RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
pl_PL
Menu
Menu
Menu
Menu
DOI: 10.3791/60003-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol enables the specific labeling of mitochondrial nucleoids in live cells, facilitating the quantitative study of their motion at high resolution. By utilizing a commercially available DNA gel stain, the method circumvents the need for fluorescent protein overexpression, thus avoiding artifacts and broadening applicability to non-transfectable cell types.
Protokół opisuje specyficzne znakowanie nukleoidów mitochondrialnych za pomocą komercyjnie dostępnego barwnika żelowego DNA, akwizycję serii poklatkowych żywych znakowanych komórek za pomocą super-rozdzielczej mikroskopii oświetlenia strukturalnego (SR-SIM) oraz automatyczne śledzenie ruchu nukleoidów.
Protokół pozwala na specyficzne znakowanie nukleoidów mitochondrialnych w żywych komórkach i ilościowe badanie ich ruchu w wysokiej rozdzielczości. Inkubacja z barwnikiem fluorescencyjnym jedynie omija potrzebę nadmiernej ekspresji białka fluorescencyjnego, unikając powiązanych artefaktów i ograniczeń oraz umożliwiając zastosowanie naszego protokołu do komórek nietransfekulowalnych. Aby uzyskać preferencyjne barwienie nukleoidów, należy użyć SYBR Gold i niczego innego w warunkach, które zoptymalizowaliśmy.
W przeciwnym razie całkowite DNA komórkowe może zostać wybarwione. Na dzień przed procedurą znakowania należy wyhodować cztery razy 10 do piątej komórki HeLa w dwóch mililitrach pożywki na 35-milimetrowej szalce Petriego. Następnego ranka umyj komórki w dwóch mililitrach PBS przed dodaniem jednego mililitra pożywki hodowlanej wolnej czerwieni fenolowej i jednego mililitra odpowiedniego roztworu do znakowania 2X.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Related Videos
04:50
Related Videos
17.3K Views
04:11
Related Videos
591 Views
10:31
Related Videos
10.7K Views
11:06
Related Videos
9.1K Views
09:21
Related Videos
14K Views
08:33
Related Videos
4.9K Views
10:47
Related Videos
4.5K Views
08:33
Related Videos
1K Views
08:48
Related Videos
4.9K Views
06:57
Related Videos
1.5K Views