Name: Mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej podsumowuje chorobę zaostrzoną wiekiem (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Poznaj mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej. Ta metoda pozwala badać mechanizmy zakażenia u osobników starszych i identyfikować cele terapeutyczne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować Nickowi Lenhardowi za krytyczne przeczytanie i zredagowanie tego rękopisu. Chcielibyśmy również podziękować Andrew Camilli i Anthony'emu Campagnari za szczepy bakteryjne oraz Bruce'owi Davidsonowi za szczepy wirusowe. Praca ta była wspierana przez National Institute of Health Grant (R21AG071268-01) dla J.L. oraz National Institute of Health Grants (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) dla E.N.B.G.

<ol><li>Kadioglu, A., Weiser, J. N., Paton, J. C., Andrew, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Streptococcus+pneumoniae+virulence+factors+in+host+respiratory+colonization+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease.</a> Nature Reviews Microbiology. 6 (4), 288-301 (2008).</li>
<li>Obaro, S., Adegbola, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pneumococcus%3A+Carriage%2C+disease+and+conjugate+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The pneumococcus: Carriage, disease and conjugate vaccines.</a> Journal of Medical Microbiology. 51 (2), 98-104 (2002).</li>
<li>Chong, C. P., Street, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumonia+in+the+elderly%3A+A+review+of+the+epidemiology%2C+pathogenesis%2C+microbiology%2C+and+clinical+features%5BTitle%5D)+AND+%22Southern+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Pneumonia in the elderly: A review of the epidemiology, pathogenesis, microbiology, and clinical features.</a> Southern Medical Journal. 101 (11), 1141-1145 (2008).</li>
<li>Kadioglu, A., Andrew, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+and+resistance+to+pneumococcal+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Briefings+in+Functional+Genomics+and+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Susceptibility and resistance to pneumococcal disease in mice.</a> Briefings in Functional Genomics and Proteomics. 4 (3), 241-247 (2005).</li>
<li>Ganie, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+genetic%2C+and+serological+elucidation+of+Streptococcus+pneumoniae+serogroup+24+serotypes%3A+Discovery+of+a+new+serotype%2C+24C%2C+with+a+variable+capsule+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Structural, genetic, and serological elucidation of Streptococcus pneumoniae serogroup 24 serotypes: Discovery of a new serotype, 24C, with a variable capsule structure.</a> Journal of Clinical Microbiology. 59 (7), 0054021(2021).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+deaths+associated+with+seasonal+influenza+---+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR.+Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Estimates of deaths associated with seasonal influenza --- United States.</a> MMWR. Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (33), 1057-1062 (2010).</li>
<li>Shrestha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+interaction+between+influenza+and+pneumococcal+pneumonia+using+incidence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Identifying the interaction between influenza and pneumococcal pneumonia using incidence data.</a> Science Translational Medicine. 5 (191), (2013).</li>
<li>McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+interaction+between+influenza+virus+and+pneumococcus%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Insights into the interaction between influenza virus and pneumococcus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 19 (3), 571-582 (2006).</li>
<li>Pneumococcal Disease Global Pneumococcal Disease and Vaccine. Centers for Disease Control and Prevention. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/pneumococcal/global.html">https://www.cdc.gov/pneumococcal/global.html</a> (2018).</li>
<li>Grudzinska, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+community-acquired+pneumonia%3A+Parallels+in+dysfunction+at+the+extremes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in community-acquired pneumonia: Parallels in dysfunction at the extremes of age.</a> Thorax. 75 (2), 164-171 (2020).</li>
<li>Boe, D. M., Boule, L. A., Kovacs, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+responses+in+the+ageing+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Innate immune responses in the ageing lung.</a> Clinical and Experimental Immunology. 187 (1), 16-25 (2017).</li>
<li>Krone, C. L., van de Groep, K., Trzcinski, K., Sanders, E. A., Bogaert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence+and+pneumococcal+disease%3A+An+imbalance+in+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence and pneumococcal disease: An imbalance in host-pathogen interactions.</a> The Lancet Respiratory Medicine. 2 (2), 141-153 (2014).</li>
<li>Cho, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+NLRP3+inflammasome+expression+in+aged+lung+may+contribute+to+increased+susceptibility+to+secondary+Streptococcus+pneumoniae+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Decreased NLRP3 inflammasome expression in aged lung may contribute to increased susceptibility to secondary Streptococcus pneumoniae infection.</a> Experimental Gerontology. 105, 40-46 (2018).</li>
<li>Disease Burden of Influenza. Centers for Disease Control and Prevention. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/flu/about/burden/index.html">https://www.cdc.gov/flu/about/burden/index.html</a> (2018).</li>
<li>McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+co-pathogenesis+of+influenza+viruses+with+bacteria+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The co-pathogenesis of influenza viruses with bacteria in the lung.</a> Nature Reviews Microbiology. 12 (4), 252-262 (2014).</li>
<li>McCullers, J. A., Rehg, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lethal+synergism+between+influenza+virus+and+Streptococcus+pneumoniae%3A+Characterization+of+a+mouse+model+and+the+role+of+platelet-activating+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Lethal synergism between influenza virus and Streptococcus pneumoniae: Characterization of a mouse model and the role of platelet-activating factor receptor.</a> The Journal of Infectious Diseases. 186 (3), 341-350 (2002).</li>
<li>Metzger, D. W., Sun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+dysfunction+and+bacterial+coinfections+following+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immune dysfunction and bacterial coinfections following influenza.</a> Journal of Immunology. 191 (5), 2047-2052 (2013).</li>
<li>Chao, Y., Marks, L. R., Pettigrew, M. M., Hakansson, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+biofilm+formation+and+dispersion+during+colonization+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+and+Infection+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae biofilm formation and dispersion during colonization and disease.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 4, 194(2014).</li>
<li>Bogaert, D., De Groot, R., Hermans, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+colonisation%3A+The+key+to+pneumococcal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae colonisation: The key to pneumococcal disease.</a> The Lancet Infectious Diseases. 4 (3), 144-154 (2004).</li>
<li>Simell, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fundamental+link+between+pneumococcal+carriage+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Vaccines%22%5BJournal%5D)">The fundamental link between pneumococcal carriage and disease.</a> Expert Review of Vaccines. 11 (7), 841-855 (2012).</li>
