Name: Kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach HeLa (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Poznaj metodę kwantyfikacji potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych w komórkach HeLa przy użyciu fluorescencyjnego obrazowania na żywo. Technika ta pozwala badać dysfunkcję mitochondrialną w chorobach neurodegeneracyjnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy członkom laboratorium Evansa za ich wnikliwe opinie na temat tego manuskryptu. Praca ta jest wspierana przez Duke Whitehead Scholars, Duke Science and Technology Scholars oraz Howard Hughes Medical Institute (HHMI) Hanna Gray Fellowship. Rysunek 1A został wykonany przy użyciu BioRender.com.

Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels

<ol><li>Spinelli, J. B., Haigis, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+contributions+of+mitochondria+to+cellular+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The multifaceted contributions of mitochondria to cellular metabolism.</a> Nature Cell Biology. 20 (7), 745-754 (2018).</li>
<li>West, A. P., Shadel, G. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+innate+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in innate immune responses.</a> Nature Reviews. Immunology. 11 (6), 389-402 (2011).</li>
<li>Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+MAVS%2C+a+mitochondrial+antiviral+signaling+protein+that+activates+NF-kappaB+and+IRF+3%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3.</a> Cell. 122 (5), 669-682 (2005).</li>
<li>Tait, S. W. G., Green, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+and+cell+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Mitochondria and cell signalling.</a> Journal of Cell Science. 125, 807-815 (2012).</li>
<li>Antico Arciuch, V. G., Elguero, M. E., Poderoso, J. J., Carreras, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+regulation+of+cell+cycle+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+and+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial regulation of cell cycle and proliferation.</a> Antioxidants and Redox Signaling. 16 (10), 1150-1180 (2012).</li>
<li>Grunewald, A., Kumar, K. R., Sue, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+complex+role+of+mitochondria+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">New insights into the complex role of mitochondria in Parkinson's disease.</a> Progress in Neurobiology. 177, 73-93 (2019).</li>
<li>Borsche, M., Pereira, S. L., Klein, C., Grunewald, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+and+Parkinson%27s+disease%3A+clinical%2C+molecular%2C+and+translational+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Parkinson%27s+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitochondria and Parkinson's disease: clinical, molecular, and translational aspects.</a> Journal of Parkinson's Disease. 11 (1), 45-60 (2021).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+trends+in+the+incidence%2C+prevalence%2C+and+years+lived+with+disability+of+Parkinson%27s+disease+in+204+countries%2Fterritories+from+1990+to+2019%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Global trends in the incidence, prevalence, and years lived with disability of Parkinson's disease in 204 countries/territories from 1990 to 2019.</a> Frontiers in Public Health. 9, 776847(2021).</li>
<li>Martinez-Vicente, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+mitophagy+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuronal mitophagy in neurodegenerative diseases.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 64(2017).</li>
<li>Youle, R. J., Narendra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of mitophagy.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 12 (1), 9-14 (2011).</li>
<li>Villa, E., Marchetti, S., Ricci, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+Parkin+zone%3A+mitophagy+without+Parkin%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">No Parkin zone: mitophagy without Parkin.</a> Trends in Cell Biology. 28 (11), 882-895 (2018).</li>
<li>Geisler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PINK1%2FParkin-mediated+mitophagy+is+compromised+by+PD-associated+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">The PINK1/Parkin-mediated mitophagy is compromised by PD-associated mutations.</a> Autophagy. 6 (7), 871-878 (2010).</li>
<li>Kane, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PINK1+phosphorylates+ubiquitin+to+activate+Parkin+E3+ubiquitin+ligase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">PINK1 phosphorylates ubiquitin to activate Parkin E3 ubiquitin ligase activity.</a> The Journal of Cell Biology. 205 (2), 143-153 (2014).</li>
<li>Koyano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitin+is+phosphorylated+by+PINK1+to+activate+parkin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ubiquitin is phosphorylated by PINK1 to activate parkin.</a> Nature. 510 (7503), 162-166 (2014).</li>
<li>Ordureau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+roles+of+PARKIN+and+ubiquitin+phosphorylation+by+PINK1+in+mitochondrial+quality+control+using+a+ubiquitin+replacement+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Defining roles of PARKIN and ubiquitin phosphorylation by PINK1 in mitochondrial quality control using a ubiquitin replacement strategy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (21), 6637-6642 (2015).</li>
