Name: Zrozumienie zmian w morfologii mitochondriów za pomocą dynamicznych i trójwymiarowych mikrofotografii fluorescencyjnych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Poznaj metodę analizy dynamiki mitochondrialnej w 3D przy użyciu wtyczki MEL i mikroskopii fluorescencyjnej. To podejście umożliwia automatyczną kwantyfikację procesów fuzji i fragmentacji w komórkach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania te zostały sfinansowane przez Uniwersytet Stellenbosch w Republice Południowej Afryki, Południowoafrykańską Radę ds. Badań Medycznych (SAMRC) i Narodową Fundację Badawczą (NRF) Republiki Południowej Afryki, a także Kanadyjskie Instytuty Badań nad Zdrowiem (CIHR) oraz Kanadyjską Radę ds. Badań Przyrodniczych i Inżynieryjnych (NSERC).

1. Leczenie komórkowe i akwizycja mikroskopowa
<ol>
	<li>Hodowla komórek GT1-7 w 8 komorowych szalkach w DMEM uzupełniona 10% FBS i 1% Pentrep (kompletne podłoża). Pozwól komórkom przyłączyć się przez noc, a następnie potraktuj 2,5 mM chlorowodorku metforminy wyprodukowanego w DMEM z 10% FBS przez 72 godziny, pamiętając o wymianie pożywki co 24 godziny. Współtraktować komórki 10 μM CCCP 6 godzin przed obrazowaniem i 400 nM bafilomycyny A1 (Baf) 4 godziny przed obrazowaniem. UWAGA: Można to zrobić z dowolną wybraną linią komórek eukariotycznych.</li>
	<li>Przed obrazowaniem należy przygotować koktajl wstępnie podgrzanych kompletnych pożywek zawierających 5 nM Hoechst i 100 nM TMRE.</li>
	<li>Zastąp pożywkę do leczenia komórkowego koktajlem obrazowania i odczekaj 10 minut inkubacji przed obrazowaniem. UWAGA: Ze względu na dynamiczną aktywność mitochondriów, komórki powinny być obrazowane za pomocą mikroskopu z komorą inkubacyjną ustawioną na 37 °C i 5% CO2 .</li>
</ol>
2. Obrazowanie
<ol>
	<li>Komórki obrazu przy użyciu 100-krotnego powiększenia z 1,4 NA.</li>
	<li>Dostosuj moc lasera tak, aby moc była wystarczająco niska, aby uniknąć fotowybielania, ~2%. Upewnij się, że szybkość skanowania jest wysoka. Rób obrazy w rozdzielczości 512 x 512.</li>
	<li>Ustaw odstępy między plasterkami Z w krokach co 0,25 μm. Aby postępować zgodnie z tym protokołem, zobrazuj komórki tak, aby składały się z 10 stosów Z. Zdobądź pięć przedziałów czasowych bez żadnego odstępu między nabyciem stosu Z. UWAGA: Po zoptymalizowaniu protokół ten nie powinien być dostosowywany między grupami leczonymi lub grupami eksperymentalnymi, ponieważ wymienione tutaj makra wymagają, aby protokół obrazowania był ustandaryzowany we wszystkich komórkach.</li>
</ol>
3. Ocena obliczeniowa
UWAGA: Całe późniejsze przetwarzanie zostało wykonane przy użyciu ImageJ v1.53t. Wtyczkę MEL, a także moduły pomocnicze, można znaleźć pod adresem https://github.com/rensutheart/MEL-Fiji-Plugin, podczas gdy wszystkie używane makra można znaleźć pod adresem https://github.com/rensutheart/FMPP/tree/master/Sections.
<ol>
	<li>Przygotowanie obrazu<ol>
		<li>Otwórz plik RAW w ImageJ.</li>
		<li>Aby wykadrować wiele komórek z jednego mikrografu, zacznij od zduplikowania obrazu do liczby pojedynczych komórek, które mają być analizowane.</li>
		<li>Użyj narzędzia do synchronizacji okien, narzędzia do rysowania odręcznego i dopasowania kolorów, aby narysować obszar zainteresowania wokół interesującej komórki, w której w polu widzenia znajduje się wiele komórek (rysunek uzupełniający S1).</li>
		<li>Kliknij Edytuj | Czysty na zewnątrz.</li>
		<li>Oddziel kanały czerwony i niebieski od siebie i zapisz kanał mitochondrialny jako . Plik TIFF.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Generowanie i dekonwolucja funkcji rozproszenia punktów<ol>
		<li>Aby wygenerować funkcję rozproszenia punktowego (PSF), użyj wtyczki generatora PSF , korzystając z osadzonych informacji mikrograficznych. Przejdź do Wtyczki | Generator PSF , aby otworzyć wtyczkę. Dodatkowo przejdź do punktu menu Obraz | Pokaż informacje... lub naciśnij I, aby otworzyć informacje o obrazie, i przewiń w dół. Korzystając z rozmiaru i głębokości woksela, w polu informacyjnym pokazu zmień rozmiar piksela XY na 166,1 nm i krok Z na 200 nm. Zmień długość fali na 568 nm, rozmiar XYZ , aby dopasować rozdzielczość obrazu 512 x 512 i stos Z składający się z 10 warstw Z (rysunek uzupełniający S2).</li>
		<li>Przejdź do Wtyczki | Makra | Edycja | Deconvolution_time_lapse_mine.ijm makra.</li>
		<li>Edytuj linie wejściowe i wyjściowe i naciśnij przycisk uruchamiania (rysunek uzupełniający S3).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Poprawa kontrastu obrazu i rozmycie<ol>
		<li>Przejdź do Wtyczki | Makra | Edycja | Przetwarzanie wstępne.ijm.</li>
		<li>W makrach Preprocessing.ijm użyj odejmowania tła o promieniu toczącej się kuli równym 6. Ustaw Sigma Filter Plus tak, aby promień był równy 1, używane piksele były równe 2, a minimalny ułamek pikseli był równy 0,2, przy czym wtyczka jest świadoma wartości odstających. Dostosuj ustawienia CLAHE tak, aby rozmiar bloku wynosił 64; ustaw przedziały histogramu na 256, maksymalne nachylenie na 2,5, a krzywą gamma na 0,8. UWAGA: Wszystkie te ustawienia zostały zoptymalizowane pod kątem naszych zestawów danych, a wartości powinny zostać zoptymalizowane pod kątem alternatywnych zestawów danych przed zastosowaniem. Filtrowanie Sigma jest stosowane w celu wygładzenia obrazu i skutecznego mieszania pobliskich pikseli w celu zapewnienia spójnych struktur. Kontrast lokalny jest stosowany w celu zwiększenia kontrastu między jasnymi i ciemnymi pikselami, a w połączeniu ze zmianą gamma zwiększa obecność struktur mitochondrialnych, jednocześnie minimalizując piksele tła.</li>
		<li>Zmień wiersz wejściowy na folder zawierający mikrofotografie, które zostały poddane dekonwolucji (rysunek uzupełniający S4).</li>
		<li>Kliknij przycisk Uruchom.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Progowanie obrazu UWAGA: Chociaż użytkownicy mogą korzystać z dowolnego wybranego przez siebie narzędzia do progowania, zalecamy wtyczkę adaptacyjnego progowania firmy Qingzong Tseng (https://sites.google.com/site/qingzongtseng/adaptivethreshold).<ol>
		<li>Otwórz interesujący plik, który został zmodyfikowany przez makra Preprocessed.ijm w ImageJ.</li>
		<li>Przejdź do Wtyczki | adaptiveThr.</li>
		<li>Ustaw próg lokalny na średnią ważoną i rozmiar bloku pikseli zgodnie z preferencjami użytkownika. UWAGA: Rozmiar bloku pikseli powinien być spójny między komórkami, ponieważ ta wartość wpływa na oceny wymiarów mitochondrialnych, takie jak objętość lub proporcje.</li>
		<li>Aby zoptymalizować pod kątem czasu, kliknij podgląd i dostosuj rozmiar bloku tak, aby jak najwięcej mitochondriów było wyraźnie uwzględnionych. Dostosuj także wartość odejmowania dla każdej komórki, aby wyeliminować niepotrzebne tło. Zapisz pliki mikrograficzne w folderach powiązanych z wartością odejmowania (rysunek uzupełniający S5). UWAGA: Makra Threshold.ijm zawierają filtr rozmiaru, który eliminuje mniejsze cząstki.</li>
