Name: Dynamiczna wieloparametrowa ocena funkcji płytek krwi za pomocą biosensora pojemnościowego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Poznaj dynamiczną wieloparametrową ocenę funkcji płytek krwi za pomocą biosensora pojemnościowego w półsztywnym mikrośrodowisku. Ta metoda umożliwia jednoczesne pomiar liczby płytek, siły stymulacji i szlaków aktywacji w warunkach fizjologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy wyrażają swoją wdzięczność dr Moritzowi Stolli i dr Jasonowi Ackerowi za ich cenne dyskusje i pomoc techniczną. Wyrażają również uznanie dla Biology Imaging Facility na Uniwersytecie Waszyngtońskim za jego infrastrukturę i wsparcie. Prace te otrzymały częściowe dofinansowanie z CoMotion Innovation Fund na Uniwersytecie Waszyngtońskim (grant nr 682548, D.Y.G.).

Propozycja badania została zatwierdzona przez Wydział Przedmiotów Ludzkich (HSD) przy Wewnętrznej Komisji Rewizyjnej Uniwersytetu Waszyngtońskiego (UW-IRB; ID badania: STUDY00005211). Wszyscy ochotnicy, którzy wzięli udział w badaniu, wyrazili pisemną świadomą zgodę. Szczegółowe informacje na temat odczynników i sprzętu użytego w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów.
1. Etapy produkcji membranowego czujnika pojemnościowego (MCS)
UWAGA: Czujnik MCS został wyprodukowany przy użyciu tradycyjnych technik mikroprodukcji. Ten bioczujnik składał się z górnego (T-) i dolnego (B-) chipa pojemnościowego membrany (MCC). Krótko mówiąc, etapy produkcji są pokazane w Rysunek 1.
<ol>
	<li>Etapy mikroprodukcji dla T-MCC (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A)
	<ol>
		<li>Zaprojektuj układ T-MCC za pomocą standardowego oprogramowania CAD do tyczenia 4-calowego podłoża z płytki krzemowej.</li>
		<li>Przenieś projekt na fotomaskę ze szkła chromowego, korzystając ze standardowego procesu produkcji maski29,30.</li>
		<li>Na czystym, dwustronnie polerowanym podłożu silikonowym (o grubości 400 μm) nanieść Si3N4 o grubości 500 nm przy użyciu standardowej techniki niskociśnieniowego chemicznego osadzania z fazy gazowej (LPCVD)31. Przędzić 12 μm fotorezystu AZ 9260 z prędkością 2000 obr./min przez 25 s za pomocą ręcznej powlekarki wirowej.</li>
		<li>Korzystając ze standardowej techniki fotolitografii UV32, uformuj fotorezystor, który polega na naświetleniu fotorezystu za pomocą fotomaski ze szkła chromowanego w nakładce UV i rozwinięciu rezystu w roztworze wywoływacza w celu usunięcia obszaru rezystu naświetlonego promieniami UV.</li>
		<li>Ułóż wzór na leżącej poniżej warstwie azotku krzemu o grubości 500 nm za pomocą reaktywnego procesu trawienia jonowego, który odsłania podłoże krzemowe.</li>
		<li>Usuń odsłonięte podłoże krzemowe o grubości 400 μm za pomocą standardowego procesu Bosch: Deep Reactive Ion Si Etch process33.</li>
		<li>Oblicz żądaną liczbę cykli wytrawiania, aby usunąć 400 μm krzemu. 
		UWAGA: Będzie się to różnić w zależności od narzędzia używanego w procesie, ponieważ będą one miały wpływ na szybkość wytrawiania (w tym przypadku było to 1,8 μm / cykl).</li>
		<li>Aby zapobiec przypadkowemu wytrawieniu warstwy Si3N4, należy przerwać trawienie na sucho co najmniej 10 μm wcześniej (tj. przy 390 μm). Usunąć pozostały krzem za pomocą tradycyjnego, wysoce selektywnego KOH w temperaturze 80 °C przez 5 minut.</li>
		<li>Umieść kolejno 20 nm warstw Cr i 150 nm Au za pomocą procesu parowania wiązką E34 i maski cienia w celu wytworzenia elektrody czujnikowej w T-MCC.</li>
		<li>Na tym etapie T-MCC w płytce zostanie połączone za pomocą maleńkich silikonowych uchwytów. Oddziel T-MCC, ostrożnie nakłuwając maleńkie uchwyty.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Etapy mikroprodukcji dla B-MCC (<silna klasa="xfig">Rysunek 1B)
	<ol>
		<li>Na czystym termicznie utlenionym podłożu krzemowym (o grubości 400 μm) osadź warstwy metalu Cr/Au (20 nm, 150 nm) za pomocą maski cienia, podobnie jak w kroku 1.1.9.</li>
		<li>Użyj standardowej fotolitografii32 z wyrównaniem tylnej strony, a następnie etapem trawienia na mokro KOH, aby zwolnić B-MCCs. 
		UWAGA: T- i B-MCC mają podkładki kontaktowe 2,5 x 1,5 cm.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Biofunkcjonalizacja czujnika pojemnościowego