<li>Ordureau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+proteomics+reveal+a+feedforward+mechanism+for+mitochondrial+PARKIN+translocation+and+ubiquitin+chain+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cell%22%5BJournal%5D)">Quantitative proteomics reveal a feedforward mechanism for mitochondrial PARKIN translocation and ubiquitin chain synthesis.</a> Molecular Cell. 56 (3), 360-375 (2014).</li>
<li>Kitada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+the+parkin+gene+cause+autosomal+recessive+juvenile+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in the parkin gene cause autosomal recessive juvenile parkinsonism.</a> Nature. 392 (6676), 605-608 (1998).</li>
<li>Valente, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PARK6+is+a+common+cause+of+familial+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22Neurological+Sciences%22%5BJournal%5D)">PARK6 is a common cause of familial parkinsonism.</a> Neurological Sciences. 23, S117-S118 (2002).</li>
<li>Matsuda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PINK1+stabilized+by+mitochondrial+depolarization+recruits+Parkin+to+damaged+mitochondria+and+activates+latent+Parkin+for+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">PINK1 stabilized by mitochondrial depolarization recruits Parkin to damaged mitochondria and activates latent Parkin for mitophagy.</a> The Journal of Cell Biology. 189 (2), 211-221 (2010).</li>
<li>Sriram, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Familial-associated+mutations+differentially+disrupt+the+solubility%2C+localization%2C+binding+and+ubiquitination+properties+of+parkin%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Familial-associated mutations differentially disrupt the solubility, localization, binding and ubiquitination properties of parkin.</a> Human Molecular Genetics. 14 (17), 2571-2586 (2005).</li>
<li>Vives-Bauza, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PINK1-dependent+recruitment+of+Parkin+to+mitochondria+in+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">PINK1-dependent recruitment of Parkin to mitochondria in mitophagy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (1), 378-383 (2010).</li>
<li>Wong, Y. C., Holzbaur, E. L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optineurin+is+an+autophagy+receptor+for+damaged+mitochondria+in+parkin-mediated+mitophagy+that+is+disrupted+by+an+ALS-linked+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optineurin is an autophagy receptor for damaged mitochondria in parkin-mediated mitophagy that is disrupted by an ALS-linked mutation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 111 (42), E4439-E4448 (2014).</li>
<li>Bertolin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkin+maintains+mitochondrial+levels+of+the+protective+Parkinson%27s+disease-related+enzyme+17-beta+hydroxysteroid+dehydrogenase+type+10%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Parkin maintains mitochondrial levels of the protective Parkinson's disease-related enzyme 17-beta hydroxysteroid dehydrogenase type 10.</a> Cell Death and Differentiation. 22 (10), 1563-1576 (2015).</li>
<li>Crowley, L. C., Christensen, M. E., Waterhouse, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+mitochondrial+transmembrane+potential+by+TMRE+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Measuring mitochondrial transmembrane potential by TMRE staining.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (12), (2016).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+ROS+production+under+cellular+stress%3A+comparison+of+different+detection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial ROS production under cellular stress: comparison of different detection methods.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 400 (8), 2383-2390 (2011).</li>
<li>Moore, A. S., Holzbaur, E. L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+recruitment+and+activation+of+ALS-associated+TBK1+with+its+target+optineurin+are+required+for+efficient+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Dynamic recruitment and activation of ALS-associated TBK1 with its target optineurin are required for efficient mitophagy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 113 (24), E3349-E3358 (2016).</li>
<li>Evans, C. S., Holzbaur, E. L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+engulfed+mitochondria+is+rate-limiting+in+Optineurin-mediated+mitophagy+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Degradation of engulfed mitochondria is rate-limiting in Optineurin-mediated mitophagy in neurons.</a> eLife. 9, e50260(2020).</li>
<li>Jacobsen, L. B., Calvin, S. A., Colvin, K. E., Wright, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FuGENE+6+Transfection+Reagent%3A+the+gentle+power%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">FuGENE 6 Transfection Reagent: the gentle power.</a> Methods. 33 (2), 104-112 (2004).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Mitra, K., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+dynamics+and+functions+using+imaging+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial dynamics and functions using imaging approaches.</a> Current Protocols in Cell Biology. , Chapter 4, Unit 4.25 1-21 (2010).</li>
<li>Lin, H. C., Liu, S. Y., Lai, H. S., Lai, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+mitochondria+infusion+mitigates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+liver+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Isolated mitochondria infusion mitigates ischemia-reperfusion injury of the liver in rats.</a> Shock. 39 (3), 304-310 (2013).</li>