		<li>Wybierz Wtyczki | Makra | Edycja | Próg.ijm.</li>
		<li>Edytuj wiersze input_path i output_path, a także blockSize i odejmij wiersze w skrypcie makr (Rysunek uzupełniający S6).</li>
		<li>Kliknij przycisk Uruchom.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykrywanie zdarzeń rozszczepienia i fuzji za pomocą wtyczki lokalizatora zdarzeń mitochondrialnych (MEL) UWAGA: MEL jest przeznaczony do przetwarzania poklatkowej sekwencji stosów z składających się z jednego kanału, zapisywanych jako pojedynczy plik TIFF na raz. Chociaż można to zrobić, zmieniając linię wejściową na interesujący nas plik Tiff z progiem, zademonstrujemy również metodę przetwarzania wielu plików Tiff jednocześnie za pomocą funkcji concatenate w ImageJ.<ol>
		<li>Otwórz do 10 mikrofotografii progowych, które należą do tych samych warunków leczenia. UWAGA: Aby to zadziałało, mikrofotografie muszą mieć taką samą liczbę plasterków Z.</li>
		<li>Przejdź do obrazu | Stosy |Narzędzia | Połącz i naciśnij przycisk OK.</li>
		<li>Aby usunąć pozostałą małą puncta pozostawioną przez progowanie, przejdź do Wtyczki | Zintegrowane filtry obrazów | Usuń wartości odstające. Użyj podglądu , aby ustawić rozmiary X i Y, aby usunąć niezbędne fragmenty.</li>
		<li>Zapisz połączony plik jako plik TIFF.</li>
		<li>Przejdź do Wtyczki | Makra | Edycja | Quicktest_new.ijm i w razie potrzeby edytuj ścieżki wejściowe i wyjściowe (rysunek uzupełniający S7). UWAGA: Po zakończeniu folder o nazwie "MEL_results" zostanie znaleziony w folderze wyjściowym ze wszystkimi wynikami MEL. Są one pokazane jako zdarzenia rozszczepienia i fuzji wykryte w każdym punkcie czasowym, a ostatni punkt czasowy powinien być zawsze usuwany ze względu na sposób, w jaki działa MEL18.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Sancak, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ragulator-rag+complex+targets+mTORC1+to+the+lysosomal+surface+and+is+necessary+for+its+activation+by+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ragulator-rag complex targets mTORC1 to the lysosomal surface and is necessary for its activation by amino acids.</a> Cell. 141 (2), 290-303 (2010).</li>
<li>Bhabha, G., Johnson, G. T., Schroeder, C. M., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+dynein+moves+along+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">How dynein moves along microtubules.</a> Trends Biochem Sci. 41 (1), 94-105 (2016).</li>
<li>Twig, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fission+and+selective+fusion+govern+mitochondrial+segregation+and+elimination+by+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Fission and selective fusion govern mitochondrial segregation and elimination by autophagy.</a> EMBO J. 27 (2), 433-446 (2008).</li>
<li>Rana, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+Drp1-mediated+mitochondrial+fission+in+midlife+prolongs+healthy+lifespan+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Promoting Drp1-mediated mitochondrial fission in midlife prolongs healthy lifespan of Drosophila melanogaster.</a> Nat Commun. 8 (1), 1-14 (2017).</li>
<li>Rolland, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+complex+IV+activity+in+response+to+loss+of+LRPPRC+function+can+be+compensated+by+mitochondrial+hyperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Impaired complex IV activity in response to loss of LRPPRC function can be compensated by mitochondrial hyperfusion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (32), E2967-E2976 (2013).</li>
<li>Sgarbi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+hyperfusion+and+elevated+autophagic+activity+are+key+mechanisms+for+cellular+bioenergetic+preservation+in+centenarians%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">Mitochondria hyperfusion and elevated autophagic activity are key mechanisms for cellular bioenergetic preservation in centenarians.</a> Aging. 6 (4), 296-310 (2014).</li>
<li>Mourier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitofusin+2+is+required+to+maintain+mitochondrial+coenzyme+Q+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitofusin 2 is required to maintain mitochondrial coenzyme Q levels.</a> J Cell Biol. 208 (4), 429-442 (2015).</li>
<li>Ramos, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+fusion+is+required+for+regulation+of+mitochondrial+DNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial fusion is required for regulation of mitochondrial DNA replication.</a> PLoS Genet. 15 (6), e1008085(2019).</li>
<li>Santos, D., Esteves, A. R., Silva, D. F., Januário, C., Cardoso, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+mitochondrial+fusion+and+fission+modulation+in+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The impact of mitochondrial fusion and fission modulation in sporadic Parkinson's disease.</a> Mol Neurobiol. 52 (1), 573-586 (2015).</li>
<li>Joshi, A. U., Saw, N. L., Shamloo, M., Mochly-Rosen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drp1%2Ffis1+interaction+mediates+mitochondrial+dysfunction%2C+bioenergetic+failure+and+cognitive+decline+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Drp1/fis1 interaction mediates mitochondrial dysfunction, bioenergetic failure and cognitive decline in Alzheimer's disease.</a> Oncotarget. 9 (5), 6128-6143 (2018).</li>
<li>Torres, A., Rivera, B., Polanco, C., Jara, C., Tapia-Rojas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylated+tau+as+a+toxic+agent+in+synaptic+mitochondria%3A+Implications+in+aging+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Phosphorylated tau as a toxic agent in synaptic mitochondria: Implications in aging and Alzheimer's disease.</a> Neural Regen Res. 17 (8), 1645-1651 (2022).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+phosphatase+PGAM5+modulates+cellular+senescence+by+regulating+mitochondrial+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial phosphatase PGAM5 modulates cellular senescence by regulating mitochondrial dynamics.</a> Nat Commun. 11 (1), 2549(2020).</li>
<li>Baek, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+structure+and+function+adaptation+in+residual+triple+negative+breast+cancer+cells+surviving+chemotherapy+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial structure and function adaptation in residual triple negative breast cancer cells surviving chemotherapy treatment.</a> Oncogene. 42 (14), 1117-1131 (2023).</li>
<li>Nag, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGAM5+is+an+MFN2+phosphatase+that+plays+an+essential+role+in+the+regulation+of+mitochondrial+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">PGAM5 is an MFN2 phosphatase that plays an essential role in the regulation of mitochondrial dynamics.</a> Cell Rep. 42 (8), 112895-112895 (2023).</li>