<li>Marks, L. R., Davidson, B. A., Knight, P. R., Hakansson, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interkingdom+signaling+induces+Streptococcus+pneumoniae+biofilm+dispersion+and+transition+from+asymptomatic+colonization+to+disease%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Interkingdom signaling induces Streptococcus pneumoniae biofilm dispersion and transition from asymptomatic colonization to disease.</a> mBio. 4 (4), 00438(2013).</li>
<li>Reddinger, R. M., Luke-Marshall, N. R., Sauberan, S. L., Hakansson, A. P., Campagnari, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+modulates+Staphylococcus+aureus+biofilm+dispersion+and+the+transition+from+colonization+to+invasive+disease%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae modulates Staphylococcus aureus biofilm dispersion and the transition from colonization to invasive disease.</a> mBio. 9 (1), 02089(2018).</li>
<li>Joma, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+for+enhancement+of+Streptococcus+pneumoniae+pathogenicity+upon+viral+infection+and+advanced+age%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">A murine model for enhancement of Streptococcus pneumoniae pathogenicity upon viral infection and advanced age.</a> Infection and Immunity. 89 (8), 0047120(2021).</li>
<li>Andersson, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+active+disaccharide+unit+of+a+glycoconjugate+receptor+for+pneumococci+attaching+to+human+pharyngeal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Identification of an active disaccharide unit of a glycoconjugate receptor for pneumococci attaching to human pharyngeal epithelial cells.</a> Journal of Experimental Medicine. 158 (2), 559-570 (1983).</li>
<li>Avery, O. T., Macleod, C. M., McCarty, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+chemical+nature+of+the+substance+inducing+transformation+of+pneumococcal+types%3A+Induction+of+transformation+by+a+desoxyribonucleic+acid+fraction+isolated+from+pneumococcus+type+III%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types: Induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III.</a> The Journal of Experimental Medicine. 79 (2), 137-158 (1944).</li>
<li>Tettelin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+a+virulent+isolate+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae.</a> Science. 293 (5529), 498-506 (2001).</li>
<li>Tothpal, A., Desobry, K., Joshi, S. S., Wyllie, A. L., Weinberger, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+of+growth+characteristics+of+pneumococcus+with+environmental+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Variation of growth characteristics of pneumococcus with environmental conditions.</a> BMC Microbiology. 19 (1), 304(2019).</li>
<li>Bou Ghanem, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+adenosine+protects+against+Streptococcus+pneumoniae+lung+infection+by+regulating+pulmonary+neutrophil+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Extracellular adenosine protects against Streptococcus pneumoniae lung infection by regulating pulmonary neutrophil recruitment.</a> PLoS Pathogens. 11 (8), 1005126(2015).</li>
<li>Bou Ghanem, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+alpha-tocopherol+form+of+vitamin+E+boosts+elastase+activity+of+human+PMNs+and+their+ability+to+kill+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+and+Infection+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The alpha-tocopherol form of vitamin E boosts elastase activity of human PMNs and their ability to kill Streptococcus pneumoniae.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 161(2017).</li>
<li>Tait, A. R., Davidson, B. A., Johnson, K. J., Remick, D. G., Knight, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Halothane+inhibits+the+intraalveolar+recruitment+of+neutrophils%2C+lymphocytes%2C+and+macrophages+in+response+to+influenza+virus+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+%26+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Halothane inhibits the intraalveolar recruitment of neutrophils, lymphocytes, and macrophages in response to influenza virus infection in mice.</a> Anesthesia & Analgesia. 76 (5), 1106-1113 (1993).</li>
<li>Aaberge, I. S., Eng, J., Lermark, G., Lovik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+of+Streptococcus+pneumoniae+in+mice%3A+A+standardized+method+for+preparation+and+frozen+storage+of+the+experimental+bacterial+inoculum%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Pathogenesis%22%5BJournal%5D)">Virulence of Streptococcus pneumoniae in mice: A standardized method for preparation and frozen storage of the experimental bacterial inoculum.</a> Microbial Pathogenesis. 18 (2), 141-152 (1995).</li>
<li>McCullers, J. A., Bartmess, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+neuraminidase+in+lethal+synergism+between+influenza+virus+and+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Role of neuraminidase in lethal synergism between influenza virus and Streptococcus pneumoniae.</a> The Journal of Infectious Diseases. 187 (6), 1000-1009 (2003).</li>
<li>Smith, A. M., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+bacterial+infections+in+influenza+virus+infection+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Secondary bacterial infections in influenza virus infection pathogenesis.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 385, 327-356 (2014).</li>
<li>Cundell, D. R., Gerard, N. P., Gerard, C., Idanpaan-Heikkila, I., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+anchor+to+activated+human+cells+by+the+receptor+for+platelet-activating+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae anchor to activated human cells by the receptor for platelet-activating factor.</a> Nature. 377 (6548), 435-438 (1995).</li>
<li>Ballinger, M. N., Standiford, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postinfluenza+bacterial+pneumonia%3A+Host+defenses+gone+awry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Interferon+%26+Cytokine+Research%22%5BJournal%5D)">Postinfluenza bacterial pneumonia: Host defenses gone awry.</a> Journal of Interferon & Cytokine Research. 30 (9), 643-652 (2010).</li>
<li>Sun, K., Metzger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+pulmonary+antibacterial+defense+by+interferon-gamma+during+recovery+from+influenza+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inhibition of pulmonary antibacterial defense by interferon-gamma during recovery from influenza infection.</a> Nature Medicine. 14 (5), 558-564 (2008).</li>
<li>Nakamura, S., Davis, K. M., Weiser, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+stimulation+of+type+I+interferons+during+influenza+virus+coinfection+promotes+Streptococcus+pneumoniae+colonization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Synergistic stimulation of type I interferons during influenza virus coinfection promotes Streptococcus pneumoniae colonization in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 121 (9), 3657-3665 (2011).</li>
<li>Blanchette-Cain, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+biofilm+formation+is+strain+dependent%2C+multifactorial%2C+and+associated+with+reduced+invasiveness+and+immunoreactivity+during+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae biofilm formation is strain dependent, multifactorial, and associated with reduced invasiveness and immunoreactivity during colonization.</a> mBio. 4 (5), 00745(2013).</li>
<li>Rello, J., Pop-Vicas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+review%3A+Primary+influenza+viral+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Clinical review: Primary influenza viral pneumonia.</a> Critical Care. 13 (6), 235(2009).</li>
<li>Torres, A., Loeches, I. M., Sligl, W., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+flu+management%3A+A+point+of+view%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Severe flu management: A point of view.</a> Intensive Care Medicine. 46 (2), 153-162 (2020).</li>
<li>Bakaletz, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral-bacterial+co-infections+in+the+respiratory+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Viral-bacterial co-infections in the respiratory tract.</a> Current Opinion in Microbiology. 35, 30-35 (2017).</li>