UWAGA: Krótko mówiąc, ten krok polega na pokryciu elektrody T-MCC ludzką fibronektyną (Fn), aby ułatwić przyczepianie płytek krwi do czujnika.
<ol>
	<li>Przed nałożeniem powłok biomolekularnych należy oczyścić elektrodę czujnikową plazmą tlenową przez 45 s przy mocy 100 W.</li>
	<li>Dodać 1-dodekanetiol (1 mM) w etanolu o 200-procentowym procencie do dołka próbki na T-MCC.</li>
	<li>Umieść T-MCC w pojemniku wypełnionym suchym azotem, szczelnie zamkniętym i owiniętym parafilmem na 24-48 godzin.</li>
	<li>Spłucz powierzchnię złota wodą dejonizowaną i 200-procentowym etanolem, a następnie wysusz azotem w temperaturze pokojowej. Na tym etapie należy przechowywać czujniki w temperaturze 2-8 °C w suchej atmosferze azotu do następnych kroków.</li>
	<li>Dodać roztwór Fn w roztworze soli fizjologicznej buforowanym fosforanami (PBS, 50 μg/ml) do studzienki na 12 godzin przed pomiarem i inkubować w temperaturze 37 °C przez 2-8 godzin.</li>
</ol>
3. Konfiguracja czujnika pojemności
UWAGA: Rysunek 2 przedstawia zdjęcie układu eksperymentalnego.
<ol>
	<li>Użyj miernika LCR z mikropozycjonerami i sondami igłowymi, aby nawiązać kontakt elektryczny z czujnikiem.</li>
	<li>Zastosuj plastikowe uchwyty wydrukowane w 3D (patrz tabela materiałów), aby bezpiecznie umieścić T- i B-MCC. Dolne oprawowanie jest wyposażone w ograniczniki na osi x-y, aby zapewnić precyzyjne wyrównanie T-MCC nad B-MCC w celu utworzenia kondensatora. 
	UWAGA: Wszystkie użyte drukarki 3D pochodziły z Uniwersytetu Waszyngtońskiego.</li>
	<li>Zastosuj sygnał sinusoidalny (0,5 V) przy 100 kHz i częstotliwości próbkowania 8 Hz.</li>
</ol>
4. Przygotowanie cytrynowanego osocza bogatopłytkowego (c-PRP)
UWAGA: Wszystkie próbki krwi pochodziły od ochotników, którzy wzięli udział w tym badaniu. Żaden z uczestników nie miał wcześniej znanych nieprawidłowości płytek krwi lub zaburzeń krzepnięcia i nie przyjmowali żadnych leków płytkowych, w tym niesteroidowych leków przeciwzapalnych (NLPZ), w ciągu dwóch tygodni poprzedzających pobranie próbki. Licencjonowany flebotomista przeprowadził pobieranie krwi za pomocą igły 21 G do standardowych probówek z cytrynianem 3,2%. Pierwszy 1 ml został wyrzucony, aby uniknąć zanieczyszczenia czynnikiem tkankowym. Próbki transportowano w styropianowym pojemniku, a wszystkie pomiary wykonano w ciągu 6 godzin od pobrania krwi.
<ol>
	<li>Odwirować próbkę krwi pełnej o masie 200 x g przez 10 minut w temperaturze 20 °C w celu uzyskania c-PRP.</li>
	<li>Przenieść c-PRP do sterylnego pojemnika i przeprowadzić liczbę płytek krwi. W przypadku badań nad inhibitorami należy inkubować c-PRP z predefiniowanym stężeniem leku w buforze Tyrode'a (szczegółowe informacje znajdują się w sekcji Wyniki).</li>
</ol>
5. Test czynnościowy płytek krwi
UWAGA: Schemat prezentowanego testu czynnościowego płytek krwi jest pokazany w Rysunek 3.
<ol>
	<li>Zamontuj T- i B-MCC w oprawach wydrukowanych w 3D.</li>
	<li>Mierzyć podstawowy pomiar pojemności przez 5 minut, a następnie dodać 45 μl c-PRP do dołka próbki w T-MCC.</li>
	<li>Odczekaj 30 minut, aż płytki krwi przylgną do elektrody pokrytej Fn w T-MCC.</li>
	<li>Ostrożnie usunąć 30 μl c-PRP, nie dotykając płytek krwi przyczepionych do membrany, a następnie natychmiast uzupełnić buforem Tyrode. Powtórz mycie co najmniej 5 razy w odstępie 20 sekund, aby upewnić się, że po aktywacji na elektrodzie czujnikowej nie wylądują żadne dodatkowe płytki krwi lub makroagregaty.</li>
	<li>Dodać 10 μl roztworu agonisty (trombiny lub ADP) o żądanym stężeniu. Odczekaj 80 minut czasu równowagi.</li>
</ol>
6. Dane i analiza statystyczna dla markerów sygnałowych
UWAGA: Pojemność jest mierzona w sposób ciągły od kroków 5.2-5.5.
<ol>
	<li>Dla sygnału pojemnościowego w fazie adhezji (krok 5.3) zmierz maksymalną zmianę pojemności po 30-minutowym czasie równowagi, który jest określany jako ΔCadh.</li>
	<li>Podobnie w przypadku fazy aktywacji (krok 5.5) zmierz maksymalną zmianę pojemności, która jest określana jako akt Δ C, oraz nachylenie krzywej w zakresie 200-300 s po aktywacji, co jest określane jako działanie S.</li>
	<li>Użyj analizy wariancji (ANOVA) z post-hoc Tukeya, aby porównać wyniki między grupami. Użyj Shapiro-Wilk Goodness of Fit do analizy rozkładu normalnego.</li>
</ol>