<li>Kholmukhamedov, A., Schwartz, J. M., Lemasters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+mitochondria+infusion+mitigates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+liver+in+rats%3A+mitotracker+probes+and+mitochondrial+membrane+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Isolated mitochondria infusion mitigates ischemia-reperfusion injury of the liver in rats: mitotracker probes and mitochondrial membrane potential.</a> Shock. 39 (6), 543(2013).</li>
<li>Thorn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+encoded+fluorescent+tags%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Genetically encoded fluorescent tags.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (7), 848-857 (2017).</li>
<li>Pavel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+inhibition+controls+cell+survival+and+proliferation+via+YAP%2FTAZ-autophagy+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Contact inhibition controls cell survival and proliferation via YAP/TAZ-autophagy axis.</a> Nature Communications. 9 (1), 2961(2018).</li>
<li>Rossignol, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+substrate+modulates+mitochondrial+structure+and+oxidative+capacity+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Energy substrate modulates mitochondrial structure and oxidative capacity in cancer cells.</a> Cancer Research. 64 (3), 985-993 (2004).</li>
<li>Schornack, P. A., Gillies, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+cell+metabolism+and+H%2B+diffusion+to+the+acidic+pH+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Contributions of cell metabolism and H+ diffusion to the acidic pH of tumors.</a> Neoplasia. 5 (2), 135-145 (2003).</li>
<li>Christensen, M. E., Jansen, E. S., Sanchez, W., Waterhouse, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+based+assays+for+the+measurement+of+apoptosis-associated+mitochondrial+membrane+depolarisation+and+cytochrome+c+release%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry based assays for the measurement of apoptosis-associated mitochondrial membrane depolarisation and cytochrome c release.</a> Methods. 61 (2), 138-145 (2013).</li>
<li>Muller, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+extracellular+flux+analysis+for+determining+mitochondrial+function+in+mammalian+oocytes+and+early+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Application of extracellular flux analysis for determining mitochondrial function in mammalian oocytes and early embryos.</a> Scientific Reports. 9 (1), 16778(2019).</li>
<li>Connolly, N. M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+on+experimental+methods+to+assess+mitochondrial+dysfunction+in+cellular+models+of+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Guidelines on experimental methods to assess mitochondrial dysfunction in cellular models of neurodegenerative diseases.</a> Cell Death and Differentiation. 25 (3), 542-572 (2018).</li>
<li>Demine, S., Renard, P., Arnould, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+uncoupling%3A+a+key+controller+of+biological+processes+in+physiology+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial uncoupling: a key controller of biological processes in physiology and diseases.</a> Cells. 8 (8), 795(2019).</li>
<li>Narendra, D., Tanaka, A., Suen, D. F., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkin+is+recruited+selectively+to+impaired+mitochondria+and+promotes+their+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Parkin is recruited selectively to impaired mitochondria and promotes their autophagy.</a> The Journal of Cell Biology. 183 (5), 795-803 (2008).</li>
<li>Kwak, S. H., Park, K. S., Lee, K. U., Lee, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+metabolism+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Diabetes+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial metabolism and diabetes.</a> Journal of Diabetes Investigation. 1 (5), 161-169 (2010).</li>
<li>Reddy, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mitochondria+in+neurodegenerative+diseases%3A+mitochondria+as+a+therapeutic+target+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Spectrums%22%5BJournal%5D)">Role of mitochondria in neurodegenerative diseases: mitochondria as a therapeutic target in Alzheimer's disease.</a> CNS Spectrums. 14 (8), 8-13 (2009).</li>
<li>Wang, W., Zhao, F., Ma, X., Perry, G., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+dysfunction+in+the+pathogenesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+recent+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Mitochondria dysfunction in the pathogenesis of Alzheimer's disease: recent advances.</a> Molecular Neurodegeneration. 15 (1), 30(2020).</li>
<li>Baloyannis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+alterations+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimer%27s+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial alterations in Alzheimer's disease.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 9 (2), 119-126 (2006).</li>
<li>Wallace, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mitochondria and cancer.</a> Nature Reviews. Cancer. 12 (10), 685-698 (2012).</li>
<li>Middleton, P., Vergis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+and+liver+disease%3A+role%2C+relevance%2C+and+potential+for+therapeutic+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Advances+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction and liver disease: role, relevance, and potential for therapeutic modulation.</a> Therapeutic Advances in Gastroenterology. 14, 17562848211031394(2021).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania żadnych sprzecznych interesów.

