu do tyłu na odcinki koronalne o grubości jednego centymetra.Zamocuj co drugą sekcję w PFA i zamroź pozostałe sekcje do przechowywania w szczelnie zamkniętych torebkach do zamrażania, w lodówce numer jeden. Oddziel pień mózgu od móżdżku i umieść pień mózgu w pojemniku wypełnionym PFA w celu krótkiego utrwalenia. Przetnij każdą półkulę móżdżku na cztery równo zamocowane sekcje strzałkowe i sfotografuj widok przyśrodkowy i boczny.Następnie umieść lewe plastry półkuli móżdżku w pojemniku z PFA w celu krótkiego utrwalenia. I zamroź prawe plastry półkuli móżdżku do przechowywania w szczelnie zamkniętych torebkach do zamrażania, w lodówce numer jeden. Po uzyskaniu rdzenia kręgowego z korzeniami nerwowymi należy usunąć oponę twardą rdzenia kręgowego i przechowywać oponę twardą w PFA.Oddziel lewe i prawe przednie i tylne korzenie nerwowe i odetnij lewe przednie i tylne korzenie nerwowe od rdzenia kręgowego w celu krótkiego utrwalenia w PFA. Odetnij prawe przednie i tylne korzenie nerwowe od rdzenia kręgowego i zatrzaskowo zamroź te tkanki do przechowywania w szczelnie zamkniętych torebkach do zamrażania, w lodówce numer dwa. Następnie sfotografuj najbardziej ogonowe 20 centymetrów rdzenia kręgowego i wytnij dwucentymetrowe odcinki transferowe od kierunku ogonowego do rostralnego rdzenia kręgowego w celu krótkiego mocowania PFA i zatrzaskowego zamrożenia.Następnie sfotografuj pozostałą część rostralną rdzenia kręgowego. I wytnij dwucentymetrowe odcinki transferowe od kierunku ogonowego do rostralnego sznurka, aby uzyskać krótkie mocowanie PFA i zatrzaskowe zamrażanie. Wytnij interesujące Cię odcinki z krótkich lub długich utrwalonych tkanek.Umieścić skrawki w indywidualnych dołkach na płytce sześciodołkowej i przemyć chusteczki trzema pięciominutowymi płukaniami w dwóch mililitrach świeżego PBS na pranie, potrząsając. W celu pobrania antygenu należy podgrzać skrawki w kuchence mikrofalowej przez dwie do trzech minut w szklanej zlewce zawierającej około 30 mililitrów 10-mililitrowego buforu cytrynianu. Gdy sekcje ostygną do temperatury pokojowej, przenieś próbki na nową sześciodołkową płytkę na trzy pięciominutowe płukania i dwa mililitry PBS, plus 0,3% Triton X-100 na studzienkę, na mycie.Następnie endogenna peroksydaza blokuje się w dwóch mililitrach 3% nadtlenku wodoru i 0,3% Triton X-100 w PBS przez 30 minut, w temperaturze pokojowej. Pod koniec inkubacji przemyć sekcje trzy razy w dwóch mililitrach PBS plus Triton X-100 na pranie, jak pokazano. Następnie zablokuj dwa mililitry 3% normalnej surowicy koziej i PBS plus Triton X-100 przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej.Następnie inkubuj skrawki od nocy do pięciu dni w pierwotnych przeciwciałach będących przedmiotem zainteresowania w temperaturze czterech stopni Celsjusza, a następnie trzy pięciominutowe płukania w dwóch mililitrach PBS na pranie. Skrawki inkubować w roztworze kompleksu awidyna-biotyna lub kompleksie ABC przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Następnie wykonaj trzy pięciominutowe mycia w PBS.Oznacz skrawki dwoma mililitrami przefiltrowanej diaminobenzydyny uzupełnionej nadtlenkiem wodoru na studzienkę przez trzy do ośmiu minut. Gdy kolor odpowiednio się rozwinie, umyj skrawki trzy razy w PBS i indywidualnie przenieś każdą sekcję do pojemnika wypełnionego PBS. Umieść każdą sekcję płasko, pod pojedynczymi szkiełkami tkankowymi.I delikatnie podnieś każdy slajd z PBS, utrzymując sekcje tak płaskie, jak to możliwe. Użyj dwóch pędzli, aby delikatnie spłaszczyć i rozciągnąć każdą chusteczkę. I użyj ręcznika papierowego, aby zetrzeć nadmiar wody.Następnie zamontuj sekcje za pomocą odpowiedniego medium montażowego i uszczelnij każdą szkiełko nakrywkowe bezbarwnym lakierem do paznokci. Wycinki tkanek są badane pod kątem obecności zmian w istocie białej, a wybrane regiony są barwione pod kątem aktywności immunologicznej i demielinizacji. W ostrych zmianach mnogich Sceloris wiele z tych zdemielinizowanych aksonów działa jak opuszki retrakcyjne aksonów, które odbijają proksymalne końce przeciętych aksonów.Gęstość transektowanych aksonów w ostrych zmianach przekracza 11000 na milimetr sześcienny w aktywnych zmianach w porównaniu do zaledwie 15 w sąsiednich obszarach istoty białej niezmienionych chorobowo. Nowo powstałe oligodendrocyty są również obecne w wielu przewlekłych zmianach chorobowych na stwardnienie rozsiane. Procesy te wiążą się z demielinizowanymi aksonami, ale ich nie mielinują.Reprezentatywne, bezstronne poszukiwanie zmian genów neuronalnych w szybko zamrożonym kortekście ruchowym uzyskanym od pacjentów z przewlekłym stwardnieniem rozsianym zidentyfikowało znaczące redukcje 23 jądrowych i kodowanych mitochondrialnych informacyjnych RNA Badania uwierzytelniające przy użyciu immunocytochemii i hybrydyzacji in situ wykazały, że geny te były znacznie wzbogacone w neurony projekcyjne kory i że mitochondria wyizolowane z aksonów projekcyjnych wykazują zmniejszoną glikolizę. Porównanie ekspresji genów neuronodów w zmielinizowanych i zdemielinizowanych hipokampach ujawnia zmniejszenie liczby neuronalnych informacyjnych RNA, w tym białek zaangażowanych w pamięć i uczenie się. Ponadto, w porównaniu z korą kontrolną, utrata neuronów korowych jest znacznie większa w subpopulacji pacjentów ze stwardnieniem rozsianym, którzy mają demielinizację rdzenia kręgowego i kortekstu mózgu, ale nie istoty białej mózgu.Podczas przetwarzania tkanek należy upewnić się, że podczas cięcia odcinków koronalnych są one cięte konsekwentnie pod względem grubości i orientacji. I że leżą płasko, gdy unoszą się w utrwalaczu lub po zamrożeniu. Oprócz analizy immunohistochemicznej, pobranie zamrożonych tkanek daje nam możliwość przeprowadzenia analizy genetycznej i proteomicznej.Techniki te pomogły w identyfikacji nowej kohorty pacjentów ze stwardnieniem rozsianym ze zmianami w istocie białej mózgu w MRI, ale bez znaczącej demielinizacji istoty białej. Określane jako stwardnienie rozsiane kory mięśniowej.