<ol><li>George, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Platelets.</a> Lancet. 355 (9214), 1531-1539 (2000).</li>
<li>Wendelboe, A. M., Raskob, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+thrombosis%3A+Epidemiologic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Global burden of thrombosis: Epidemiologic aspects.</a> Circ Res. 118 (9), 1340-1347 (2016).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of venous thromboembolism.</a> Nat Rev Cardiol. 12 (8), 464-474 (2015).</li>
<li>Moran, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+ischemic+heart+disease+in+1990+and+2010%3A+The+global+burden+of+disease+2010+study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">The global burden of ischemic heart disease in 1990 and 2010: The global burden of disease 2010 study.</a> Circulation. 129 (14), 1493-1501 (2014).</li>
<li>Campbell, B. C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Ischaemic stroke.</a> Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 70(2019).</li>
<li>Ruggeri, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+in+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Platelets in atherothrombosis.</a> Nat Med. 8 (11), 1227-1234 (2002).</li>
<li>Harrison, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+function+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Rev%22%5BJournal%5D)">Platelet function analysis.</a> Blood Rev. 19 (2), 111-123 (2005).</li>
<li>Van Der Meijden, P. E. J., Heemskerk, J. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+biology+and+functions%3A+New+concepts+and+clinical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Platelet biology and functions: New concepts and clinical perspectives.</a> Nat Rev Cardiol. 16 (3), 166-179 (2019).</li>
<li>Bhatt, D. L., Topol, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientific+and+therapeutic+advances+in+antiplatelet+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Scientific and therapeutic advances in antiplatelet therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 2 (1), 15-28 (2003).</li>
<li>Mcfadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+future+antiplatelet+therapies%3A+Emphasis+on+preserving+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Current and future antiplatelet therapies: Emphasis on preserving hemostasis.</a> Nat Rev Cardiol. 15 (3), 181-191 (2018).</li>
<li>Michelson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+antiplatelet+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hematology+Am+Soc+Hematol+Educ+Program%22%5BJournal%5D)">Advances in antiplatelet therapy.</a> Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2011, 62-69 (2011).</li>
<li>Sweeny, J. M., Gorog, D. A., Fuster, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiplatelet+drug+%27resistance%27.+Part+1%3A+Mechanisms+and+clinical+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Antiplatelet drug 'resistance'. Part 1: Mechanisms and clinical measurements.</a> Nat Rev Cardiol. 6 (4), 273-282 (2009).</li>
<li>Mega, J. L., Simon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacology+of+antithrombotic+drugs%3A+An+assessment+of+oral+antiplatelet+and+anticoagulant+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pharmacology of antithrombotic drugs: An assessment of oral antiplatelet and anticoagulant treatments.</a> Lancet. 386 (9990), 281-291 (2015).</li>
<li>Carr, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+platelet+contractile+force+as+a+research+and+clinical+measure+of+platelet+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Development of platelet contractile force as a research and clinical measure of platelet function.</a> Cell Biochem Biophys. 38 (1), 55-78 (2003).</li>
<li>Gresele, P., Bury, L., Mezzasoma, A. M., Falcinelli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+function+assays+in+diagnosis%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Hematol%22%5BJournal%5D)">Platelet function assays in diagnosis: An update.</a> Expert Rev Hematol. 12 (1), 29-46 (2019).</li>
<li>Pakala, R., Waksman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Currently+available+methods+for+platelet+function+analysis%3A+Advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Revasc+Med%22%5BJournal%5D)">Currently available methods for platelet function analysis: Advantages and disadvantages.</a> Cardiovasc Revasc Med. 12 (5), 312-322 (2011).</li>
<li>Paniccia, R., Priora, R., Liotta, A. A., Abbate, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+function+tests%3A+A+comparative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Health+Risk+Manag%22%5BJournal%5D)">Platelet function tests: A comparative review.</a> Vasc Health Risk Manag. 11, 133-148 (2015).</li>
<li>Rand, M. L., Leung, R., Packham, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+function+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Apher+Sci%22%5BJournal%5D)">Platelet function assays.</a> Transfus Apher Sci. 28 (3), 307-317 (2003).</li>
<li>Alafeef, M., Dighe, K., Moitra, P., Pan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+ultrasensitive%2C+and+quantitative+detection+of+sars-cov-2+using+antisense+oligonucleotides+directed+electrochemical+biosensor+chip%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Rapid, ultrasensitive, and quantitative detection of sars-cov-2 using antisense oligonucleotides directed electrochemical biosensor chip.</a> ACS Nano. 14 (12), 17028-17045 (2020).</li>
<li>Chowdhury, A. D., Takemura, K., Li, T. C., Suzuki, T., Park, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+pulse-induced+electrochemical+biosensor+for+hepatitis+e+virus+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Electrical pulse-induced electrochemical biosensor for hepatitis e virus detection.</a> Nat Commun. 10 (1), 3737(2019).</li>