<li>Palacios, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+coinfection+is+correlated+with+the+severity+of+H1N1+pandemic+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae coinfection is correlated with the severity of H1N1 pandemic influenza.</a> PLoS One. 4 (12), 8540(2009).</li>
<li>Dhanoa, A., Fang, N. C., Hassan, S. S., Kaniappan, P., Rajasekaram, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+clinical+characteristics+of+hospitalized+patients+with+pandemic+influenza+A+%28H1N1%29+2009+infections%3A+The+effects+of+bacterial+coinfection%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+Journal%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and clinical characteristics of hospitalized patients with pandemic influenza A (H1N1) 2009 infections: The effects of bacterial coinfection.</a> Virology Journal. 8, 501(2011).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Większość istniejących badań eksperymentalnych dotyczących jednoczesnego zakażenia S. pneumoniae/IAV opiera się na dostarczaniu bakterii do płuc myszy wstępnie zakażonych IAV. Modele te pomogły zidentyfikować zmiany w środowisku płucnym i ogólnoustrojowej odpowiedzi immunologicznej, które sprawiają, że gospodarz jest podatny na wtórne zakażenie bakteryjne 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Jednak modele te nie były w stanie naśladować przejścia S. pneumoniae z bezobjawowego kolonizatora w patogen zdolny do powodowania poważnych infekcji płuc i ogólnoustrojowych. Co więcej, modele te nie nadają się do badania czynników gospodarza i interakcji gospodarz-patogen w górnych drogach oddechowych, które przyczyniają się do podatności na infekcje. Wcześniejszy model przemieszczania się pneumokoków z nosogardzieli do płuc po zakażeniu IAV opierał się na zakażeniu bakteryjnym nosogardzieli, a następnie zakażeniu wirusowym. Nie udało się jednak odtworzyć poważnych objawów choroby obserwowanych u ludzi21. Opisany tutaj zmodyfikowany model infekcji mysiej podsumowuje przejście S. pneumoniae od bezobjawowego nosicielstwa do patogenu, który powoduje ciężką chorobę kliniczną.
Krytycznym etapem tego modelu jest ustalenie zakażenia S. pneumoniae w nosogardzieli. Streptococcus pneumoniae tworzą biofilmy i kolonizują nosogardziel z różną wydajnością 21,38. Do ustalenia spójnego zakażenia wymagane jest co najmniej 5 × 106 CFU badanych do tej pory szczepów bakterii wyhodowanych w biofilmie23. Zaleca się, aby każdy nowy szczep bakteryjny został przetestowany pod kątem stabilnego zakażenia nosogardzieli przed infekcją wirusową. W przypadku koinfekcji wirusowej wcześniejsze badania wykazały, że wewnątrznosowe zakażenie IAV jest wymagane do dyspersji bakterii z nosogardzieli 21,22,23. W tych wcześniejszych badaniach zastosowano 500 PFU IAV do podawania donosowego, podczas gdy w tym badaniu 200 PFU wystarczyło do zwiększenia liczby bakterii w nosogardzieli. Zakażenie IAV nie ogranicza się do górnych dróg oddechowych i może rozprzestrzeniać się do płuc39,40, co ma kluczowe znaczenie dla zwiększenia podatności środowiska płucnego na infekcje bakteryjne 15,16,41. Dostarczenie IAV do płuc można osiągnąć poprzez podanie donosowe lub dotchawiczą znieczulonych myszy. Wcześniejsze prace z myszami BALB/cByJ wykazały, że podawanie donosowe powoduje wirusowe zapalenie płuc21; jednak dostęp inokulum do płuc po inokulacji donosowej jest bardziej ograniczony u myszy C57BL / 6. U myszy C57BL/6 instalacja dotchawicza jest wymagana w celu spójnego dostarczania wirusa23. W tym modelu wcześniejsza kolonizacja bakteryjna przyspiesza prezentację objawów chorobowych po infekcji wirusowej23. Ponieważ infekcja wirusowa może sama w sobie powodować objawy chorobowe z potencjalnymi różnicami w kinetyce, zaleca się, aby najpierw przetestować zakres dawek dla każdego nowego testowanego szczepu wirusa i wybrać dawkę, która ujawnia przyspieszoną kinetykę u współzakażonych gospodarzy.
Płuca stanowią kolejny krytyczny odczyt dla oceny choroby w tym modelu. Do oceny obciążenia patogenami i napływu komórek odpornościowych można użyć płuca tej samej myszy. Ponieważ jednak nasilenie infekcji i stanu zapalnego może się różnić w zależności od płata, zaleca się, aby nie brać różnych płatów tego samego płuca do różnych ocen. Zamiast tego wszystkie płaty można zmielić na małe kawałki, dobrze wymieszać ze sobą, a następnie równomiernie przeanalizować dla różnych ocen. Podobnie nosogardziel może być używana do oznaczania liczby bakteryjnych CFU lub wirusowych PFU i odpowiedzi immunologicznej. Jednak liczba komórek uzyskanych z płukania i tkanek jest zbyt mała, aby przeprowadzić cytometrię przepływową bez łączenia próbek od myszy w tej samej grupie. Alternatywnie stan zapalny w nosogardzieli można ocenić histologicznie23.
Kluczową cechą tego modelu jest to, że podsumowuje on chorobę kliniczną obserwowaną u pacjentów. U ludzi wtórne pneumokokowe zapalenie płuc po zakażeniu IAV często powoduje oczywiste objawy choroby, w tym kaszel, duszność, gorączkę i bóle mięśni, które mogą prowadzić do hospitalizacji, niewydolności oddechowej, a nawet śmierci 8,15,42,43. Model ten podsumowuje poważne objawy choroby klinicznej obserwowane u ludzi pod względem trudności w oddychaniu (odzwierciedlonych w wyniku oddychania) i ogólnego złego samopoczucia (odzwierciedlonego w wynikach postawy i ruchu) wykazywanych przez myszy, a także śmierci u niektórych zdrowych młodych osób z grupy kontrolnej. Zaostrzone objawy choroby u współzakażonych myszy są prawdopodobnie wynikiem zarówno rozprzestrzeniania się bakterii do płuc, jak i upośledzonego klirensu wirusa u myszy z nosicielstwem pneumokoków23. Ograniczeniem modelu jest to, że częstość występowania choroby klinicznej i rozprzestrzeniania się bakterii z nosogardzieli różni się u myszy i zależy od szczepu bakteryjnego, wieku gospodarza i genotypu 21,22,23. Odzwierciedlając to, w przypadku szczepów inwazyjnych, progresja od miejscowego zakażenia (bez wykrywalnej bakteriemii) do śmierci może nastąpić w ciągu 24 godzin. Dlatego, aby uzyskać prawdziwą ocenę rozprzestrzeniania się ogólnoustrojowego, bakteriemię należy obserwować w krótszych odstępach czasu (co 6-12 godzin). Podobnie, ocena choroby może się szybko zmieniać, szczególnie w ciągu pierwszych 72 godzin po kozakażeniu. Dlatego, aby dokładnie śledzić objawy choroby, zaleca się monitorowanie myszy trzy razy dziennie przez 1-3 dni po zakażeniu IAV.
Podsumowując, model ten odtwarza przemieszczanie się S. pneumoniae z bezobjawowego kolonizatora nosogardzieli do patogenu zdolnego do wywoływania chorób płuc i ogólnoustrojowych po zakażeniu IAV. W tym modelu IAV wyzwala przejście S. pneumoniae poprzez modyfikację zachowania bakterii w nosogardzieli, zwiększając rozprzestrzenianie się bakterii do płuc i zmieniając odporność przeciwbakteryjną23. Podobnie, nosicielstwo bakteryjne stępia przeciwwirusową odpowiedź immunologiczną i upośledza klirens IAV z płuc23. To sprawia, że model ten jest idealny do analizowania zmian w odpowiedziach immunologicznych w pojedynczych i wielodrobnoustrojowych infekcjach. Ponadto przebieg choroby po koinfekcji jest częściowo zależny od szczepu pneumokoków obecnego w nosogardzieli. W związku z tym model nadaje się do analizy czynników bakteryjnych wymaganych do bezobjawowej kolonizacji w porównaniu z patogennym przejściem S. pneumoniae. Wreszcie, model ten odtwarza podatność starzenia się na koinfekcje i chociaż nie zostało to tutaj przetestowane, można go łatwo wykorzystać do oceny wpływu tła gospodarza na przebieg choroby. Podsumowując, rozdzielenie nosicielstwa i choroby na odrębne etapy daje możliwość analizy wariantów genetycznych zarówno patogenów, jak i gospodarza, umożliwiając szczegółowe zbadanie interakcji ważnego patobionta z gospodarzem w różnych fazach postępu choroby. Idąc dalej, model ten może być wykorzystany do dostosowania opcji leczenia dla wrażliwych gospodarzy.