<li>Robertson, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DRP1+mutations+associated+with+EMPF1+encephalopathy+alter+mitochondrial+membrane+potential+and+metabolic+programs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">DRP1 mutations associated with EMPF1 encephalopathy alter mitochondrial membrane potential and metabolic programs.</a> J Cell Sci. 136 (3), jcs260370(2023).</li>
<li>Chaudhry, A., Shi, R., Luciani, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pipeline+for+multidimensional+confocal+analysis+of+mitochondrial+morphology%2C+function%2C+and+dynamics+in+pancreatic+%CE%B2-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">A pipeline for multidimensional confocal analysis of mitochondrial morphology, function, and dynamics in pancreatic β-cells.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 318 (2), E87-E101 (2020).</li>
<li>Bernhardt, D., Müller, M., Reichert, A. S., Osiewacz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+impairment+of+mitochondrial+fission+and+fusion+reduces+mitophagy+and+shortens+replicative+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Simultaneous impairment of mitochondrial fission and fusion reduces mitophagy and shortens replicative lifespan.</a> Sci Rep. 5, 7885(2015).</li>
<li>Theart, R. P., Kriel, J., Du Toit, A., Loos, B., Niesler, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+event+localiser+%28mel%29+to+quantitatively+describe+fission%2C+fusion+and+depolarisation+in+the+three-dimensional+space%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial event localiser (mel) to quantitatively describe fission, fusion and depolarisation in the three-dimensional space.</a> PLoS ONE. 15 (12), e0229634(2020).</li>
<li>McCarron, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+structure+to+function%3A+Mitochondrial+morphology%2C+motion+and+shaping+in+vascular+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">From structure to function: Mitochondrial morphology, motion and shaping in vascular smooth muscle.</a> J Vasc Res. 50 (5), 357-371 (2013).</li>
<li>Peng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+mitochondrial+biogenesis+and+fission%2Ffusion+mediated+by+PGC-1%CE%B1+regulates+rotenone-induced+dopaminergic+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The interaction of mitochondrial biogenesis and fission/fusion mediated by PGC-1α regulates rotenone-induced dopaminergic neurotoxicity.</a> Mol Neurobiol. 54 (5), 3783-3797 (2017).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+mitochondria+membrane+potential+and+lysosomal+acidification+are+associated+with+decreased+oligomeric+A%CE%B2+degradation+induced+by+hyperglycemia%3A+A+study+of+mixed+glia+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Reduced mitochondria membrane potential and lysosomal acidification are associated with decreased oligomeric Aβ degradation induced by hyperglycemia: A study of mixed glia cultures.</a> PLoS ONE. 17 (1), e0260966(2022).</li>
<li>Martín-Maestro, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slower+dynamics+and+aged+mitochondria+in+sporadic+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidat+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Slower dynamics and aged mitochondria in sporadic Alzheimer's disease.</a> Oxidat Med Cell Longev. 2017, 9302761(2017).</li>
<li>De Wet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+highs+and+lows+of+memantine-an+autophagy+and+mitophagy+inducing+agent+that+protects+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The highs and lows of memantine-an autophagy and mitophagy inducing agent that protects mitochondria.</a> Cells. 12 (13), 1726-1726 (2023).</li>
<li>Kleele, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+fission+signatures+predict+mitochondrial+degradation+or+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct fission signatures predict mitochondrial degradation or biogenesis.</a> Nature. 593 (7859), 435-439 (2021).</li>
<li>Jenkins, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+disease%3A+Changes+in+shapes+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in disease: Changes in shapes and dynamics.</a> Trends Biochem Sci. 49 (4), 346-360 (2024).</li>
<li>Izzo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metformin+restores+the+mitochondrial+network+and+reverses+mitochondrial+dysfunction+in+down+syndrome+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Metformin restores the mitochondrial network and reverses mitochondrial dysfunction in down syndrome cells.</a> Hum Mol Genet. 26 (6), 1056-1069 (2017).</li>
<li>Buchanan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propionic+acid+induces+alterations+in+mitochondrial+morphology+and+dynamics+in+SH-SY5Y+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Propionic acid induces alterations in mitochondrial morphology and dynamics in SH-SY5Y cells.</a> Sci Rep. 13 (1), 13248(2023).</li>
<li>Rohani, A., Kashatus, J. A., Sessions, D. T., Sharmin, S., Kashatus, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mito+hacker%3A+A+set+of+tools+to+enable+high-throughput+analysis+of+mitochondrial+network+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Mito hacker: A set of tools to enable high-throughput analysis of mitochondrial network morphology.</a> Sci Rep. 10 (1), 18941(2020).</li>
<li>Qiao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rationalized+deep+learning+super-resolution+microscopy+for+sustained+live+imaging+of+rapid+subcellular+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Rationalized deep learning super-resolution microscopy for sustained live imaging of rapid subcellular processes.</a> Nat Biotechnol. 41 (3), 367-377 (2023).</li>
<li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+segmentation+and+function+prediction+in+live-cell+images+with+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial segmentation and function prediction in live-cell images with deep learning.</a> Nat Commun. 16 (1), 743(2025).</li>
<li>Ezzahoini, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SIRT4+interacts+with+OPA1+and+regulates+mitochondrial+quality+control+and+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">SIRT4 interacts with OPA1 and regulates mitochondrial quality control and mitophagy.</a> Aging. 10 (9), 2536-2536 (2017).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Chociaż istnieje coraz więcej podejść do opisu morfologii mitochondriów, dostępne są ograniczone techniki odpowiedniego uchwycenia dynamiki mitochondriów w sposób ilościowy. Dodatkowo należy zauważyć, że morfologia sieci mitochondrialnej, a także mechanizmy rządzące tą morfologią mają zróżnicowany charakter. Powoduje to powstawanie sieci, które są powiązane z potrzebami komórki, począwszy od rozgałęzionej formacji zwiększającej produkcję energii, a skończywszy na czasowo odrębnych regionach rozszczepienia, które ułatwiaj...

