JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:56 min • July 8th, 2025
Zacznij od płytki wielodołkowej pokrytej macierzą błony podstawnej, która zawiera polimery zewnątrzkomórkowe i białka adhezyjne
.Wysiewać studzienki jednokomórkową zawiesiną ludzkich embrionalnych komórek macierzystych w pożywce wzrostowej zawierającej inhibitor kinazy Rho.
Inkubować, aby umożliwić przyczepienie się komórek macierzystych do matrycy.
Komórki wchłaniają inhibitor, który blokuje enzymy kinazy Rho i zapobiega apoptotycznej śmierci komórki.
Sprzyja to przetrwaniu komórek i utrzymuje je w stanie niezróżnicowanym.
Zastąp pożywkę wzrostową pożywką do indukcji neuronalnej bogatą w czynniki wzrostu i zawierającą inhibitory, które celują w określone receptory ALK.
Inhibitory te oddziałują z ich receptorami i blokują szlaki sygnałowe BMP i TGF-β, zapobiegając różnicowaniu komórek w prekursory endodermalne lub mezodermalne.
Prowadzi to do selektywnego różnicowania komórek macierzystych w prekursory ektodermalne.
Te ektodermalne prekursory wykorzystują składniki odżywcze i czynniki wzrostu z pożywki do namnażania, a następnie różnicowania się w neuronalne komórki progenitorowe.
Umieść komórki na 6-dołkowej płytce pokrytej matrycą błony podstawnej o gęstości 2 x 10,5 komórek na studzienkę w 2 mililitrach mTeSR1 z 10 mikromolowym inhibitorem ROCK. Po 24 godzinach zastąp pożywkę hodowlaną pożywką do indukcji neuronalnej uzupełnioną 1 mikromolową grzbietomorfiną i 5 mikromolowymi SB431542. Zmieniaj podłoże co drugi dzień przez pierwsze cztery dni indukcji neuronalnej, a następnie codziennie, aż do osiągnięcia konfluencji w siódmym dniu.