Opisany tutaj przepływ pracy można wykorzystać do ilościowego określenia potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych w sposób solidny i powtarzalny przy użyciu obrazowania opartego na fluorescencji30. Podczas projektowania tych eksperymentów należy wziąć pod uwagę ważne ograniczenia techniczne. Komórki HeLa transfekowano pustym wektorem YFP, YFP-ParkinWT lub YFP-ParkinT240R. Pusty wektor YFP został użyty jako kontrola w celu potwierdzenia, że wyniki eksperyme...

Sieć mitochondrialna to szereg połączonych ze sobą organelli, które odgrywają kluczową rolę w produkcji energii1, odporność wrodzona2,3, oraz sygnalizacja komórkowa4,5. Rozregulowanie mitochondriów jest związane z chorobami neurodegeneracyjnymi, takimi jak choroba Parkinsona (PD)6,7. PD to postępująca choroba neurodegeneracyjna atakująca neurony dopaminergiczne istoty czarnej, która dotyka prawie 10 milionów ludzi na całym świecie8. PD została genetycznie powiązana z mitofagią, mitochondrialnym szlakiem kontroli jakości niezbędnym do utrzymania homeostazy komórkowej, który selektywnie usuwa uszkodzone mitochondria9,10. Badania zidentyfikowały wiele niezależnych szlaków mitofagii, w tym domenę FUN14 zawierającą mitofagię za pośrednictwem 1 (FUNDC1), mitofagię wspomaganą białkiem oddziałującym z Bcl-2 3 (BNIP3), mitofagię zależną od NIX i dobrze scharakteryzowaną kinazę 1 indukowaną przez PTEN (PINK1)/mitofagię regulowaną przez parkinę10,11. PINK1 (przypuszczalna kinaza) i Parkina (ligaza ubikwityny E3) działają w tandemie, aby fosfo-ubikwitynacja uszkodzone mitochondria, co napędza tworzenie autofagosomów, które pochłaniają uszkodzone organelle i łączą się z lizosomami, aby zainicjować degradację12,13,14,15,16. Mutacje w parkinie są związane z fenotypami związanymi z chorobą Parkinsona, takimi jak neurodegeneracja poprzez utratę neuronów dopaminergicznych17,18.
Tutaj opisany jest protokół, w którym komórki HeLa, rutynowo używane unieśmiertelnione komórki pochodzące z raka szyjki macicy, są używane do badania roli Parkiny w utrzymaniu zdrowia sieci mitochondrialnej. Komórki HeLa wyrażają znikome poziomy endogennej Parkiny i dlatego wymagają egzogennej ekspresji Parkiny19. Aby zbadać rolę Parkiny w zdrowiu sieci mitochondrialnej, komórki HeLa są transfekowane Parkiną typu dzikiego (ParkinWT), mutantem Parkiny (ParkinT240R) lub pustym wektorem kontrolnym. ParkinaT240R jest autosomalną recesywną mutacją parkinsonizmu młodzieńczego, która wpływa na aktywność ligazy Parkin E3, znacznie zmniejszając wydajność szlaku mitofagii20. Komórki HeLa są poddawane łagodnym (5 μM) lub ciężkim (20 μM) stężeniom m-chlorofenylohydrazonu cyjanku karbonylu (CCCP), środka rozprzęgającego mitochondria. Leczenie ciężkimi stężeniami CCCP jest rutynowo stosowane w celu wywołania mitofagii za pośrednictwem Parkiny w różnych liniach komórkowych, takich jak komórki HeLa i COS-721,22,23.
Po leczeniu, protokół wykorzystuje obrazowanie na żywo sieci mitochondrialnej przy użyciu dwóch obecnie dostępnych barwników fluorescencyjnych ukierunkowanych na mitochondria. Tetrametylorodamina, ester etylowy, nadchloran (TMRE) jest barwnikiem kationowym, który fluoryzuje w oparciu o potencjał błony mitochondrialnej24, podczas gdy MitoSOX to mitochondrialny wskaźnik ponadtlenkowy, w którym intensywność fluorescencji jest funkcją stężenia ponadtlenkowego25. Wreszcie, przedstawiony protokół wykorzystuje kwantyfikację opartą na fluorescencji i prosty przepływ pracy, aby skutecznie określić ilościowo potencjał błony mitochondrialnej i poziomy ponadtlenkowe przy minimalnym zakresie stronniczości użytkownika. Chociaż protokół ten został zaprojektowany do badania funkcji mitochondriów w komórkach HeLa, można go dostosować do dodatkowych linii komórkowych i pierwotnych typów komórek, aby ilościowo scharakteryzować zdrowie sieci mitochondrialnej.