comprehensive-autopsy-program-for-individuals-with-multiple-sclerosis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Obiektywne oceny mechanizmów fizjologicznych wspierających mowę są niezbędne do monitorowania początku i postępu choroby u osób z ALS oraz do ilościowego określenia efektów leczenia w badaniach klinicznych. W niniejszym filmie przedstawiamy kompleksowy protokół oparty na instrumentacji, służący do ilościowej oceny sprawności motorycznej mowy w populacjach klinicznych.

Protokół kompleksowej oceny dysfunkcji opuszkowej w stwardnieniu bocznym zanikowym (SLA)

Model mysi stwardnienia zanikowego bocznego (ALS) poddano badaniu klinicznemu i behawioralnemu. Jako warunek wstępny dla towarzyszącej analizy immunohistologicznej szczegółowo przedstawiono przygotowanie rdzenia kręgowego.

Badania kliniczne i usuwanie rdzenia kręgowego w modelu mysim stwardnienia zanikowego bocznego (ALS)

Umieść głowę pacjenta ze stwardnieniem rozsianym wewnątrz cewki o częstotliwości radiowej lub RF aparatu do rezonansu magnetycznego. Rozpocznij odzyskiwanie inwersji osłabionej płynem lub obrazowanie FLAIR. Wybierz wycinek mózgu zawierający zmiany w pobliżu obszarów bogatych w płyn mózgowo-rdzeniowy. System generuje silne pole magnetyczne, wyrównując protony w zdrowej i uszkodzonej tkance mózgowej oraz płyn mózgowo-rdzeniowy wzdłuż swojego kierunku, tworząc namagnesowanie netto. Zastosuj...