<li>Park, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacitive+biosensor+based+on+vertically+paired+electrodes+for+the+detection+of+sars-cov-2%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Capacitive biosensor based on vertically paired electrodes for the detection of sars-cov-2.</a> Biosens Bioelectron. 202, 113975(2022).</li>
<li>Qureshi, A., Pandey, A., Chouhan, R. S., Gurbuz, Y., Niazi, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+based+label-free+capacitive+biosensor+for+rapid+nanosize-dependent+toxicity+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Whole-cell based label-free capacitive biosensor for rapid nanosize-dependent toxicity detection.</a> Biosens Bioelectron. 67, 100-106 (2015).</li>
<li>Rassaei, L., Mathwig, K., Kang, S., Heering, H. A., Lemay, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+biodetection+in+a+nanofluidic+device%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Integrated biodetection in a nanofluidic device.</a> ACS Nano. 8 (8), 8278-8284 (2014).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+DNA+capacitive+biosensor+using+interdigitated+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">A sensitive DNA capacitive biosensor using interdigitated electrodes.</a> Biosens Bioelectron. 87, 646-653 (2017).</li>
<li>Zhurauski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+and+selective+affimer-functionalized+interdigitated+electrode-based+capacitive+biosensor+for+her4+protein+tumor+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Sensitive and selective affimer-functionalized interdigitated electrode-based capacitive biosensor for her4 protein tumor biomarker detection.</a> Biosens Bioelectron. 108, 1-8 (2018).</li>
<li>Pourang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+fibrinolytic+status+in+whole+blood+using+a+dielectric+coagulometry+microsensor%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Assessment of fibrinolytic status in whole blood using a dielectric coagulometry microsensor.</a> Biosens Bioelectron. 210, 114299(2022).</li>
<li>Sekar, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+multiparameter+whole+blood+hemostasis+assessment+using+a+carbon+nanotube-paper+composite+capacitance+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Simultaneous multiparameter whole blood hemostasis assessment using a carbon nanotube-paper composite capacitance sensor.</a> Biosens Bioelectron. 197, 113786(2022).</li>
<li>P, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+multiparameter+evaluation+of+platelet+function+using+a+highly+sensitive+membrane+capacitance+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Comprehensive multiparameter evaluation of platelet function using a highly sensitive membrane capacitance sensor.</a> Biosens Bioelectron. 228, 115192(2023).</li>
<li>Franssila, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranssila%2C+S+%22Introduction+to+microfabrication%22">Introduction to microfabrication</a>. , 2nd edn, John Wiley & Sons. (2010).</li>
<li>Syed Rizvi, S. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSyed+Rizvi%2C+SR+%22Handbook+of+photomask+manufacturing+technology%22">Handbook of photomask manufacturing technology</a>. , CRC Press. (2018).</li>
<li>Yota, J., Hander, J., Saleh, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+inductively-coupled+plasma+high-density+plasma%2C+plasma-enhanced%2C+and+low+pressure+chemical+vapor+deposition+silicon+nitride+films%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vacuum+Sci+Technol+A%22%5BJournal%5D)">A comparative study on inductively-coupled plasma high-density plasma, plasma-enhanced, and low pressure chemical vapor deposition silicon nitride films.</a> J Vacuum Sci Technol A. 18 (2), 372-376 (2000).</li>
<li>Thompson, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Symp+Series%22%5BJournal%5D)">An introduction to lithography.</a> ACS Symp Series. 219, 1-13 (1983).</li>
<li>Laermer, F., Urban, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges%2C+developments+and+applications+of+silicon+deep+reactive+ion+etching%5BTitle%5D)+AND+%22Microelectron+Eng%22%5BJournal%5D)">Challenges, developments and applications of silicon deep reactive ion etching.</a> Microelectron Eng. 67 - 8, 349-355 (2003).</li>
<li>Harsha, K. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarsha%2C+KS+%22Principles+of+vapor+deposition+of+thin+films%22">Principles of vapor deposition of thin films</a>. , Elsevier. eBook ISBN: 9780080480312 (2005).</li>
<li>Lea-Henry, T. N., Carland, J. E., Stocker, S. L., Sevastos, J., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pharmacokinetics+in+kidney+disease%3A+Fundamental+principles%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Clinical pharmacokinetics in kidney disease: Fundamental principles.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 13 (7), 1085-1095 (2018).</li>
<li>Offermanns, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+platelet+function+through+g+protein-coupled+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Activation of platelet function through g protein-coupled receptors.</a> Circ Res. 99 (12), 1293-1304 (2006).</li>
<li>Trejo-Velasco, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+comorbidities+and+antiplatelet+regimen+on+platelet+reactivity+levels+in+patients+undergoing+transcatheter+aortic+valve+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Impact of comorbidities and antiplatelet regimen on platelet reactivity levels in patients undergoing transcatheter aortic valve implantation.</a> J Cardiovasc Pharmacol. 78 (3), 463-473 (2021).</li>
<li>Violi, F., Pignatelli, P., Basili, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrition%2C+supplements%2C+and+vitamins+in+platelet+function+and+bleeding%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Nutrition, supplements, and vitamins in platelet function and bleeding.</a> Circulation. 121 (8), 1033-1044 (2010).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.