Streptococcus pneumoniae (pneumokoki) to bakterie Gram-dodatnie, które bezobjawowo zamieszkują nosogardziel większości zdrowych osób1,2. Wspierane przez czynniki, które nie są do końca zdefiniowane, pneumokoki mogą przekształcać się z łagodnych kolonizatorów nosogardzieli w patogeny, które rozprzestrzeniają się na inne narządy, powodując poważne infekcje, w tym zapalenie ucha środkowego, zapalenie płuc i bakteriemię3. Występowanie choroby pneumokokowej jest częściowo zależne od różnic specyficznych dla szczepu, w tym serotypu, który opiera się na składzie polisacharydów otoczkowych. Do tej pory scharakteryzowano ponad 100 serotypów, a niektóre z nich są związane z bardziej inwazyjnymi infekcjami4,5. Kilka innych czynników zwiększa ryzyko choroby pneumokokowej. Jednym z takich czynników jest infekcja wirusowa, w której ryzyko pneumokokowe zapalenie płuc jest 100-krotnie zwiększone przez IAV6,7. Historycznie rzecz biorąc, S. pneumoniae jest jedną z najczęstszych przyczyn wtórnego bakteryjnego zapalenia płuc po grypie i wiąże się z gorszymi wynikami8. Innym ważnym czynnikiem ryzyka jest zaawansowany wiek. W rzeczywistości S. pneumoniae jest główną przyczyną pozaszpitalnego bakteryjnego zapalenia płuc u osób starszych powyżej 65 roku życia9,10. Osoby w podeszłym wieku odpowiadają za większość (>75%) zgonów z powodu zapalenia płuc i grypy, co wskazuje, że dwa czynniki ryzyka - starzenie się i zakażenie IAV - synergistycznie pogarszają podatność na chorobę11,12,13,14. Jednak mechanizmy, za pomocą których infekcja wirusowa powoduje przejście pneumokoków z bezobjawowego kolonizatora do inwazyjnego patogenu i jak jest to kształtowane przez czynniki gospodarza, pozostają słabo poznane. Wynika to w dużej mierze z braku małego modelu zwierzęcego, który podsumowuje przejście od bezobjawowej kolonizacji pneumokoków do krytycznej choroby klinicznej.
Badania nad koinfekcją były klasycznie modelowane na myszach, którym zaszczepiono pneumokoki bezpośrednio do płuc 7 dni po zakażeniu grypą<klasa SUP="xref">15,16. Odtwarza to podatność na wtórne bakteryjne zapalenie płuc i jest idealne do badania, w jaki sposób przeciwwirusowe odpowiedzi immunologiczne osłabiają obronę przeciwbakteryjną17. Jednak badania podłużne na ludziach wykazały, że nosicielstwo pneumokoków w nosogardzieli, gdzie bakterie mogą tworzyć bezobjawowe biofilmy18, jest jednolicie związane z chorobami inwazyjnymi19,20. Izolaty bakteryjne z infekcji ucha środkowego, płuc i krwi są genetycznie identyczne z tymi występującymi w nosiogardzieli20. W związku z tym, aby zbadać przejście od bezobjawowego nosicielstwa do choroby inwazyjnej po zakażeniu IAV, stworzono model, w którym myszom podawano donosowo pneumokoki hodowane w biofilmie, a następnie infekcję IAV nosogardzieli21,22. Wirusowa infekcja górnych dróg oddechowych doprowadziła do zmian w środowisku gospodarza, które doprowadziły do rozproszenia pneumokoków z biofilmów i ich rozprzestrzenienia się na dolne drogi oddechowe21. Te rozproszone bakterie miały zwiększoną ekspresję czynników wirulencji ważnych dla infekcji, przekształcając je z kolonizatorów w patogeny21. Obserwacje te podkreślają złożoną interakcję między wirusem, gospodarzem i bakteriami i pokazują, że zmiany w gospodarzu wywołane infekcją wirusową mają bezpośredni wpływ na zachowanie pneumokoków, co z kolei zmienia przebieg infekcji bakteryjnej. Jednak model ten nie podsumowuje poważnych objawów choroby obserwowanych u ludzi, prawdopodobnie dlatego, że wirus jest ograniczony do jamy nosowej, a ogólnoustrojowe skutki infekcji wirusowej na odporność gospodarza i uszkodzenie płuc nie są rekapitulowane.
Niedawno stworzyliśmy model, który obejmuje złożoną interakcję między gospodarzem a patogenami, ale także bardziej naśladuje nasilenie choroby obserwowane u ludzi23. W tym modelu myszy są najpierw zakażone donosowo pneumokokami wyhodowanymi w biofilmie w celu ustanowienia bezobjawowego nosicielstwa, a następnie zakażenie IAV zarówno nosogardzieli, jak i płuc. Spowodowało to rozprzestrzenienie się bakterii do płuc, zapalenie płuc i chorobę, która rozwinęła się do śmiertelności u części młodych myszy23. To poprzednie badanie wykazało, że zarówno infekcja wirusowa, jak i bakteryjna zmieniała obronę gospodarza: infekcja wirusowa sprzyjała rozprzestrzenianiu się bakterii, a wcześniejsza kolonizacja bakteryjna upośledzała zdolność gospodarza do kontrolowania poziomów IAV w płucach23. Badanie odpowiedzi immunologicznej wykazało, że zakażenie IAV zmniejszyło aktywność przeciwbakteryjną neutrofili, podczas gdy kolonizacja bakteryjna stępiła odpowiedź na interferon typu I, krytyczną dla obrony przeciwwirusowej23. Co ważne, model ten odwzorowywał podatność na starzenie. W porównaniu z młodymi myszami, stare myszy wykazywały oznaki choroby wcześniej, wykazywały cięższy przebieg choroby klinicznej i częściej ulegały infekcji23. Praca przedstawiona w tym manuskrypcie pokazuje, że stopień choroby zależy również od szczepu bakteryjnego, ponieważ inwazyjne szczepy pneumokokowe wykazują bardziej efektywne rozprzestrzenianie się po zakażeniu IAV, wykazują bardziej widoczne objawy zapalenia płuc i skutkują przyspieszonym tempem choroby w porównaniu ze szczepami nieinwazyjnymi. W związku z tym ten model koinfekcji S. pneumoniae/IAV pozwala na szczegółowe badanie zarówno czynników patogenu, jak i gospodarza i dobrze nadaje się do badania odpowiedzi immunologicznych na infekcje wielodrobnoustrojowe w różnych fazach progresji choroby.

