Przygotowanie próbki i względna ocena ilościowa przy użyciu redukcyjnej metylacji amin do badań peptydomicznych

Tutaj opisujemy metodę instruktażową opartą na szybkiej inaktywacji termicznej proteazy w celu zachowania naturalnych peptydów wewnątrzkomórkowych, uniknięcia degradacji w komórkach i tkankach, a następnie względnej kwantyfikacji peptydów za pomocą znakowania izotopowego. Ta metoda etykietowania ma tak wiele zalet. Odczynniki są dostępne na rynku, niedrogie, stabilne chemicznie i umożliwiają analizę do pięciu próbek w jednej surowicy.

Zacznij od hodowli ludzkich komórek neuroblastoma w 15-centymetrowym naczyniu w DMEM zawierającym 15% FBS i 1% streptomycyny penicyliny. Utrzymuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza poniżej 5% dwutlenku węgla. Umyj komórki dwukrotnie PBS, a następnie dodaj 10 mililitrów PBS, zeskrob komórki i zbierz je do 15-mililitrowej probówki.