W badaniu tym opracowano pionierską nowatorską, opartą na pojemności metodę oceny funkcji płytek krwi, która ocenia zarówno adhezję, jak i dynamikę płytek krwi po aktywacji w jednym urządzeniu, co stanowi pierwszy zgłoszony przypadek takiego podejścia. Nowatorski protokół eksperymentalny wprowadza stosunkowo prostą technikę przeciwdziałania skutkom tworzenia fibryny i czynników krzepnięcia w osoczu poprzez procedurę wymłukiwania. Skutkuje to pomiarami zdolnymi do rozpoznania różnych czynników wpływających na funkcję płyt...

Płytki krwi, wyspecjalizowane komórki krwi, odgrywają kluczową rolę w organizowaniu reakcji hemostatycznej w celu zatrzymania krwawienia po urazie oraz w ułatwianiu gojenia naczyń krwionośnych1. Ponadto służą również jako kluczowe mediatory w zakrzepicy, głównej przyczynie zgonów związanych z chorobą zakrzepowo-zatorową na całym świecie2,3,4,5,6. Kiedy dochodzi do urazu naczyniowego, płytki krwi przechodzą szereg złożonych, regulowanych i wieloetapowych procesów funkcjonalnych. Należą do nich adhezja do macierzy wewnętrznej, napływ wewnątrzkomórkowego wapnia wywołujący zmiany konformacyjne płytek krwi, aktywację, wydzielanie granulek, agregację i skurcz cytoszkieletu, ostatecznie tworząc i stabilizując korki hemostatyczne, aby uszczelnić uszkodzone miejsca i zapobiec krwawieniu7,8. Pomimo znacznych postępów w dziedzinie leków przeciwpłytkowych i strategii terapeutycznych9,10,11, ryzyko zakrzepicy utrzymuje się. Leczenie przeciwpłytkowe wiąże się z wyzwaniami, takimi jak ryzyko krwawienia jatrogennego, trudności w osiągnięciu skuteczności przeciwzakrzepowej przy jednoczesnym utrzymaniu hemostazy oraz zmienność reakcji pacjenta, w tym oporność na leki12,13.
Chociaż mechanizmy molekularne rządzące fazami odpowiedzi płytek krwi są dobrze udokumentowane, obecne metody badania funkcji płytek krwi pozostają nieoptymalne. Tradycyjne testy laboratoryjne często zawodzą, ponieważ oceniają tylko ograniczone aspekty aktywności płytek krwi we wczesnym i środkowym stadium, takie jak adhezja, agregacja lub lepkość skrzepów7,14,15,16,17,18. Ta częściowa analiza może prowadzić do niewystarczających informacji. Co więcej, testy te nie oferują jednoczesnej, ciągłej i szybkiej oceny wielu kluczowych elementów funkcjonalnych płytek krwi w jednym teście. W związku z tym ograniczenie to hamuje postęp zarówno w hematologii klinicznej, jak i eksperymentalnej. Z biegiem czasu opracowano mnóstwo czujników impedymetrycznych lub pojemnościowych do różnych zastosowań biomedycznych19,20,21,22,23,24,25,26,27,28.
Tutaj prezentujemy protokół oceny funkcji płytek krwi w multipleksie za pomocą biosensora pojemnościowego. Atrakcyjną cechą proponowanego podejścia jest czułe monitorowanie dynamicznych zmian w szerokim spektrum funkcji płytek krwi na poziomie komórkowym. Przedstawione podejście wykorzystuje bioczujnik składający się z dwóch mikrochipów: górnego chipa silikonowego, który jest jednorazowego użytku, zawierającego studzienkę na próbkę cytrynowanego osocza bogatopłytkowego oraz elektrodę czujnikową pokrytą ludzką fibronektyną w celu ułatwienia adhezji płytek krwi, a także dolny chip krzemowy wielokrotnego użytku zawierający elektrodę referencyjną. Ciągły pomiar dynamicznych zmian pojemności podczas całego procesu krzepnięcia, obejmujący adhezję płytek krwi, aktywację i postaktywację, umożliwia czułą analizę związaną z różnicami w liczbie płytek krwi, poziomach aktywacji płytek krwi i hamowaniu szlaków aktywacji. Kliniczną wykonalność i użyteczność tej metody wykazano przy użyciu odpowiednich próbek ludzkiego osocza, co podkreśla jej potencjał w zakresie solidnej oceny funkcji płytek krwi w warunkach klinicznych.