<table><tbody><tr><td>Chemicals, peptides and Recombinant Proteins</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CCCP (m-chlorofenylohydrazon cyjanku karbonylu)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2759</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (1x) z 4,5 g/L glukozy</td><td>Gibco</td><td>11-965-084</td><td></td></tr><tr><td>DMSO, Bezwodny</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>Hyklon płodu bydlęcego</td><td></td><td>SH3007103</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE 6 (odczynnik do transfekcji)</td><td>Promega</td><td>E2691</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX 100x (roztwór L-glutaminy)&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>35-050-061</td><td></td></tr><tr><td>Hoescht 33342</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>MitoSOX&nbsp; Czerwony&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M36008</td><td></td></tr><tr><td>MitoTracker Deep Red</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M7514</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM (Redued Serum media)</td><td>ThermoFisher scientific</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>Tetrametylodamina, ester etylowy, nadchloran (TMRE)&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>T669</td><td></td></tr><tr><td>Modele eksperymentalne: Organizmy/Szczepy</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HeLa-M (Homo sapiens)</td><td>A. Peden (Cambridge Institute for Medical Research)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinowane DNA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EYFP Pusty wektor</td><td>Nie dotyczy</td><td>Nie dotyczy</td><td></td></tr><tr><td>YFP-Parkin T240R</td><td>Ten artykuł</td><td>Wygenerowany przez mutagenezę ukierunkowaną na miejsce z YFP-Parkin</td><td></td></tr><tr><td>YFP-Parkin WT</td><td>Addgene; PMID:19029340</td><td>RRID:Addgene_23955</td><td></td></tr><tr><td>Software and Algorithms</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>Adobe Inc.</td><td>https://www.adobe.com/products/illustrator</td><td>(Schindelin, 2012)</td></tr><tr><td>Excel (oprogramowanie do obsługi arkuszy kalkulacyjnych)</td><td>Microsoft Office&nbsp;</td><td></td><td></td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</tr><tr><td>ImageJ</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr> <tr><td>Leica Application Suite (LAS X)</td><td>Leica</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/</td><td></td></tr> <tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft Office</td><td>https://www.microsoft.com/excel</td><td></td></tr><tr><td>Prism9 (Statystyczne Oprogramowanie analityczne)</td><td>Oprogramowanie GraphPad</td><td>https://www.graphpad.com</td><td></td></tr><tr><td><mocny>Inne</mocny></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 mm Talerz, nr 1,5 Szkiełko nakrywkowe, średnica szkła 20 mm, niepowlekany</td> Inkubator klatkowy <td>MatTek</td><td>P35G-1.5-20-C</td><td></td></tr><tr><td>(komora środowiskowa)</td><td>Mikroskop</td> odwrócony Okolab <td>https://www.oko-lab.com/cage-incubator</td><td></td></tr><tr><td>DMiL</td><td>Oprogramowanie do</td> dekonwolucji Leica <td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>LIGHTNING Mikroskop konfokalny</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>STELLARIS 8</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach hela

Fluorescence-Based Quantification of Mitochondrial Membrane Potential and Superoxide Levels Using Live Imaging in HeLa Cells

Mitochondria to dynamiczne organelle kluczowe dla homeostazy metabolicznej poprzez kontrolowanie produkcji energii poprzez syntezę ATP. Aby wspierać metabolizm komórkowy, różne mechanizmy kontroli jakości mitochondriów współpracują ze sobą w celu utrzymania zdrowej sieci mitochondrialnej. Jednym z takich szlaków jest mitofagia, w której kinaza 1 indukowana przez PTEN (PINK1) i fosfo-ubikwitynacja uszkodzonych mitochondriów Parkiny ułatwiają sekwestrację autofagosomów, a następnie usuwanie z komórki poprzez fuzję lizosomów. Mitofagia jest ważna dla homeostazy komórkowej, a mutacje w parkinie są związane z chorobą Parkinsona (PD). Ze względu na te odkrycia położono znaczny nacisk na badanie uszkodzeń i obrotu mitochondriów, aby zrozumieć mechanizmy molekularne i dynamikę kontroli jakości mitochondriów. W tym przypadku wykorzystano obrazowanie żywych komórek do wizualizacji sieci mitochondrialnej komórek HeLa, w celu ilościowego określenia potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych po leczeniu m-chlorofenylohydrazonem cyjanku karbonylu (CCCP), środkiem rozprzęgającym mitochondria. Ponadto mutacja Parkiny związana z PD (ParkinT240R), która hamuje mitofagię zależną od Parkiny, została wyrażona w celu określenia, w jaki sposób zmutowana ekspresja wpływa na sieć mitochondrialną w porównaniu z komórkami wykazującymi ekspresję Parkiny typu dzikiego. Przedstawiony tutaj protokół opisuje prosty przepływ pracy wykorzystujący podejścia oparte na fluorescencji w celu skutecznego ilościowego określenia potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych.

W niniejszym protokole zastosowano ilościowe oznaczenie fluorescencyjne w celu pomiaru potencjału błonowego oraz poziomu ponadtlenków w sieci mitochondrialnej po traktowaniu CCCP (Rycina 1). W tym schemencie doświadczalnym wykorzystano komórki HeLa, unieśmiertelną linię komórkową pochodzącą z raka szyjki macicy. Komórki HeLa są rutynowo stosowane do badania biologii mitochondriów i są stosunkowo płaskie, co ułatwia wizualizację sieci mitochondrialnej za pomocą mikroskopii. Aby zbadać rolę bi...