Rezonans magnetyczny z odzysku inwersji z atenuacją płynów w celu wizualizacji zmian w stwardnieniu rozsianym

Zdysocjowany zanik wewnętrznych mięśni ręki, określany jako rozszczepiona ręka, wydaje się być specyficzną cechą stwardnienia zanikowego bocznego (ALS). W związku z tym opracowano nowy test neurodiagnostyczny, określany jako wskaźnik rozszczepienia ręki, w celu ilościowego określenia klinicznego zjawiska rozszczepienia ręki, które odróżniało ALS od zaburzeń mimicznych.

Użyteczność zdysocjowanego wewnętrznego zaniku mięśni ręki w diagnostyce stwardnienia zanikowego bocznego

Precyzyjny pomiar neurologicznego i neuropsychologicznego upośledzenia i niepełnosprawności w stwardnieniu rozsianym jest wyzwaniem. Przedstawiamy szczegóły metodologiczne dotyczące nowego testu, Testu Wydajności Stwardnienia Rozsianego (MSPT). To nowe podejście do celu, jakim jest kwantyfikacja niepełnosprawności związanej ze stwardnieniem rozsianym, stanowi platformę komputerową do precyzyjnego i wiarygodnego pomiaru ciężkości stwardnienia rozsianego.

Test wydajności stwardnienia rozsianego (MSPT): narzędzie do oceny niepełnosprawności oparte na iPadzie

Zorganizowane procedury cięcia mózgu są konieczne, aby skorelować określone zjawiska neuropsychiatryczne z ostatecznymi diagnozami neuropatologicznymi. Cięcia mózgu są wykonywane w różny sposób w zależności od różnych kliniczno-akademickich okoliczności. Protokół ten opisuje symetryczną procedurę dwupółkulowego cięcia mózgu w celu zbadania różnic półkulowych w patologiach ludzkiego mózgu oraz maksymalizacji obecnych i przyszłych technik biomolekularnych/neuroobrazowania.

Symetryczne pośmiertne cięcie mózgu w bihemferze w celu zbadania zdrowych i patologicznych stanów mózgu u ludzi

Obrazowanie molekularne z laserową desorpcją/jonizacją wspomaganą matrycą, spektrometria mas (MALDI-IMS) pozwala na jednoczesne mapowanie wielu analitów w próbkach biologicznych. W tym miejscu przedstawiamy protokół wykrywania i wizualizacji białka β amyloidu w tkankach mózgowych choroby Alzheimera i próbkach mózgowej angiopatii amyloidowej za pomocą MALDI-IMS.

Wizualizacja złogów β amyloidu w ludzkim mózgu za pomocą spektrometrii mas z desorpcją/jonizacją laserową wspomaganą matrycą

Ten protokół opisuje metodę śledzenia indywidualnych trajektorii starzenia się mózgu poprzez program dawstwa mózgu i właściwą charakterystykę mózgów. Dawcy mózgu biorą udział w długoterminowym badaniu podłużnym, w tym w seryjnych ocenach wielowymiarowych. Protokół zawiera szczegółowy opis przetwarzania przez mózg i dokładną metodologię diagnostyczną.

Protokół Abbiategrasso Brain Bank do gromadzenia, przetwarzania i charakteryzowania starzejących się mózgów

Niniejszy protokół opisuje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia w modelu mysim przy użyciu glikoproteiny oligodendrocytów mieliny i monitorowanie procesu chorobowego za pomocą systemu punktacji klinicznej. Eksperymentalne objawy związane z autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego są analizowane za pomocą analizy mikrotomografii komputerowej kości udowej myszy i testu terenowego w celu kompleksowej oceny procesu chorobowego.

Indukcja i zróżnicowane wskaźniki oceny eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Poznaj metodę szybkiej autopsji do badania patogenezy stwardnienia rozsianego z wykorzystaniem MRI in situ i analizy molekularnej tkanek mózgowych. Technika ta umożliwia kompleksowe badania immunohistochemiczne oraz RNA.

Kompleksowy program autopsji dla osób ze stwardnieniem rozsianym

Przeglądaj więcej filmów