<table><tbody><tr><td>1-Dodekanetiol</td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>471364-100ML</td><td>1 mM</td></tr><tr><td>200-proof etanol</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>EX0276-1</td><td></td></tr><tr><td>Drukarka 3D</td><td>Shenzhen Creality 3D Technology Co, Ltd.</td><td>Ender-3 V3</td><td></td></tr><tr><td>Materiał do druku 3D</td><td>HATCHBOX 3D, CA, USA</td><td>3D PLA-1KG-1.75</td><td></td></tr><tr><td>Adenozyna 5&prime;-difosforan</td><td>Sigma Aldrich, USA</td><td>01905-250MG-F</td><td>ADP</td></tr><tr><td>Aspiryna&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, MO,</td> USA <td>A2093-100G</td><td></td></tr><tr><td>Głębokie reaktywne trawienie jonowe</td><td>Omega Engineering, Inc.</td><td>SPTS Rapier DRIE</td><td></td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>D8418-50ML</td><td></td></tr><tr><td>DMSO Wysokopróżniowe systemy osadzania</td><td>CHA&nbsp;</td><td>SEC-600</td><td></td></tr><tr><td>Ludzka fibronektyna</td><td>Sigma-Aldrich, MO,</td> USA <td>CLS356008-1EA</td><td>Fn</td></tr><tr><td>KOH</td><td>Sigma-Aldrich, MO,</td> USA <td>P1767-250G</td><td></td></tr><tr><td>LCR miernik&nbsp;</td><td>Keithley Instruments, Inc., OH, USA Uchwyty</td> miernika <td>Keithley EL 4980AL</td><td></td></tr><tr><td>LCR</td><td>Signatone Corporation, CA, USA</td><td>SCA-50-4</td><td></td></tr><tr><td>System wyrównywania masek</td><td>ABM, U.S.A., Inc.</td><td>ABM/6/350/NUV/DCCD/SA</td><td></td></tr><tr><td>Mikropozycjonery</td><td>Signatone, CA, USA Sonda</td> igłowa <td>S-725</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Signatone Corporation, Kalifornia,</td> USA <td>SCAT5T-4</td><td>12.5 &mu; m radius</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>P4474-1L</td><td>PBS, pH 7,4</td></tr><tr><td>Reaktywne trawienie jonowe</td><td>Plasma-Therm, USA</td><td>RIE Vision 320</td><td></td></tr><tr><td>podłoże krzemowe</td><td>Wafer World Inc</td><td>SKU# 1766</td><td></td></tr><tr><td>Standardowe rurki cytrynianowe 3,2%</td><td>Tiger Medical, NJ, USA</td><td>Covidien / Cardinal Health 8881340478 Monoject</td><td></td></tr><tr><td>Thrombin</td><td>Enzyme Research Laboratories, USA</td><td>HT 1002a</td> Tikagrelor, <td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>PHR2788-400MG</td><td></td></tr><tr><td>Tyrode' s buffer</td><td>Boston Bioproducts, USA</td><td>BSS-375</td><td></td></tr><tr><td>UV photoresist</td><td>AZ materiały elektroniczne, Karolina Północna, USA</td><td>AZ 9260</td><td>15um</td></tr></tbody></table>

dynamiczna wieloparametrowa ocena funkcji płytek krwi za pomocą biosensora pojemnościowego

Dynamic Multiparameter Platelet Function Assessment Using a Capacitive Biosensor

Płytki krwi odgrywają fundamentalną rolę w krzepnięciu krwi poprzez szereg regulowanych reakcji, w tym adhezję, rozprzestrzenianie się, wydzielanie ziarniste, agregację i skurcz cytoszkieletu. Jednak obecne testy ograniczają się do częściowej analizy funkcji płytek krwi w warunkach niefizjologicznych. W związku z tym konieczny jest ulepszony test, który odzwierciedla dynamiczny i wieloaspektowy charakter funkcji płytek krwi w warunkach fizjologicznych. W tym kontekście wprowadzono nowatorskie podejście do pomiaru kilku kluczowych parametrów związanych z funkcją płytek krwi w bardziej fizjologicznie istotnym półsztywnym mikrośrodowisku ex vivo w porównaniu z tradycyjnymi testami. Metoda ta wykorzystuje zaawansowany bioczujnik elektryczny, membranowy czujnik pojemnościowy (MCS), który zapewnia unikalny wgląd w proces krzepnięcia dzięki trzem różnym odczytom. Odczyty te są bardzo wrażliwe na zmiany liczby płytek krwi, intensywności stymulacji i określonych szlaków aktywacji. Jako czysto elektryczna platforma detekcyjna, MCS wykazuje znaczny potencjał jako narzędzie diagnostyczne do wykrywania pierwotnych zaburzeń funkcji hemostatycznej, oceny skuteczności leczenia i pogłębiania szerszego zrozumienia roli płytek krwi w hemostazie i zakrzepicy.

Celem niniejszej pracy jest przeprowadzenie dynamicznej oceny funkcji płytek krwi. Zgodnie z opisanym powyżej protokołem przygotowano roztwór c-PRP, a następnie naniesiono płytki krwi na pokrytą Fn elektrodę w T-MCC. Wolno pływające płytki krwi zostały usunięte podczas etapu płukania, po czym dodano agonistę w celu aktywacji przytwierdzonych płytek. Szczegółowe wyniki i dyskusję można znaleźć w naszym poprzednim raporcie28.
Rycina 4A przeds...

Protokół dla nowatorskiego dynamicznego wieloparametrowego testu funkcjonalnego płytek krwi przy użyciu biosensora pojemnościowego jest prezentowany tutaj. To podejście, zaprojektowane w półsztywnym mikrośrodowisku w celu zwiększenia znaczenia fizjologicznego, zapewnia trzy parametry wyjściowe wrażliwe na liczbę płytek krwi, siłę stymulacji i szlaki aktywacji.

Dynamiczna wieloparametrowa ocena funkcji płytek krwi za pomocą biosensora pojemnościowego

Platelets play a fundamental role in blood clotting through a series of regulated responses, including adhesion, spreading, granular secretion, ...