Mitochondria to wysoce dynamiczne organelle obecne we wszystkich komórkach eukariotycznych, dostarczające im energii i regulujące ich metabolizm. Tak więc mitochondria znajdują się na skrzyżowaniu śmierci komórkowej i przetrwania. Wykazano, że mitochondria są niezbędne dla różnych procesów, począwszy od zakwaszenia lizosomów i molekularnego działania motorycznego, a skończywszy na skurczu mięśni i wypalaniu synaps 1,2.
Mitochondria przechodzą regularne rozszczepienia i fuzje, aby utrzymać sieć mitochondrialną, która skutecznie wytwarza ATP w odpowiedzi na zapotrzebowanie metaboliczne komórki i stres. Rzeczywiście, wykazano, że mitochondria ulegają rozszczepieniu, aby ułatwić mitofagię, selektywne usuwanie fragmentów mitochondriów. W związku z tym w układzie komórkowym pozostają tylko aktywnie oddychające i nie zdepolaryzowane mitochondria 3,4. Fuzja występuje jednak jako sposób na zwiększenie wydajności ATP sieci w przypadku zwiększonego zapotrzebowania 5,6. Ponadto wykazano, że zarówno rozszczepienie, jak i fuzja odgrywają ważną rolę w podziale i ochronie mitochondrialnego DNA 7,8. Należy zauważyć, że zakres rozszczepienia i fuzji wymaga starannej kontroli homeostatycznej, aby zapewnić zdrową sieć mitochondrialną, ponieważ wykazano, że zbyt dużo lub zbyt mało któregokolwiek z tych procesów jest szkodliwe.
Wykazano, że nadmierne rozszczepienie prowadzi do fragmentacji sieci mitochondrialnej, a następnie obniżenia poziomu ATP w chorobie Alzheimera, chorobie Parkinsona i tauopatiach 9,10,11, a niski poziom rozszczepienia może prowadzić do akumulacji zdepolaryzowanych mitochondriów, co prowadzi do objawów podobnych do choroby Parkinsona 12. Wiadomo, że hiperfuzja sieci występuje w okresach stresu w celu zwiększenia produkcji ATP. Wykazano jednak, że istnienie w tym stanie przez dłuższy czas zwiększa poziom ROS i aktywność autofagii, co skutkuje początkiem śmierci komórki 9,12.
Staje się zatem jasne, że zrozumienie stanu sieci mitochondrialnej daje kluczowy wgląd w zrozumienie stanu komórki, a tym samym organizmu. Wyraźne znaczenie zrozumienia sieci mitochondrialnej w kontekście zdrowia i choroby, jej zdolności do ulegania zdarzeniu rozszczepienia i fuzji oraz ich wpływowi na zdrowie komórkowe jest tym, co zmotywowało opracowanie tego protokołu i powiązanych narzędzi analitycznych. W szczególności narzędzia, które umożliwiają charakterystykę dynamiki mitochondriów, są w dużej mierze ograniczone i słabo opisane w literaturze.
Morfologia mitochondriów jest zwykle określana za pomocą mikroskopii konfokalnej, a następnie analizy obliczeniowej, która wymaga, aby surowe mikrofotografie zostały poddane pewnemu stopniowi przetwarzania w celu poprawy ich jakości do oceny, ponieważ najlepiej opisuje to organizację mitochondriów. W ten sposób użytkownicy mogą określić wiele wyników morfometrycznych sieci mitochondrialnej, takich jak liczba, objętość, długość i proporcje 13,14,15. Użytkownicy mogą korzystać z mikrofotografii 2D lub 3D do oceny morfologicznej, chociaż analiza 3D oferuje większą dokładność i wgląd, ponieważ sieć mitochondrialna składa się ze struktur 3D. Do celów analizy rozszczepienia i fuzji zaleca się stosowanie mikrofotografii z osią z, ponieważ najlepiej kompensuje to trójwymiarowość sieci mitochondrialnej16.
Wiele badań obejmuje kategoryzację mitochondriów na stany rozdrobnione, nitkowate lub pośrednie jako sposób opisu sieci16,17. Analiza 3D jest szczególnie korzystna ze względu na różne kształty, jakie mitochondria przybierają w komórce. Dodanie trójwymiarowości do badania daje pewność, zwłaszcza w odniesieniu do liczby mitochondriów, ponieważ mitochondria mogą poruszać się w górę lub w dół wzdłuż osi z. MEL to wtyczka ImageJ, która jest zależna od obrazów przechwyconych w 3D18. W tym przypadku wykorzystaliśmy mysie komórki neuronalne hipokampa GT1-7 barwione TMRE i Hoechst do wizualizacji sieci mitochondrialnej, a także jądra komórki. Komórki zostały następnie umieszczone w procesie przetwarzania wstępnego w celu poprawy jakości mikrofotografii w ramach przygotowań do analizy obrazu.
Udostępniono wiele technik, które pozwalają na określenie morfologii mitochondriów na podstawie metryk statycznych. Niewiele z nich obejmuje działania związane z rozszczepieniem i fuzją i umożliwia ilościowe uchwycenie dynamicznego zachowania mitochondriów 13,19,20,21. W tym miejscu opiszemy protokół poprawy obrazu przed określeniem charakterystyki sieci, ze szczególnym uwzględnieniem rozszczepienia mitochondriów i aktywności fuzyjnej. Pokażemy, w jaki sposób technika ta może uzupełniać wcześniej opublikowane metody określania morfologii mitochondriów.

