Różnicowanie embrionalnych komórek macierzystych myszy w populację neuronów połączonych w sieć

Wysiewaj embrionalne komórki macierzyste myszy w naczyniu o niskim stopniu przylegania zawierającym pożywkę różnicującą.

Inkubuj pod rotacją, aby ułatwić agregację komórek i różnicowanie w linię neuronalną.

Przenieś agregaty do rurki i pozwól im osiąść grawitacyjnie. Wyrzuć nośnik.

Ponownie zawiesić i przenieść agregaty do oryginalnego naczynia zawierającego pożywki różnicujące uzupełnione kwasem retinowym.

Kwas retinowy indukuje ekspresję genów neuronalnych, wywołując różnicowanie w nerwowe komórki progenitorowe.

Przenieś kruszywa do rury. Usuń pożywkę i dodaj trypsynę, aby oddzielić agregaty.

Dodaj inhibitor, aby zneutralizować trypsynę.

Kilkakrotnie pipetować w celu uzyskania jednorodnej zawiesiny komórek. Przefiltrować zawiesinę, aby usunąć kruszywa.

Odwirować i usunąć supernatant. Ponownie zawieś komórki w pożywce.

Zasiej komórki na naczyniu pokrytym polimerem, aby ułatwić adhezję komórek.

Wyjmij nośnik. Dodaj świeże pożywki zawierające czynniki wzrostu, aby przyspieszyć dojrzewanie neuronów i utworzyć populację neuronów w sieci.

Różnicowanie ESC w neurony rozpoczyna się podczas rutynowego pasażu komórkowego. Oddziel ESC tak jak poprzednio, ale dołącz dodatkową płytkę do różni