Projektujemy test do oceny funkcji płytek krwi w warunkach fizjologicznych, aby rozwiązać problem ograniczeń obecnych testów poprzez aktywację płytek krwi w półsztywnym mikrośrodowisku za pomocą czujnika pojemności membrany. Test mierzy liczbę płytek krwi, siłę stymulacji i szlaki aktywacji. Narzędzie to oferuje kompleksowe podejście do badania mechanizmów płytek krwi podczas hemostazy.Nasz protokół może ocenić wiele parametrów płytek krwi w jednym teście w warunkach fizjologicznych. Skupimy się na ulepszeniu tego protokołu i opracowaniu innych czujników oceny hemostazy. Zacznij od użycia standardowego oprogramowania do tworzenia układów CAD, aby zaprojektować układ zespołu membranowego układu pojemnościowego (MCC) dla czterocalowego podłoża z płytki krzemowej do procesu mikrofabrykacji, jak opisano w manuskrypcie.W celu biofunkcjonalizacji wyczyść elektrodę czujnikową TMCC za pomocą plazmy tlenowej przez 45 sekund przy mocy 100 watów. Dodaj jeden roztwór Do Decanal w 200-procentowym etanolu do studzienki na próbkę na TMCC. Umieść TMCC w pojemniku wypełnionym suchym azotem.Zamknij pojemnik i owiń go parafilmem na 24 do 48 godzin. Po dwóch dniach spłucz złotą powierzchnię TMCC wodą dejonizowaną i 200-procentowym etanolem. Wysuszyć TMCC gazowym azotem w temperaturze pokojowej.Dodaj ludzki roztwór fibronektyny w PBS do dołka próbki TMCC i inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez dwie do ośmiu godzin. Do konfiguracji czujnika pojemnościowego należy użyć miernika LCR z mikropozycjonerami i sondami igłowymi, aby nawiązać kontakt elektryczny z czujnikiem. Zastosuj plastikowe uchwyty wydrukowane w 3D, aby bezpiecznie umieścić TMCC i BMCC.Upewnij się, że dolne urządzenie jest wyposażone w ograniczniki na osi XY, aby precyzyjnie wyrównać TMCC nad BMCC, tworząc kondensator. Zastosuj sygnał sinusoidalny o napięciu 0,5 V przy 100 kilohercach z częstotliwością próbkowania ośmiu herców. Aby uzyskać skoncentrowane osocze bogatopłytkowe (CPRP), należy odwirować próbki krwi ludzkiej.Przenieść CPRP do sterylnego pojemnika i przeprowadzić liczenie płytek krwi. W przypadku badań nad inhibitorami należy inkubować CPRP z predefiniowanym stężeniem aspiryny w buforze Tyrode'a. W celu przeprowadzenia testu czynnościowego płytek krwi zmontuj TMCC i BMCC w uchwytach wydrukowanych w 3D.Mierzyć pojemność wyjściową zmontowanych MCC przez pięć minut, a następnie dodać 45 mikrolitrów CPRP do dołka próbki w TMCC i odczekać 30 minut, aby płytki krwi przylgnęły do elektrody pokrytej fibronektyną w TMCC. Następnie usuń 30 mikrolitrów CPRP z dołka na próbkę, nie naruszając przylegających płytek krwi i uzupełnij studzienkę buforem Tyrode. Po ostatnim przemyciu dodać 10 mikrolitrów roztworu agonisty o pożądanym stężeniu i równoważyć próbkę przez 80 minut.Zmierz maksymalną zmianę pojemności po 30 minutach przyczepności, aby określić przyczepność delta C. W fazie aktywacji zmierz maksymalną zmianę pojemności, określaną jako aktywacja delta C. Oblicz nachylenie krzywej pojemności między 200 a 300 sekund po aktywacji, aby określić aktywację S.Wykonaj analizę statystyczną przy użyciu analizy wariancji z testem pooperacyjnym Tukeya, aby porównać wyniki między grupami. Użyj właściwości dopasowania Shapiro-Wilk do przetestowania rozkładu normalnego. Roztwór CPRP z wcześniej określoną liczbą płytek krwi wykazał liniowy spadek pojemności podczas adhezji.Po aktywacji trombiny zaobserwowano wykładniczy spadek w stanie ustalonym. Wartości adhezji Delta C wykazały silną korelację z liczbą płytek krwi w całym zakresie liczby płytek krwi, ze znacznym zmniejszeniem przy stężeniu aspiryny 1,3 milimola. Tempo wykładniczego zmniejszania pojemności po stymulacji płytek krwi zwiększało się wraz z koncentracją komórek.Wielkość utraty pojemności również rosła wraz ze wzrostem stężeń, wykazując wyraźną tendencję wzrostową aktywacji delta C. Podobną tendencję zaobserwowano w przypadku aktywacji S i liczby płytek krwi. Wraz ze wzrostem dawki aspiryny, pojemność, aktywacja delta C i aktywacja S wykazywały tendencje spadkowe.Zaobserwowano statystycznie istotną różnicę w aktywacji S między wysokimi i średnimi dawkami, natomiast nie stwierdzono istotnej różnicy w aktywacji delta C. Sygnały pojemnościowe dla próbek CPRP aktywowanych trombiną wykazały, że zmniejszenie pojemności stawało się wyraźniejsze wraz ze wzrostem stężenia trombiny. Zarówno aktywacja delta C, jak i aktywacja S wykazywały statystycznie istotny trend w odniesieniu do poziomów trombiny.

dynamic-multiparameter-platelet-function-assessment-using-capacitive

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Ten film pokazuje metodę oceny wpływu naprężeń ścinających na płytki krwi. Leczenie przeciwciałami indukuje dysocjację i zmiany konformacyjne w kompleksach mechanoreceptorowych, aktywując płytki krwi i wyrażając markery na powierzchni. Markery te obserwuje się za pomocą barwienia immunologicznego i cytometrii przepływowej.