<table><tbody><tr><td>8 naczyń komorowych</td><td>Rybak termiczny</td><td>#Z734853</td><td></td></tr><tr><td>Dostosowane progi</td><td></td><td></td><td>https://sites.google.com/site/qingzongtseng/adaptivethreshold</td></tr><tr><td>Bafilomycyna A1</td><td>Laboratoria LKT</td><td>#B0026</td><td></td></tr><tr><td>Chlorofenylohydrazon cyjanku karbonylu (CCCP)</td><td>Merck</td><td>#C2759</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop konfokalny</td><td>Carl Zeiss AG</td><td></td><td>Platforma superrozdzielczości LSM780 ELYRA PS.1</td></tr><tr><td>Zmodyfikowane podłoże Dulbecco Eagle (DMEM)</td><td>Rybak termiczny</td><td>#341956062</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#F0679</td><td></td></tr><tr><td>Link do usługi Github</td><td></td><td></td><td>https://github.com/rensutheart/MEL-Fiji-Plugin</td></tr><tr><td>GraphPad Prism v7.06</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ogniwa GT1-7</td><td>Kontroler ATCC (Kontroler T</td><td>Zobacz materiał SCC116</td><td></td></tr><tr><td>Hoecsht powiedział:</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Zobacz materiał H6024</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ v1.53t</td><td>Fidżi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Makra</td><td></td><td></td><td>https://github.com/rensutheart/FMPP/tree/master/Sections</td></tr><tr><td>Metformina</td><td>Farmakopea Europejska</td><td>M06050000</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina/streptomycyna (PenStrep)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#P4333</td><td></td></tr><tr><td>T25s</td><td>Bio-Smart Naukowy</td><td>#70025</td><td></td></tr><tr><td>TMRE (Międzynarodowa Organizacja T</td><td>Rybak termiczny</td><td>#T669</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