Ta technika opisuje efektywny przepływ pracy do wizualizacji i ilościowego pomiaru potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych w komórkach HeLa za pomocą obrazowania na żywo opartego na fluorescencji.

Kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach HeLa

Mitochondria are dynamic organelles critical for metabolic homeostasis by controlling energy production via ATP synthesis. To support cellular metabolism, ...

Badania te koncentrują się na rozregulowaniu mitochondriów w chorobach neurodegeneracyjnych. Wierzymy, że badania te mogą być wykorzystane do zrozumienia potencjalnych przyczyn wystąpienia choroby, które mogą prowadzić do terapii zwalczających choroby neurodegeneracyjne, takie jak choroba Parkinsona i ALS. Techniki takie jak mikroskopia superrozdzielcza, taka jak STED i SIM, lub mikroskopia ekspansywacyjna poprawiły zdolność dokładnego zrozumienia rozmieszczenia białek w poszczególnych organellach i rozmieszczenia mitochondriów w komórce.Wyniki tej techniki mogą być wykorzystane jako punkt wyjścia do badania wpływu mutacji związanych z chorobą Parkinsona na obrót mitochondriów i rozpoczęcia zrozumienia znaczenia regulacji poziomów reaktywnych form tlenu i potencjału błony mitochondrialnej w celu utrzymania zdrowia neuronów. Nasze laboratorium ma na celu mechanistyczne scharakteryzowanie poszczególnych mitochondrialnych ścieżek kontroli jakości, aby zrozumieć wzajemne oddziaływanie między tymi szlakami. Mając wgląd w dynamikę szlaków, można zrozumieć, w jaki sposób mitochondria są utrzymywane i jak dysregulacja mitochondriów przyczynia się do wystąpienia choroby neurodegeneracyjnej.Zacznij od zmieszania 200 mikrolitrów zredukowanej pożywki surowicy z 2 mikrogramami dowolnego DNA w kratę oddzielnie w sterylnej probówce do mikrowirówki 1. Powtórz to dla dwóch innych plazmidów w oddzielnych probówkach. Następnie w nowej probówce 2 wymieszaj 200 mikrolitrów zredukowanej pożywki surowicy z 6 mikrolitrami odczynnika do transfekcji i wymieszaj zawartość przez pipetowanie.Inkubować probówki przez pięć minut w temperaturze pokojowej przed zmieszaniem zawartości probówki 2 z probówką 1. W oddzielnych probówkach powtórz mieszanie pozostałych dwóch plazmidów z odczynnikiem do transfekcji. Inkubować mieszaninę przez 20 minut w temperaturze pokojowej.Następnie dodaj kompleksy transfekcji do szalek obrazowania z nasionami kultur komórkowych HeLa, zapewniając równomierne rozprowadzenie w całej szalce. Na godzinę przed obrazowaniem otwórz zawór zbiornika dwutlenku węgla i włącz sterownik środowiskowy mikroskopu. Za pomocą strzałek w górę iw dół na panelu dotykowym ustaw temperaturę na 37 stopni Celsjusza, a dwutlenek węgla na 5%, naciśnij Set po zakończeniu.Aby dostosować ustawienia lasera, włącz laser światła białego, klikając kartę Acquire (Pobierz) i wybierając opcję Open Laser Overview (Otwórz przegląd lasera). W oknie dialogowym przełącz laser światła białego na Wł.Wprowadź moc lasera jako 85%Kliknij przycisk Kontrola wzbudzenia i wybierz Moc maksymalna z menu rozwijanego. Rozpocznij eksperyment z tetrametylorodaminą, perkolatem estru etylowego lub TMRE, ustawiając laser wzbudzający na 514 nanometrów i okno widm emisyjnych na 524 do 545 nanometrów dla YFP.Następnie, dla MitoTracker Deep Red, ustaw laser wzbudzający na 641, a okno widm emisyjnych na 650 