Wpływ naprężenia ścinającego na płytki krwi leczone przeciwciałami przeciwko receptorom mechanosensorycznym

Transfuzja płytek krwi i hemostaza były modelowane za pomocą komór do rekonstytucji krwi i przepływu mikroprzepływowego w celu zbadania funkcji płytek krwi bankujących. Dane wskazują na wpływ zmian spichrzających płytki krwi na hemostazę in vitro.

Mikroprzepływowe komory przepływowe wykorzystujące rozpuszczoną krew do modelowania hemostazy i transfuzji płytek krwi in vitro

Ten artykuł opisuje eksperymentalny model hemostazy, który jednocześnie mierzy funkcję płytek krwi i krzepnięcie. Fluorescencja płytek krwi i fibryny jest mierzona w czasie rzeczywistym i określa się szybkość adhezji płytek krwi, szybkość krzepnięcia i początek krzepnięcia. Model służy do określania właściwości prokoagulantów płytek krwi pod wpływem przepływu w koncentratach do transfuzji.

Model mikroprzepływowej komory przepływowej do transfuzji płytek krwi i hemostazy mierzy odkładanie się płytek krwi i tworzenie fibryny w czasie rzeczywistym

Tutaj prezentujemy protokół wykrywania i kwantyfikacji nisko obfitych cząsteczek w złożonych roztworach za pomocą imprintingu molekularnego w połączeniu z biosensorem pojemnościowym.

Ultraczułe wykrywanie biomarkerów za pomocą biosensora pojemnościowego opartego na imprintingu molekularnym

Szczegółowy protokół obrazowania pojedynczych migrujących płytek krwi za pomocą funkcjonalizowanych RGD uwięzi awidyna-biotyna o regulowanej gęstości jest dostarczony, ujawniając, że płytki krwi generują wystarczającą siłę, aby zerwać wiązanie awidyna-biotyna.

Test in vitro do badania migracji płytek krwi przy użyciu funkcjonalizowanych RGD tetherów awidyna-biotyna

Tworzenie się płytek krwi z prokoagulantem jest skorelowane ze zwiększonym ryzykiem zakrzepicy. Przedstawiono dokładny protokół izolacji przemytych płytek krwi od krwi ludzkiej, mający na celu ilościowe określenie ekspozycji na fosfatydyloserynę i uwalnianie mikropęcherzyków, które są charakterystycznymi cechami płytek krwi prokoagulantu.

Charakterystyka płytek krwi prokoagulantu poprzez pomiar ekspozycji na fosfatydyloserynę i uwalniania mikropęcherzyków z oczyszczonych płytek krwi u ludzi

Funkcja płytek krwi pod przepływem może być oceniona, a symulowana resuscytacja hemostatyczna może być modelowana za pomocą urządzenia mikroprzepływowego, które ma zastosowanie w medycynie urazowej i transfuzjologicznej.

Mikrofluidyka w ocenie funkcji płytek krwi

Wielokolorowa cytometria przepływowa dla płytek krwi może zidentyfikować nowe podtypy płytek krwi w klasycznych subpopulacjach płytek krwi, takie jak płytki spoczynku, agregacyjne, prokoagulacyjne i apoptotyczne. Pozwala to na porównanie różnych wzorców subpopulacji indukowanych przez różnych agonistów płytek krwi. Tutaj szczegółowo opisano procedurę tworzenia wielokolorowego panelu cytometrii przepływowej.

Analiza subpopulacji płytek krwi za pomocą wielobarwnej cytometrii przepływowej

Obecny protokół dostarcza obszerny zestaw procedur niezbędnych do analizy prokoagulacyjnych płytek krwi, które wykazują nakładające się cechy martwicy, apoptozy i aktywacji płytek krwi.

Kompleksowa analiza płytek krwi prokoagulantów wykazujących cechy martwicy, apoptozy i aktywacji płytek krwi

Praca ta opisuje test mikrofluidyczny, który wykorzystuje naprężenie ścinające do wywołania powstawania zakrzepów we krwi i charakteryzuje zakrzep za pomocą wielu wymiarów odczytu. Test pozwala mierzyć tendencję protrombotyczną próbek krwi, dzięki czemu jest przydatny w diagnozowaniu chorób, odkrywaniu leków oraz podstawowych badaniach mechanistycznych związanych z zakrzepicą.

Testy profilowania zakrzepów: platforma oparta na mikrofluidyce do kompleksowej charakterystyki trombogenezy biomechanicznej

Poznaj dynamiczną wieloparametrową ocenę funkcji płytek krwi za pomocą biosensora pojemnościowego w półsztywnym mikrośrodowisku. Ta metoda umożliwia jednoczesne pomiar liczby płytek, siły stymulacji i szlaków aktywacji w warunkach fizjologicznych.

Dynamiczna wieloparametrowa ocena funkcji płytek krwi za pomocą biosensora pojemnościowego

Przeglądaj więcej filmów