zrozumienie zmian w morfologii mitochondriów za pomocą dynamicznych i trójwymiarowych mikrofotografii fluorescencyjnych

Understanding the Changes in Mitochondrial Morphology through Dynamic and Three-dimensional Fluorescence Micrographs

Mitochondria to wysoce dynamiczne organelle, które są niezbędne do przetrwania każdego zwierzęcia, ulegając regularnym rozszczepieniom i fuzjom w odpowiedzi na potrzeby lub stresy gospodarza, co prowadzi do ciągłej przebudowy sieci mitochondrialnej. Z tego powodu możliwość oceny sieci mitochondrialnej w trzech wymiarach, a także w czasie, przynosi korzyści w zrozumieniu, w jaki sposób system reaguje na czynniki takie jak stres lub interwencja farmaceutyczna. Obrazowanie fluorescencyjne sieci mitochondrialnych komórek umożliwia wizualizację i monitorowanie tych zmian. Jednak sieć mitochondrialna jest często opisywana jako dwuwymiarowa i statyczna struktura, która jest definiowana przez niestandaryzowane metryki. Dlatego postanowiliśmy opisać potok, który umożliwia użytkownikowi przygotowanie obrazów dla lokalizatora zdarzeń mitochondrialnych (MEL), narzędzia wtyczki ImageJ, które wykrywa zdarzenia rozszczepienia i fuzji w sieci mitochondrialnej w czasie i w sposób trójwymiarowy, oferując w ten sposób wgląd w dynamiczne zmiany, jakie przechodzi ta sieć. Dodatkowo opisujemy korzyści płynące ze zrozumienia rozszczepienia i fuzji w świetle zmian w liczbie mitochondriów i zmian morfologicznych.

Wybór odpowiednich komórek 
Użytkownicy powinni mieć świadomość, że sieć mitochondrialna zmienia się w zależności od stanu mitotycznego komórki. Jeśli jądro przyjmie kształt hantla lub litery U, lub jeśli w pobliżu jądra pojawi się obszar pozbawiony sygnału fluorescencyjnego, może to świadczyć o tym, że komórka zbliża się do fazy mitozy. W tym stanie mitochondria prawdopodobnie ulegają fission w związku z podziałem komórki, a nie w wyniku zastosowanej interwencji i jej wpływu na sieć (Rycina u...

W tym miejscu opisujemy lokalizator zdarzeń mitochondrialnych (MEL), wtyczkę ImageJ przydatną w ilościowym określaniu trójwymiarowych zmian w rozszczepieniu mitochondriów i aktywności fuzyjnej w czasie. Opisujemy również potok przetwarzania obrazu przydatny do czyszczenia mikrofotografii przed analizą w ImageJ.

Zrozumienie zmian w morfologii mitochondriów za pomocą dynamicznych i trójwymiarowych mikrofotografii fluorescencyjnych

Mitochondria are highly dynamic organelles that are vital to the survival of any animal, undergoing regular fission and fusion events in response to the ...