do 750 nanometrów. Podobnie dla TMRE ustaw laser wzbudzający na 555 nanometrów, a okno widm emisyjnych na 557 do 643 nanometrów. Rozpocznij ustawianie akwizycji obrazu, wybierając kartę Pobieranie i dostosowując format do 1024 x 1024.Ustaw prędkość na 600 w menu rozwijanym. Następnie kliknij przycisk Średnia liniowa i z menu rozwijanego wybierz 3. Włącz skanowanie dwukierunkowe i ustaw fazę oraz współczynnik powiększenia odpowiednio na 22,61 i 1,50.Po zakończeniu wybierz komórki na podstawie sygnału fluorescencyjnego YFP, klikając ustawienie YFP 1 i naciskając Fast Live. Następnie dostosuj wzmocnienie i intensywność YFP, a następnie wybierz komórki na podstawie sygnału fluorescencyjnego YFP. Aby zobrazować płytkę kontrolną DMSO w eksperymencie TMRE, dostosuj wzmocnienie i intensywność ustawienia sygnału TMRE 2 tak, aby intensywność sieci mitochondrialnej była tuż poniżej nasycenia.Utrzymuj stałe wzmocnienie i intensywność TMRE. Następnie dostosuj wzmocnienie i intensywność ustawienia MitoTracker 1 tak, aby sieć mitochondrialna była widoczna, ale przyciemniona. Po zakończeniu ustawień wzmocnienia i intensywności kliknij przycisk Start, aby uzyskać obraz.Uzyskaj obrazy 20 komórek w każdym warunku eksperymentalnym. Aby zmierzyć intensywność fluorescencji transfekowanych komórek HeLa w oprogramowaniu ImageJ, kliknij Plik i wybierz Otwórz. W oknie dialogowym wybierz pliki obrazowania do eksperymentu i kliknij przycisk OK. Gdy pojawi się okno Opcje importu formatów biologicznych, wybierz Podziel kanały i kliknij OK.In eksperymenty z tetrametylorodaminą, perkolatem estru etylowego lub TMRE, YFP jest pierwszym kanałem.MitoTracker jest drugim kanałem, a TMRE jest trzecim kanałem. Dostosuj jasność, wybierając Obraz, następnie Dostosuj, a następnie Jasność. Następnie załaduj zapisany obszar zainteresowania lub ROI, klikając Analizuj, następnie Narzędzia, a następnie Menedżer ROI.W Menedżerze ROI kliknij Więcej, a następnie Otwórz z listy i wybierz zapisany ROI. Następnie zmierz intensywność fluorescencji pięciu losowych regionów w jednej komórce, wybierając zapisany zwrot z inwestycji z menedżera zwrotu z inwestycji i przenosząc zwrot z inwestycji w losowe miejsce w komórce. Aby zmierzyć intensywność fluorescencji, naciśnij M na klawiaturze i powtórz tę czynność z czterema dodatkowymi, nienakładającymi się obszarami.Gdy pojawi się okno dialogowe z wartościami obszaru i średniej szarości, skopiuj wartości i wklej je do arkusza kalkulacyjnego w celu analizy. Wyniki dotyczące intensywności fluorescencji TMRE i MitoSOX wykazały, że leczenie znanym czynnikiem rozprzęgającym CCCP zmniejszyło intensywność fluorescencji TMRE w porównaniu z warunkami kontrolnymi. Ponadto 20-mikromolowe leczenie CCCP indukowało produkcję ponadtlenkową i zwiększało intensywność fluorescencji MitoSOX.W łagodnych lub pięciomikromolowych warunkach stresu CCCP ekspresja Parkin Wild-Type i Parkin T240R skutkowała wyższą intensywnością TMRE w porównaniu z pustym wektorem kontrolnym YFP. Intensywność MitoSOX była niższa w komórkach eksprymujących Parkinę typu dzikiego i Parkinę T240R w porównaniu z komórkami eksprymującymi wektor kontrolny YFP, co sugeruje, że ekspresja Parkiny pomaga utrzymać zdrowie sieci mitochondrialnej poprzez zachowanie wyższych potencjałów błony mitochondrialnej i niskich poziomów ponadtlenków.