<table><tbody><tr><td>Kwas 4-aminobenzoesowy&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>AAA1267318</td><td>Mix I stock</td></tr><tr><td>96-dołkowe okrągłe płyty denne</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650101</td><td></td></tr><tr><td>100 &micro; m Filtry</td><td>Fisher</td><td>07-201-432</td><td></td></tr><tr><td>Adenina</td><td>Fisher</td><td>AC147440250</td><td>Mix I stock</td></tr><tr><td>Avicel</td><td>Fisher</td><td>501785325</td><td>Celuloza mikrocyrstalinowa&nbsp;</td></tr><tr><td>Bufor utrwalający BD Cytofix&nbsp;</td><td>Bufor utrwalający</td> <td>Fisher</td><td>BDB554655</td></tr><tr><td>BD Fortessa</td><td>Cytometr przepływowy</td><td></td><td></td>&nbsp;</tr><tr><td>Rurki polietylenowe BD Intramedic&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>427410</td><td>Rurka do płukania nosa</td></tr><tr><td>BD&nbsp; Jednorazowe strzykawki z końcówkami Luer-Lok (1 ml)</td><td>Fisher</td><td>14-823-30</td><td></td></tr><tr><td>BD&nbsp; Mikrotainer Kapilarny kolektor krwi i zamknięcie BD Microgard</td><td>Fisher</td><td>02-675-185</td><td>Probówki do pobierania krwi</td></tr><tr><td>Beta-nikotynamidoadeninowy dinukleotyd</td><td>Fisher</td><td>AAJ6233703</td><td>Mix IV zapas</td></tr><tr><td>Biotyna</td><td>Fisher</td><td>AC230090010</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>Myszy C57BL / 6J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>#000644</td><td>Myszy użyte w tym badaniu</td></tr><tr><td>Bezwodny chlorek wapnia</td><td>Fisher Chemical</td><td>C77-500</td><td>Mix I zapasy</td></tr><tr><td>CD103 BV 421</td><td>BD Bioscience</td><td>BDB562771</td><td>Klon: M290 DF 1:200</td></tr><tr><td>CD11b APC</td><td>Invitrogen</td><td>50-112-9622</td><td>Klon: M1/70, DF 1:300</td></tr><tr><td>CD11c PE</td><td>BD Bioscience</td><td>BDB565592</td><td>Klon: N418 DF 1:200</td></tr><tr><td>CD3 AF 488</td><td>BD Bioscience</td><td>OB153030</td><td>Klon: 145-2C11 DF 1:200</td></tr><tr><td>CD4 V450</td><td>BD Horizon</td><td>BDB560470</td><td>Klon: RM4.5 DF 1:300</td></tr><tr><td>CD45 APC eF-780</td><td>BD Bioscience</td><td>50-112-9642</td><td>Klon: 30-F11 DF 1:200</td></tr><tr><td>CD45 PE</td><td>Invitrogen</td><td>50-103-70</td><td>Klon: 30-F11 DF 1:200</td></tr><tr><td>CD8&alfa; BV 650</td><td>BD Horizon</td><td>BDB563234</td><td>Klon: 53-6,7 DF 1:200</td></tr><tr><td>Chlorek choliny</td><td>Fisher</td><td>AC110290500</td><td>Końcowy dodatek do CDM</td></tr><tr><td>Corning Jednorazowe systemy próżniowych filtrów/magazynowania</td><td>Fisher</td><td>09-761-107</td><td>Aparatura do sterylizacji filtrów&nbsp;</td></tr><tr><td>Kolby T-25 poddane hodowli tkankowej Corning</td><td>Fisher</td><td>10-126-9</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Płytki wielodołkowe Costar Clear</td><td>Fisher</td><td>07-201-590</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp; DMEM z L-glutaminą i 4,5 g/l glukozy; Bez pirogronianu sodu</td><td>Fisher</td><td>MT10017CM</td><td></td></tr><tr><td>cyjanokobalamina</td><td>Fisher</td><td>AC405925000</td><td>Mix I zapas</td></tr><tr><td>D39</td><td>Krajowa Kolekcja Kultur Typu (NCTC)</td><td>NCTC 7466</td><td>Streptococcus pneumoniae szczep</td></tr><tr><td>D-Alanina</td><td>Fisher</td><td>AAA1023114</td><td>Mix I zapas</td></tr><tr><td>D-pantotenian wapnia</td><td>Fisher</td><td>AC243301000</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Fisher Chemical</td><td>D16-500</td><td>Zapas startowy</td></tr><tr><td>Dnase&nbsp;</td><td>Worthington Biochemiczny&nbsp;</td><td></td><td></td>LS002147</tr><tr><td>Eagles Minimum Essential Medium</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>VWR</td><td>BDH4616-500G</td><td></td></tr><tr><td>EF3030</td><td>Centrum Kontroli i Zapobiegania Chorobom&nbsp;</td><td>Dostępne za pośrednictwem banku izolatów na żądanie</td><td>szczepu Streptococcus pneumoniae, żądanie przy użyciu nazwy szczepu</td></tr><tr><td>F480 PE Cy7</td><td>BD Bioscience</td><td>50-112-9713</td><td>Klon: BMB DF 1:200</td></tr><tr><td>Falcon 50 mL stożkowe probówki wirówkowe</td><td>Fisher</td><td>14-432-22</td><td>50 ml probówka z okrągłym dnem</td></tr><tr><td>Falcon&nbsp; Probówki polipropylenowe z okrągłym dnem z nakrętką</td><td>Fisher</td><td>14-959-11B</td><td>15 mL probówka z okrągłym dnem</td></tr><tr><td>Falcon&nbsp; Probówki z polistyrenu okrągłodennego (5 ml)Probówki</td> <td>FACS Fisher</td><td>14-959-5</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Thermofisher</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Azotan żelaza Niewodny</td><td>Fisher</td><td>I110-100</td><td>Mix III</td></tr><tr><td>kolba Fisherbrand Delikatne nożyczki preparacyjne</td><td>Fisher</td><td>08-951-5</td><td>Instrumenty używane do zbioru</td></tr><tr><td>Fisherbrand Jednorazowe pętle do zaszczepiania&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>22-363-602</td><td>Pętle inokulacyjne&nbsp;</td></tr><tr><td>Kleszcze do tkanek preparacyjnych</td><td>Fisherbrand</td><td>Fisher 13-812-38</td><td>Kleszcze do zbioru</td></tr><tr><td>Probówki do mikrowirówek Fisherbrand Premium: 1,5 ml</td><td>Fisher</td><td>05-408-137</td><td>Probówki do mikowirówki</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Sterylne strzykawki jednorazowego użytku (10 ml)</td><td>Fisher</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>Kwas foliowy</td><td>Fisher</td><td>AC216630500</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td><td>Fisher</td><td>A1049101</td><td></td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; DPBS, bez wapnia, bez magnezu</td><td>Fisher</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; HBSS, wapń, magnez, bez czerwieni fenolowej</td><td>Fisher</td><td>14025134</td><td></td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; MEM (modyfikacja Temina) (2x), bez czerwieni fenolowej</td><td>Fisher</td><td>11-935-046</td><td></td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; Penicylina-Streptomycyna (10 000 U/ml)</td><td>Fisher</td><td>15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; Roztwór błękitu trypanowego, 0,4%</td><td>Fisher</td><td>15-250-061</td><td></td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; Trypsyna-EDTA (0,25%), czerwień fenolowa</td><td>Fisher</td><td>25-200-056</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol (certyfikowany ACS)</td><td>Fisher</td><td>G33-4</td><td></td></tr><tr><td>Glicyna</td><td>Fisher</td><td>AA3643530</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>Guanina</td><td>Fisher</td><td>AAA1202414</td><td>Mix II</td></tr><tr><td>Invitrogen UltraComp eBeads Koraliki kompensacyjne</td><td>Fisher</td><td>50-112-9040</td><td></td></tr><tr><td>Siarczan żelaza (II) siedmiowodny</td><td>Fisher</td><td>AAA1517836</td><td>Mix III zapas</td></tr><tr><td>L-Alanina</td><td>Fisher</td><td>AAJ6027918</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-arginina</td><td>Fisher</td><td>AAA1573814</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-asparagina</td><td>Fisher</td><td>AAB2147322</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>Kwas L-asparaginowy&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>AAA1352022</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-cysteina</td><td>Fisher</td><td>AAA1043518</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>Monohydrat chlorowodorku L-cysteiny</td><td>Fisher</td><td>AAA1038914</td><td>Końcowy suplement do CDM</td></tr><tr><td>L-cystyny</td><td>Fisher</td><td>AAA1376218</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>Kwas L-glutaminowy&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>AC156211000</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Fisher</td><td>O2956-100</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-histydyna Fisher</td><td></td><td>AC166150250</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, do wzbudzenia UV</td><td>Invitrogen</td><td>50-112-1524</td><td>Klon: N/A DF 1:500</td></tr><tr><td>L-izoleucyna</td><td>Fisher</td><td>AC166170250</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-Leucine</td><td>Fisher</td><td>BP385-100</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-Lizyna</td><td>Fisher</td><td>AAJ6222514</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-Metionina</td><td>Fisher</td><td>AAA1031822</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>Niska endotoksyna BSA&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A1470-10G</td><td></td></tr><tr><td>L-fenyloalanina</td><td>Fisher</td><td>AAA1323814</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-Proline</td><td>Fisher</td><td>AAA1019922</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-Serine</td><td>Fisher</td><td>AC132660250</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-treonina</td><td>Fisher</td><td>AC138930250</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-tryptofan</td><td>Fisher</td><td>AAA1023014</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>L-walina Fisher</td><td></td><td>AAA1272014</td><td>Zapas aminokwasów</td></tr><tr><td>Ly6C BV 605</td><td>BD Bioscience</td><td>BDB563011</td><td>Klon: AL-21 DF 1:300</td></tr><tr><td>Ly6G AF 488&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>NC1102120</td><td>Klon: IA8, DF 1:300</td></tr><tr><td>Komórki nerki psów Madin-Darby (MDCK)&nbsp;</td><td>American Type Culture Collection (ATCC)</td><td>CCL-34</td><td>Linia komórkowa MDCK do analizy PFU&nbsp;</td></tr><tr><td>Siarczan magnezu 7-hydrat</td><td>Fisher</td><td>60-019-68</td><td>CDM zapas startowy</td></tr><tr><td>Siarczan manganu</td><td>Fisher</td><td>M113-500</td><td>Mix I zapas</td></tr><tr><td>Woda</td><td></td><td></td> MilQ <td>Ultraczysta woda</td></tr><tr><td>Mysz Fc Block</td><td>BD Bioscience</td><td>BDB553142</td><td>Klon: 2.4G2 DF 1:100</td></tr><tr><td>MWI WETERYNARIA&nbsp; PURALUBE VET MAŚĆ</td><td>Fisher</td><td>NC1886507</td><td>Smar do oczu na infekcje</td></tr><tr><td>NCI-H292 linia komórkowa raka śluzowo-naskórkowego&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1848</td><td>H292 linia komórkowa nabłonka płuc do wzrostu biofilmu</td></tr><tr><td>Niacynamid</td><td>Fisher</td><td>18-604-792</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>NK 1.1 AF 700</td><td>BD Bioscience</td><td>50-112-4692</td><td>Klon: PK136 DF 1:200</td></tr><tr><td>Oxyrase do bulionu 50Ml Butelka 1/Pk</td><td>Fisher</td><td>50-200-5299</td><td>Do usuwania tlenu z płynnych kultur</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd 4% w PBS</td><td>Thermoscientific</td><td>J19932-K2</td><td></td></tr><tr><td>Izofluran pivetal&nbsp;</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893-8440</td><td>Izofluran do znieczulenia podczas infekcji&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosforan potasu dwuzasadowy</td><td>Fisher Chemical</td><td>P288-500</td><td>Zapas startowy</td></tr><tr><td>Fosforan potasu jednozasadowy</td><td>Fisher Chemical</td><td>P285-500</td><td>Zapas startowy</td></tr><tr><td>Chlorowodorek pirydoksalu&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>AC352710250</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>Dichlorowodorek pirydoksaminy</td><td>Fisher</td><td>AAJ6267906</td><td>Mix I zapas</td></tr><tr><td>Ryboflawina</td><td>Fisher</td><td>AC132350250</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>Octan sodu</td><td>VWR</td><td>0530-500G</td><td>Zapas startowy</td></tr><tr><td>Azek sodu&nbsp;</td><td>Bioodczynniki Fisher</td><td>BP922I-500</td><td>Do buforu FACS</td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu</td><td>Fisher Chemical</td><td>S233-500</td><td>Zapas startowy i końcowy dodatek do CDM</td></tr><tr><td>Dwuzasadowy fosforan sodu</td><td>Fisher Chemical</td><td>S374-500</td><td>Zapas startowy</td></tr><tr><td>Fosforan sodu jednozasadowy</td><td>Fisher Chemical</td><td>S369-500</td><td>Zapas startowy</td></tr><tr><td>TCR APC&nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>50-112-8889</td><td>Klon: GL-3 DF 1:200</td></tr><tr><td>TCR&beta; APC-Cy7</td><td>BD Pharmigen</td><td>BDB560656</td><td>klon: H57-597 DF 1:200</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Agar do krwi z gentamycyną</td><td>Fisher</td><td>R01227</td><td>Płytki agarowe z antybiotykiem gentamycyną&nbsp;</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Trypsyna, Fisher PI20233</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorowodorek tiaminy</td> traktowany TPCK <td>Fisher</td><td>AC148991000</td><td>Zapas witamin</td></tr><tr><td>TIGR4</td><td>ATCC</td><td>BAA-334</td><td>Streptococcus pneumoniae</td></tr><tr><td>szczep Uracil</td><td>Fisher</td><td>AC157300250</td><td>Mix II</td></tr><tr><td>Worthington Biochemical Corporation&nbsp; Kolagenaza, Typ 2, 1 g</td><td>Fisher</td><td>NC9693955</td><td></td></tr></tbody></table>