Celem naszych badań jest obserwacja zmian w sieciach mitochondrialnych i zbadanie, jak te sieci mitochondrialne zmieniają się w odpowiedzi na warunki komórkowe. Używamy narzędzi open source, takich jak Fiji i Python, łącząc istniejące biblioteki z niestandardowymi makrami i skryptami, aby zautomatyzować analizę morfologii mitochondriów na podstawie złożonych danych z mikroskopii fluorescencyjnej. Uzyskanie wiarygodnych danych ilościowych i metryk opisujących dynamikę rozszczepienia i fuzji mitochondriów wraz z ich lokalizacją w 3D pozostaje wyzwaniem.Standaryzacja takiego generowania danych nie jest powszechnie dostępna. W związku z tym istnieje ograniczona wiedza na temat częstotliwości rozszczepienia i fuzji specyficznej dla komórki oraz lokalizacji wewnątrzkomórkowej. Do dostępnych wskaźników badawczych dodaliśmy wykrywanie życia rozszczepienia i fuzji mitochondrialnej.Łącząc je z liczbą struktur mitochondrialnych, byliśmy w stanie zdefiniować nowy wskaźnik do zrozumienia dynamiki sieci mitochondrialnej. Nasze odkrycia pozwalają nam scharakteryzować specyficzne dla komórki parametry rozszczepienia i fuzji oraz po raz pierwszy określić, czy system mitochondrialny jest w równowadze, czy się zmienia. Zapobiega to poważnym błędnym interpretacjom fenotypów w zdrowiu i chorobie oraz zapewnia jasne ramy dla dokładnego raportowania.Aby rozpocząć, otwórz plik RAW w ImageJ. Dostosuj ustawienia kolorów, aby zwiększyć widoczność obszaru zainteresowania, ale nie ustawiaj niczego. Zduplikuj obraz zgodnie z liczbą pojedynczych komórek, które należy przeanalizować.Jeśli w polu widzenia znajduje się wiele komórek, przejdź do sekcji Analizuj, Narzędzia i użyj narzędzi Zsynchronizowany system Windows oraz narzędzia Rysowanie odręczne, aby narysować obszar zainteresowania wokół interesującej komórki, a następnie wybierz opcję Edytuj i wybierz opcję Wyczyść na zewnątrz, aby wyizolować wybraną komórkę. Oddziel kanały czerwony i niebieski od siebie i zapisz kanał mitochondrialny jako plik tif. Aby wygenerować funkcję rozproszenia punktowego lub PSF, ponownie otwórz obraz RAW.Następnie otwórz wtyczkę generatora PSF, wybierając Wtyczki, a następnie wybierając Generator PSF i wybierając model optyczny 3D Born wolf. Otwórz informacje o obrazie nieprzetworzonym, wybierając pozycję Obraz, a następnie wybierając opcję Pokaż informacje lub naciskając I na klawiaturze. Przewiń do dołu okna informacji o obrazie.Wybierz opcję rozmiaru i głębokości woksela i zmień długość fali na 568 nanometrów. Ustaw rozmiar piksela XY na 166,1 nanometra, krok Z na 200 nanometrów. Ustaw rozmiar XYZ tak, aby odpowiadał rozdzielczości obrazu 512 x 512, a stos Z można skonfigurować tak, aby zawierał 10 plasterków Z.Kliknij Uruchom. Zapisz plik PSF jako plik tif w osobnym folderze. Przejdź do Wtyczki, wybierz Makra, a następnie wybierz Edytuj, a następnie Deconvolution_time_lapse_mine.ijm, aby uzyskać dostęp do makra dekonwolucji. Edytuj wiersze wejściowe i wyjściowe zgodnie z wymaganiami, a następnie naciśnij przycisk Uruchom, aby uruchomić makro. Aby poprawić kontrast obrazu i rozmycie, przejdź do Wtyczki, wybierz Makra, wybierz Edytuj i otwórz Przetwarzanie wstępne.icm, aby uzyskać dostęp do makra przetwarzania wstępnego. Wykonaj odejmowanie tła, ustawiając promień toczącej się kuli na 6. Ustaw filtr Sigma Filter Plus w taki sposób, aby promień był ustawiony na 1-krotność współczynnika skali.Liczba użytych pikseli wynosi 2, a minimalny ułamek pikseli to 0,2, co zapewnia, że wtyczka jest ustawiona tak, aby była świadoma wartości odstających. Dostosuj ustawienia CLAHE, konfigurując rozmiar bloku na 64, przedziały histogramu na 256, maksymalne nachylenie na 2,5 i krzywą gamma na 0,8, a następnie kliknij przycisk Uruchom. Otwórz interesujący plik, który został zmodyfikowany za pomocą procesu wstępnego.makra ijm w ImageJ. Przejdź do Wtyczki i wybierz Próg adaptacyjny. Ustaw próg lokalny na średnią ważoną i dostosuj rozmiar bloku pikseli zgodnie z wymaganiami.Kliknij Podgląd i dostosuj rozmiar bloku, aby wyraźnie uwzględnić jak najwięcej mitochondriów. Zmodyfikuj wartość odejmowania dla każdej komórki, aby wyeliminować niepotrzebne tło, i zanotuj wynikową mikrofotografię. Aby zoptymalizować pod kątem czasu, posortuj obrazy w plikach zgodnie z zastosowaną wartością odejmowania.Teraz przejdź do Wtyczki, wybierz Makra, wybierz Edytuj i otwórz Próg. ijm, aby uzyskać dostęp do makra progowego. Edytuj skrypt makra, aby zdefiniować poprawne ścieżki wejściowe i wyjściowe, rozmiar bloku i wartości odejmowania.Kliknij przycisk Uruchom, aby uruchomić makro. Otwórz do 10 mikrofotografii progowych, które należą do tego samego schorzenia zabiegowego. Przejdź do Obraz, stosy, narzędzia i wybierz Połącz, a następnie naciśnij OK.To usuń resztki małych punktów pozostawionych przez próg, przejdź do Wtyczki, a następnie Integralne filtry obrazu, a następnie wybierz Usuń wartości odstające.Użyj podglądu, aby dostosować rozmiary X i Y w celu wyeliminowania fragmentów. Zapisz połączony plik jako plik TIF. Na koniec przejdź do Wtyczki, Makra, Edycja, QuickTest_new.ijm.Edytuj wiersze ścieżki wejściowej i wyjściowej, aby wskazać odpowiednie katalogi, kliknij przycisk Uruchom i zwizualizuj lokalizator zdarzeń mitochondrialnych lub wyniki MEL. Dynamika mitochondriów była śledzona w czasie, z czerwonymi puncta oznaczającymi zdarzenia rozszczepienia i zielonymi puncta oznaczającymi zdarzenia fuzji zarówno w widokach 3D, jak i 2D. Sieci mitochondrialne wykazywały specyficzne dla leczenia różnice w strukturze w czasie, z bardziej wydłużonymi i połączonymi formami w komórkach leczonych metforminą i wysoce rozdrobnionymi sieciami w komórkach leczonych metforminą CCCP Baf.Grupa przyjmująca metforminę CCCP Baf wykazała znacznie wyższą aktywność rozszczepienia i fuzji niż grupa kontrolna lub grupa otrzymująca tylko metforminę, co sugeruje zwiększoną przebudowę mitochondriów. Ta grupa miała również znacznie wyższą liczbę mitochondriów, co było zgodne ze zwiększoną fragmentacją. Objętość mitochondriów została znacznie zmniejszona w tej samej grupie, co dodatkowo wspiera zmianę w kierunku rozszczepienia.Jednakże, po znormalizowaniu do liczby mitochondrialnej, tylko grupa metforminy wykazywała najwyższą względną aktywność dynamiczną, co sugeruje, że sama metformina promuje bardziej aktywną i wydajną sieć przebudowy, podczas gdy wspólne leczenie napędza rozległy, ale mniej wydajny obrót strukturalny.

