Efektywne różnicowanie neuronalne przy użyciu hodowli jednokomórkowej ludzkich embrionalnych komórek macierzystych

Ludzkie embrionalne komórki macierzyste można skłonić do różnicowania się w neuronalne komórki progenitorowe, a następnie w astrocyty neuronów i oligodendrocyty. Jednak metoda hodowli typu ludzkich embrionalnych komórek macierzystych i ich różnicowanie w nerwowe komórki progenitorowe są bardzo nieefektywne i otwarte w systemie kohodowli in vivo Tutaj przedstawiamy ulepszony i solidny system hodowli, który jest łatwo skalowalny przy użyciu hodowli pojedynczej komórki o dużej gęstości z ludzkimi embrionalnymi komórkami macierzystymi. Hodowla pojedynczych typów komórek ludzkich embrionalnych komórek macierzystych zapewnia szybki i wydajny system do badania mechanizmów molekularnych, które regulują wieloetapowe różnicowanie wzdłuż różnych i odrębnych zróżnicowanych linii, w tym nerwowych komórek progenitorowych, a następnie różnicowanie ich w dodatkowe linie nerwowe.

Zacznij od przygotowania płytek pokrytych macierzą błony podstawnej ludzkich embrionalnych komórek macierzystych. Powoli rozmrażaj roztwór matrycy błony podstawnej w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez co najmniej dwie do trzech godzin lub przez noc. Po rozmrożeniu rozcieńczyć matrycę w zimnym DMEM/F-12 do 2% dobrze wymieszać i pokryć każdą studzienkę sześciodołkowej płytki jednym mililitrem rozcieńczonego roztworu.