mysi model przejścia streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej podsumowuje chorobę zaostrzoną wiekiem

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Streptococcus pneumoniae (pneumokoki) jest bezobjawowym kolonizatorem nosogardzieli u większości osób, ale po zakażeniu wirusem grypy A (IAV) może przekształcić się w patogen płucny i ogólnoustrojowy. Zaawansowany wiek zwiększa podatność gospodarza na wtórne pneumokokowe zapalenie płuc i wiąże się z pogorszeniem wyników choroby. Czynniki gospodarza napędzające te procesy nie są dobrze zdefiniowane, częściowo z powodu braku modeli zwierzęcych, które odtwarzają przejście od bezobjawowej kolonizacji do ciężkiej choroby klinicznej. 
Ten artykuł opisuje nowy model myszy, który odtwarza przejście pneumokoków od bezobjawowego nosicielstwa do choroby po infekcji wirusowej. W tym modelu myszom najpierw zaszczepia się donosowo pneumokoki wyhodowane w biofilmie w celu uzyskania bezobjawowego nosicielstwa, a następnie następuje zakażenie IAV zarówno nosogardzieli, jak i płuc. Powoduje to rozprzestrzenianie się bakterii do płuc, zapalenie płuc i oczywiste objawy choroby, które mogą prowadzić do śmierci. Stopień zaawansowania choroby zależy od szczepu bakteryjnego i czynników żywiciela. 
Co ważne, ten model odtwarza podatność na starzenie się, ponieważ w porównaniu do młodych myszy, stare myszy wykazują cięższe klinicznie choroby i częściej ulegają chorobom. Rozdzielając nosicielstwo i chorobę na odrębne etapy i zapewniając możliwość analizy wariantów genetycznych zarówno patogenu, jak i gospodarza, ten model koinfekcji S. pneumoniae/IAV pozwala na szczegółowe badanie interakcji ważnego patobionta z gospodarzem na różnych etapach postępu choroby. Model ten może również służyć jako ważne narzędzie do identyfikacji potencjalnych celów terapeutycznych przeciwko wtórnemu pneumokokowemu zapaleniu płuc u podatnych gospodarzy.

Ten artykuł opisuje nowy model myszy do przejścia pneumokoków z bezobjawowego kolonizatora w patogen chorobotwórczy podczas infekcji wirusowej. Model ten można łatwo zaadaptować do badania interakcji wielodrobnoustrojowych i gospodarz-patogen w różnych fazach progresji choroby i u różnych gospodarzy.

Mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej podsumowuje chorobę zaostrzoną wiekiem

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Metoda ta opisuje nowy model mysi do badania przejścia pneumokoków z bezobjawowego kolonizatora w patogen chorobotwórczy podczas infekcji wirusowej. Bardziej naśladuje to, co dzieje się u ludzi. Model ten może być ważnym narzędziem do identyfikacji potencjalnych celów terapeutycznych przeciwko wtórnemu pneumokokowi zapalenia płuc u podatnych gospodarzy.Model ten odtwarza podatność na starzenie. W związku z tym można go wykorzystać, aby zrozumieć, jakie aspekty gospodarza stają się wadliwe wraz z wiekiem i umożliwić nam dostosowanie opcji leczenia dla wrażliwych gospodarzy w podeszłym wieku. Hodowla biofilmu pneumokokowego jest wyzwaniem, ponieważ różne szczepy zajmują różną ilość czasu.Radzę spróbować wyhodować biofilm przed przeprowadzeniem badania na zwierzętach. Gdy komórki H292 będą w 100% zlewne, umyj je trzykrotnie PBS. Następnie dodaj 250 mikrolitrów 4% paraformaldehydu na studzienkę, aby utrwalić komórki i inkubować przez godzinę na lodzie lub przez noc w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Strake szczep Streptococcus pneumoniae na płytce z krwią i inkubuj przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla. Następnego dnia zaszczepić bakterie z płytki na świeże, chemicznie zdefiniowane podłoże lub CDM plus Oxyraze, zmywając bakterie z płytki, dodając jeden mililitr CDM plus Oxyrase i delikatnie podnosząc kolonie bakteryjne za pomocą boku jednomililitrowej końcówki pipety, uważając, aby nie zeskrobać agaru. Rozcieńczyć kulturę bakteryjną w CDM z oksyrazą do początkowego OD 600 0,05.Następnie hoduj bakterie w luźno zamkniętej stożkowej rurce o pojemności 50 mililitrów w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla, aż do osiągnięcia OD 0,2. Następnie przekręć rurkę do hodowli bakterii. Wysiewaj 0,5 mililitra kultury na utrwalone komórki H292 i dodaj kolejne 0,5 mililitra CDM plus pożywkę Oxyrase na dołek.Dodaj CDM plus Oxyrase do studzienek kontrolnych bez bakterii. Inkubuj płytkę przez 48 godzin w temperaturze 34 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla. Co 12 godzin, po wstępnym wysiewie, delikatnie zastąp 0,5 mililitra podłoża świeżym CDM i Oxyrase.Uważaj, aby nie zakłócić tworzenia się biofilmu. Sprawdź spód płytki pod kątem biofilmu i poszukaj rosnącego zmętnienia w miarę upływu czasu z powodu wzrostu biofilmu. Po 48 godzinach usunąć supernatant i dwukrotnie przemyć biofilm jednym mililitrem PBS.Następnie ponownie zawiesić biofilm w jednym mililitrze świeżego CDM i energicznie pipetować w górę iw dół, aby podnieść biofilm. Dla każdego szczepu bakteryjnego umieść kulturę ze wszystkich studzienek w 50-mililitrowej probówce. Dobrze wymieszaj, delikatnie przechylając kilkakrotnie szczelnie zakręconą rurkę w górę iw dół.Następnie dodaj 40% glicerolu i CDM w równych objętościach, aby uzyskać zawiesinę bakteryjną o końcowym stężeniu 20% glicerolu. Porcję jednego mililitra do mikroprobówki wirówkowej, błyskawiczne zamrożenie na suchym lodzie i zaoszczędzenie w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza. Rozmrozić wyhodowane podwielokrotności biofilmu na lodzie i wirować z prędkością 1,700 G przez pięć minut.Ostrożnie usunąć i wyrzucić supernatant, nie naruszając osadu. Następnie umyj granulkę, ponownie zawieszając ją w jednym mililitrze PBS i ponownie odwiruj. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić osad w objętości potrzebnej do osiągnięcia pożądanego stężenia.Zaszczepić donosowo sześć czarnych samców myszy C57 pięciokrotnie 10 do szóstej jednostki tworzącej kolonię lub CFU, pipetując pięć mikrolitrów rozcieńczonego inokulum do każdego naris. Po zaszczepieniu mocno przytrzymaj mysz, stabilizując głowę do momentu wdychania objętości. Po rozmrożeniu wirusa należy rozcieńczyć go w PBS do pożądanego stężenia.Umieść lubrykant okulistyczny na oczach myszy przed znieczuleniem. Natychmiast zainfekuj znieczuloną mysz 50 mikrolitrami 20 jednostek tworzących płytkę nazębną lub PFU wirusa grypy A lub IAV dotchawiczo, używając pęsety do wyciągnięcia języka z ust i pipetowania objętości płynu w dół tchawicy. Po wyzdrowieniu należy dodonosowo zaszczepić 10 mikrolitrów 200 PFU IAV metodą inokulacji opisaną wcześniej.W celu pobrania płuc za pomocą nożyczek preparacyjnych odetnij boki odsłoniętej klatki piersiowej i delikatnie pociągnij żebra w kierunku głowy myszy, aby odsłonić serce. Włóż igłę o rozmiarze 25 dołączoną do 10-mililitrowej strzykawki wypełnionej PBS do prawej komory i zacznij powoli roztapiać. Szukaj wybielania płuc jako wskaźnika udanej perfuzji.Spłukiwać powoli, aby uniknąć uszkodzenia tkanki płucnej. Podnieś serce kleszczami i wykonaj nacięcie, aby oddzielić płuca i serce. Po oddzieleniu podnieś wszystkie płaty płuc za pomocą kleszczy i spłucz w naczyniu sterylnym PBS, aby usunąć resztki krwi.Na szalce Petriego zmiel płuca na małe kawałki i dobrze wymieszaj. Usuń połowę mieszanki płucnej, aby określić bakteryjną CFU lub wirusową PFU i umieść ją w 15-mililitrowej probówce z okrągłym dnem wypełnionej 0,5 mililitra PBS w celu homogenizacji. Usuń drugą połowę płuca do cytometrii przepływowej i umieść ją na 24-dołkowej płytce poddanej hodowli nietkankowej, z każdą studzienką wstępnie wypełnioną 0,5 mililitra RP10.Pozostaw w temperaturze pokojowej do czasu przetworzenia. Aby homogenizować pobraną tkankę, wyczyść sondę homogenizatora, umieszczając ją w 70% etanolu i włączając homogenizator z mocą 60% na 30 sekund. Powtórz ten krok w sterylnej wodzie przez 10 sekund.Homogenizuj każdą tkankę przez jedną minutę. Do oznaczania liczby bakterii, seryjne rozcieńczenia płytki na płytkach z agarem z krwią. Aby obliczyć całkowitą jtk, użyj 10 mikrolitrów do płytki i zanotuj końcową objętość w mililitrach dla każdej próbki.Umieść próbki z nosogardzieli na płytkach z agarem z krwią uzupełnionych trzema mikrogramami na mililitr gentamycyny, aby wybrać wzrost S pneumoniae, jednocześnie hamując wzrost innych mikroorganizmów. Inkubować przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla. W przypadku cytometrii przepływowej dodać 500 mikrolitrów buforu wytrawiającego do każdej studzienki 24-dołkowej płytki zawierającej próbkę płuc.Inkubować płytkę przez 45 minut do jednej godziny. Następnie za pomocą mikropipety P-1000 przesuń strawione płuca i umieść je na filtrze. Następnie użyj tłoka trzymililitrowej strzykawki, aby rozgnieść próbkę.Wzrost biofilmu inokulum S.pneumoniae powoduje konsekwentne nosicielstwo pneumokoków ograniczone do nosogardzieli, unikając przy tym systematycznego rozprzestrzeniania się. Obraz choroby u myszy zakażonych S pneumoniae IAV był zależny od szczepu bakteryjnego. Chociaż nie stwierdzono znaczącej różnicy w liczbie bakterii w nosogardzieli wśród żadnego ze szczepów, S pneumoniae, TIGR4 i D39, ale nie EF3030 rozprzestrzeniły się do płuc w ciągu 48 godzin po zakażeniu IAV.40% myszy zakażonych S pneumoniae TIGR4 wykazywało rozprzestrzenianie się bakterii do płuc, a połowa z nich stała się bakteremią. Myszy zakażone S pneumoniae D39 wykazywały 100% rozprzestrzenianie się do płuc, a połowa z nich doświadczyła bakteriemii. Śledząc całkowite przeżycie, niezależnie od szczepu bakteryjnego, wskaźnik przeżycia współzakażonych myszy był znacznie niższy niż myszy pojedynczo prowokowanych S pneumoniae.Model ten wykorzystano również do oceny obecności różnych komórek odpornościowych w płucach po zakażeniu IAV. Szczepy bakteryjne D39 i TIGR4 wywołały znaczny wzrost w stosunku do wartości wyjściowej w napływie zapalnych komórek odpornościowych z krążenia, takich jak neutrofile i monocyty, podczas gdy EF3030 nie. Samo zakażenie IAV wywołało znaczny wzrost powyżej wartości wyjściowej w napływie komórek odpornościowych, takich jak komórki NK i limfocyty T gamma delta.Te odpowiedzi przeciwwirusowe były znacznie osłabione u myszy donosowo zakażonych S pneumoniae przed prowokacją wirusową. U pojedynczo zakażonych myszy miana wirusa nie różniły się między młodymi i starszymi kohortami. Stare myszy wykazywały wcześniej i znacznie poważniejsze objawy choroby i umierały szybciej, w ciągu 24 godzin, podczas gdy młode myszy lepiej przeżywały infekcję.Rozdzielenie nosicielstwa i choroby na odrębne etapy pozwala nam zbadać zarówno odpowiedź immunologiczną, jak i czynniki bakteryjne i/lub wirusowe ważne w różnych fazach postępu choroby. Mamy nadzieję, że model ten zostanie zaadaptowany przez inne laboratoria do badania innych interakcji wielodrobnoustrojowych i interakcji patogenów gospodarza w różnych fazach progresji choroby i między różnymi gospodarzami.