fluorescence-based-quantification-mitochondrial-membrane-potential

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Niniejszy protokół opisuje metodę pomiaru przepływów wapnia w mitochondriach w czasie rzeczywistym za pomocą obrazowania fluorescencyjnego. Metoda ta wykorzystuje ratiometryczny sensor wapnia oparty na cyklicznie permutowanej białku YFP z podwójnym wzbudzeniem (ratiometryczny pericam-mt), który jest selektywnie ekspresowany w mitochondriach.

Monitorowanie dynamicznych zmian poziomu wapnia w mitochondriach podczas apoptozy z wykorzystaniem genetycznie kodowanego sensora wapnia

Konfokalna mikroskopia skaningowa jest stosowana do obrazowania pojedynczych zdarzeń mitochondrialnych w perfundowanych mięśniach serca lub szkieletowych u żywych zwierząt. Monitorowanie w czasie rzeczywistym pojedynczych procesów mitochondrialnych, takich jak błyski ponadtlenkowe i wahania potencjału błonowego, umożliwia ocenę funkcji mitochondriów w fizjologicznie istotnym kontekście i podczas patologicznych perturbacji.

Obrazowanie konfokalne pojedynczych mitochondrialnych błysków ponadtlenkowych w nienaruszonym sercu lub in vivo

Mitochondria mogą wykorzystywać potencjał elektrochemiczny w swojej wewnętrznej błonie (ΔΨm) do sekwestracji wapnia (Ca2+), co pozwala im kształtować cytozolową sygnalizację Ca2+ w komórce. Opisano metodę jednoczesnego pomiaru wychwytu Ca2+ i ΔΨm w mitochondriach w żywych komórkach za pomocą barwników fluorescencyjnych i mikroskopii konfokalnej.

Jednoczesny pomiar mitochondrialnego wapnia i potencjału błony mitochondrialnej w żywych komórkach za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej

Ten artykuł przedstawia proces pracy mikroskopii o wysokiej zawartości do jednoczesnej kwantyfikacji wewnątrzkomórkowych poziomów ROS, jak również potencjału i morfologii błony mitochondrialnej - wspólnie określanych jako morfofunkcja mitochondriów - w żywych komórkach przylegających przy użyciu przenikających komórkę fluorescencyjnych cząsteczek reporterowych 5-(i-6)-chlorometylo-2',7'-dichlorodihydrofluoresceiny dioctanu, ester acetylowy (CM-H2DCFDA) i ester metylowy tetrametylodaminy (TMRM).

Profilowanie redoks komórkowe przy użyciu mikroskopii o wysokiej zawartości

W tym badaniu opisujemy krok po kroku protokół i kładziemy nacisk na kluczowe szczegóły dotyczące określania cech morfologicznych mitochondriów w żywych komórkach, w tym przygotowanie próbki, akwizycję obrazu i analizę danych. Ta metoda jest powszechnie stosowana do badania morfologii mitochondriów w celu badania różnych schorzeń.

Oznaczanie morfologii mitochondriów w żywych komórkach za pomocą mikroskopii konfokalnej

Zakres wlotu Ca2+ zależnego od zapasów (SOCE) można monitorować przy użyciu fluorescencyjnych wskaźników Ca2+. Wygaszanie tych wskaźników przez Mn2+ pozwala na badanie SOCE w hodowlach komórkowych i włóknach mięśni szkieletowych. Opisano również technikę umożliwiającą rozdzielczość przestrzenną i czasową SOCE poprzez obrazowanie konfokalne mechanicznie odskórkowanych włókien mięśniowych.

Pomiar wewnątrzkomórkowego napływu wapnia sterowanego zapasami w żywych komórkach z wykorzystaniem fluorescencji: od hodowlanych komórek nowotworowych po włókna mięśni szkieletowych

Żywotność komórek zależy od szybkiego i skutecznego radzenia sobie z nieprawidłowym fałdowaniem białek.  W tym miejscu opisujemy metodę wizualizacji różnych potencjalnych losów nieprawidłowo sfałdowanego białka: ponownego fałdowania, degradacji lub sekwestracji w inkluzjach. Demonstrujemy zastosowanie czujnika składania, Ubc9ts, do monitorowania proteostazy i kontroli jakości agregacji w żywych komórkach za pomocą mikroskopii 4D.

Obrazowanie 4D agregacji białek w żywych komórkach

Tutaj opisujemy skuteczną metodę badania dynamiki apoptotycznego oczyszczania komórek in vivo. Metoda ta wykorzystuje żywe zarodki Drosophila jako potężny model do monitorowania fagocytozy komórek apoptotycznych przy użyciu specyficznego znakowania komórek apoptotycznych i fagocytów.

Obrazowanie na żywo apoptotycznego usuwania komórek podczas embriogenezy Drosophila

Mikroskopia przyżyciowe to potężne narzędzie, które umożliwia obrazowanie różnych procesów biologicznych u żywych zwierząt. W tym artykule przedstawiamy szczegółową metodę obrazowania dynamiki struktur subkomórkowych, takich jak ziarnistości wydzielnicze, w gruczołach ślinowych żywych myszy.

Mikroskopia przyżyteczna do obrazowania struktur subkomórkowych u żywych myszy wykazujących ekspresję białek fluorescencyjnych

Ten artykuł przedstawia protokół wykrywania jednego lub więcej białek plazmy i/lub błony wewnątrzkomórkowej za pomocą mikroskopii superrozdzielczej GSD (Ground State Depletion) w komórkach ssaków. W tym miejscu omawiamy korzyści i rozważania dotyczące stosowania takich podejść do wizualizacji i kwantyfikacji białek komórkowych.

Obrazowanie w superrozdzielczości zubożenia stanu podstawowego w komórkach ssaków

Poznaj metodę kwantyfikacji potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych w komórkach HeLa przy użyciu fluorescencyjnego obrazowania na żywo. Technika ta pozwala badać dysfunkcję mitochondrialną w chorobach neurodegeneracyjnych.

Kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach HeLa (Wideo) | JoVE Journal

Kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach HeLa

Przeglądaj więcej filmów