Modelo Câmara fêmur Janela para<em&gt; In Vivo</em&gt; Acompanhamento de celular na Murino de Medula Óssea

Yonghong Chen; Azusa Maeda; Jiachuan Bu; Ralph DaCosta

doi:10.3791/54205

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Artigo de método

Modelo Câmara fêmur Janela para

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DOI:

10.3791/54205

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28 de julho de 2016

Yonghong Chen^*¹ , Azusa Maeda^*¹^,² , Jiachuan Bu¹ , Ralph DaCosta¹^,²^,³

¹Princess Margaret Cancer Centre, ²Department of Medical Biophysics, University of Toronto, ³Techna Institute, University Health Network

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O protocolo descreve um novo modelo de câmara de janela de fêmur murino que pode ser usado para rastrear o movimento de células na medula óssea femoral in vivo. A microscopia de fluorescência multifotônica intravital é usada para obter imagens de três componentes da medula óssea femoral (vasculatura, matriz de colágeno e neutrófilos) ao longo do tempo.

Resumo

A medula óssea é um órgão complexo que contém várias células hematopoiéticas e não hematopoiéticas. Essas células estão envolvidas em muitos processos biológicos, incluindo hematopoiese, regulação imunológica e regulação tumoral. Métodos comumente usados para entender as ações celulares na medula óssea, como histologia e hemogramas, fornecem informações estáticas em vez de capturar a ação dinâmica de vários componentes celulares in vivo. Para complementar os métodos padrão, um modelo baseado em câmara de janela (WC) foi desenvolvido para permitir imagens seriadas in vivo de células e estruturas na medula óssea murina. Este protocolo descreve um procedimento cirúrgico para instalação da CC no fêmur, a fim de facilitar o acesso óptico a longo prazo à medula óssea femoral. Em particular, para demonstrar sua utilidade experimental, essa abordagem WC foi usada para obter imagens e rastrear neutrófilos dentro da rede vascular do fêmur, fornecendo assim um novo método para visualizar e quantificar o tráfego e a regulação de células imunes na medula óssea. Este método pode ser aplicado para estudar vários processos biológicos na medula óssea murina, como hematopoiese, transplante de células-tronco e respostas imunes em condições patológicas, incluindo câncer.

Introdução

A medula óssea é um órgão importante envolvidos na hematopoiese e regulação imune. É constituída por um componente que contém células germinais hematopoiéticas e progenitoras hematopoiéticas (hspCs), e um componente do estroma contendo células progenitoras não hematopoiéticas que dão origem a células mesenquimais ^1. Dois terços da actividade hematopoiética é dedicado à produção de células mielóides ^2. Em particular, um grande número de neutrófilos são produzidas na medula óssea, com 1-2 x 10 células ¹¹ gerado por dia num ser humano adulto normal ^2. Os neutrófilos são a primeira linha de defesa contra infecções microbianas e....