a-mouse-model-for-transition-streptococcus-pneumoniae-from-colonizer

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Utworzenie chronicznego modelu mysiego z infekcją bakteryjną z trwałą kolonizacją jelit przez Salmonella typhimurium przez 27 tygodni.

Model myszy z przewlekłą infekcją Salmonella

Źródło: Lenhard, A. i in. Model myszy przedstawiający przejście Streptococcus pneumoniae z kolonizatora do patogena po współinfekcji wirusowej powtarza chorobę zaostrzoną przez wiek. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje model współinfekcji myszy, w którym wirus grypy wywołuje przejście Streptococcus pneumoniae z kolonizatora do patogenu. Opisuje etapy związane z kolonizacją bakteryjną, infekcją wirusową i postępem choroby.

Model myszy do badania patogennej przejścia paciorkowca pneumoniae po współinfekcji wirusowej

Źródło: Lenhard, A. i inni. Model myszy przedstawiający przejście Streptococcus pneumoniae z kolonizatora do patogena po współinfekcji wirusowej powtarza chorobę zaostrzoną przez wiek. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje przetwarzanie płuc przez mysz współzakażoną patogenną bakterią i wirusem. Rozdrobnienie, homogenizacja i poszycie tkanki płucnej pozwala na ilościowe określenie obciążenia bakteryjnego, co wskazuje na rozprzestrzenianie się bakterii do płuc i nasilenie choroby.

Przetwarzanie zakażonych tkanek do enumeracji bakterii w modelu współinfekcji myszy

Zakażenie gryzoniami Citrobacter stanowi cenny model do badania infekcji bakteryjnych jelit, jak również odpowiedzi immunologicznych gospodarza i zapalenia jelita grubego u myszy. Protokół ten określa pomiar integralności bariery, obciążenia patogenem i uszkodzeń histologicznych, co pozwala na dokładne scharakteryzowanie udziału patogenu i gospodarza w zakaźnym zapaleniu jelita grubego u myszy.

Mysi model Citrobacter rodentium: badanie udziału patogenów i gospodarza w zakaźnym zapaleniu jelita grubego

Opisano kolonizację mysiego nosogardzieli Streptococcus pneumoniae i późniejszą ekstrakcję przylegających lub zrekrutowanych komórek. Technika ta polega na przepłukiwaniu nosogardzieli i zbieraniu płynu przez nozdrza i można ją dostosować do różnych odczytów, w tym różnicowej kwantyfikacji komórek i analizy ekspresji mRNA in situ.

Charakterystyka reakcji zapalnych podczas kolonizacji donosowej Streptococcus pneumoniae

Śledzenie w czasie rzeczywistym wpływu czynników wirulencji pneumokoków w modelu ostrego mysiego zapalenia płuc z wykorzystaniem bakterii bioluminescencyjnych

Modele zwierzęce okazały się nieocenionymi narzędziami w definiowaniu mechanizmów specyficznych dla gospodarza i patogenu, które przyczyniają się do rozwoju przewlekłego stanu zapalnego. W tym miejscu opisujemy mysi model zakażenia jamy ustnej ludzkim patogenem Porphyromonas gingivalis i szczegółowo opisujemy metodologie oceny postępu stanu zapalnego w miejscach miejscowych i ogólnoustrojowych.

Mysi model przewlekłego stanu zapalnego wywołanego przez patogeny w miejscach lokalnych i ogólnoustrojowych

Streptococcus pneumoniae tworzy dyskretne, nieropne, mikroskopijne zmiany w sercu. Przedstawiono protokół mysiego modelu powstawania mikrouszkodzeń serca. Prowadzone są szkolenia dotyczące wizualizacji mikrozmian za pomocą mikroskopii, rozróżniania wczesnych i późnych mikrouszkodzeń oraz metod wykrywania przebudowy serca w sercach rekonwalescentów.

Wizualizacja Streptococcus pneumoniae w obrębie mikrouszkodzeń serca i późniejsza przebudowa serca

W literaturze opisano kilka metod modelowania bakteryjnego zapalenia płuc u myszy. W niniejszym artykule opisano nieinwazyjną, niedrogą i szybką metodę wywoływania zapalenia płuc poprzez aspirację (tj. wdychanie) inokulum bakteryjnego pipetowanego do jamy ustnej i gardła. Szczegółowo opisano również dalsze metody oceny wrodzonej odpowiedzi immunologicznej płuc.

Nieinwazyjna i technicznie nieintensywna metoda indukcji i fenotypowania eksperymentalnego bakteryjnego zapalenia płuc u myszy

Zakaźne zapalenie płuc jest jedną z najczęstszych infekcji u ludzi. Odpowiedni model in vivo ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia patogenezy choroby i testowania skuteczności nowych terapii. Dzięki temu mysiemu modelowi aspiracyjnego zapalenia płuc w jamie ustnej i gardle można zbadać patogenezę i nowe metody leczenia tych śmiertelnych infekcji.

Mysi model aspiracji jamy ustnej i gardła bakteryjnego zapalenia płuc związanego z respiratorem i nabytego w szpitalu

Wcześniaki (poród &lt; 37. tygodniu) to pilny globalny problem zdrowotny z nieoptymalnymi opcjami profilaktyki i leczenia. Przedstawiamy myszy model wcześnianego porodu wywołanego infekcją bakteryjną pochwy oraz opisujemy, jak analizować wynikającą z tego chorobność i śmiertelność noworodków.

Modelowanie wznoszącej się infekcji pochwy, przedwczesnych porodów i noworodkowej zachorowalności u myszy

Poznaj mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej. Ta metoda pozwala badać mechanizmy zakażenia u osobników starszych i identyfikować cele terapeutyczne.

Mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej podsumowuje chorobę zaostrzoną wiekiem (Wideo) | JoVE Journal

Mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej podsumowuje chorobę zaostrzoną wiekiem

Przeglądaj więcej filmów