understanding-changes-mitochondrial-morphology-through-dynamic-three

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemia

Fuzję mitochondriów mierzono poprzez śledzenie wyrównywania rozkładu fotokonwertowanego GFP skierowanego do macierzy w całej sieci mitochondrialnej w czasie. Do tej pory jednorazowo analizie kinetycznej trwającej godzinę mogła zostać poddana tylko jedna komórka. Przedstawiamy metodę, która umożliwia jednoczesny pomiar w wielu komórkach, co przyspiesza proces gromadzenia danych.

Szybszy test fuzji mitochondrialnej o wysokiej rozdzielczości, oparty na mtPA-GFP, umożliwiający równoległe pozyskiwanie danych kinetycznych z wielu komórek przy użyciu mikroskopii konfokalnej

Ten protokół wykorzystuje trójwymiarowe (3D) techniki obrazowania i analizy do wizualizacji i ilościowego określenia mitochondriów specyficznych dla nerwów. Techniki te mają zastosowanie w innych sytuacjach, w których jeden sygnał fluorescencyjny jest używany do odizolowania podzbioru danych od innego sygnału fluorescencyjnego.

Trójwymiarowe obrazowanie i analiza mitochondriów w obrębie śródnaskórkowych włókien nerwowych człowieka

W tym protokole demonstrujemy zastosowanie tomografii elektronowej o przekroju szeregowym do wyjaśnienia struktury mitochondrialnej w mięśniu lotu pośredniego Drosophila.

Ultrastruktura mitochondrialna 3D mięśnia lotu pośredniego Drosophila ujawniona przez tomografię elektronową o przekroju szeregowym

Protokół opisuje specyficzne znakowanie nukleoidów mitochondrialnych za pomocą komercyjnie dostępnego barwnika żelowego DNA, akwizycję serii poklatkowych żywych znakowanych komórek za pomocą super-rozdzielczej mikroskopii oświetlenia strukturalnego (SR-SIM) oraz automatyczne śledzenie ruchu nukleoidów.

Specyficzne znakowanie nukleoidów mitochondrialnych dla poklatkowej mikroskopii oświetlenia strukturalnego

Ten artykuł wyjaśnia, jak używać nadzorowanego symulacji uczenia maszynowego do analizy morfologii mitochondriów w obrazach z mikroskopii fluorescencyjnej stałych komórek.

Analiza morfologii mitochondriów za pomocą symulacji uczenia nadzorowanego

Ten protokół opisuje, jak zrekonstruować grzebienie mitochondrialne, aby uzyskać obrazowanie 3D z wysoką dokładnością, wysoką rozdzielczością i wysoką przepustowością.

Trójwymiarowa technika wizualizacji ultrastrukturalnych zmian mitochondrialnych w komórkach raka trzustki

Ten protokół zapewnia ustandaryzowane podejście do obrazowania morfologii mitochondriów w wielu tkankach C. elegans podczas starzenia.

Obrazowanie i ilościowe określanie morfologii mitochondriów u C. elegans podczas starzenia

W tym badaniu opisujemy krok po kroku protokół i kładziemy nacisk na kluczowe szczegóły dotyczące określania cech morfologicznych mitochondriów w żywych komórkach, w tym przygotowanie próbki, akwizycję obrazu i analizę danych. Ta metoda jest powszechnie stosowana do badania morfologii mitochondriów w celu badania różnych schorzeń.

Oznaczanie morfologii mitochondriów w żywych komórkach za pomocą mikroskopii konfokalnej

Artykuł ten opisuje wykorzystanie mikroskopii konfokalnej oraz ImageJ do oceny dynamiki rozszczepienia i fuzji mitochondriów za pomocą fluorescencji przełączającej się foto Dendra2.

Ocena dynamiki rozszczepienia/fuzji mitochondrialnej w komórkach rurkowatych nerek bliższych

Ten artykuł opisuje metodę oceny interakcji i zespołów integralnych białek błonowych in vitro z różnymi czynnikami partnerskimi w środowisku lipidowo-proksymalnym.

Wykorzystanie liposomów rusztowania do odtworzenia interakcji lipidowo-proksymalnych białko-białko in vitro

Poznaj metodę analizy dynamiki mitochondrialnej w 3D przy użyciu wtyczki MEL i mikroskopii fluorescencyjnej. To podejście umożliwia automatyczną kwantyfikację procesów fuzji i fragmentacji w komórkach.

Zrozumienie zmian w morfologii mitochondriów za pomocą dynamicznych i trójwymiarowych mikrofotografii fluorescencyjnych

Przeglądaj więcej filmów