Summary
Vi præsenterer oplysninger om laboratorieprocedurer for stoffri in vitro-aktivering (IVA) af æggestokkenes follikler til patienter med svær ovariedysfunktion. Denne metode kan øge antallet af hentes oocytter pr æggestokke hyperstimulation og gavn fertilitet bevarelse for disse patienter.
Abstract
Æggestokkene funktion gradvist falder under aldring og i nogle patofysilogiske tilstande, herunder karyotype abnormitet, autoimmune sygdomme, kemo-og stråling-behandlinger, samt æggestokkene operationer. Hos ugifte kvinder med svær ovarie dysfunktion, fertilitet bevarelse er vigtig for fremtidige graviditeter. Selv oocyt cryopreservation er en etableret metode til fertilitetsbevarelse, disse patienter kunne kun bevare et begrænset antal oocytter, selv efter æggestokkene hyperstimulation, hvilket fører til gentagne stimuleringer for at sikre tilstrækkelig oocytter til at garantere fremtidige graviditet. For at løse dette problem har vi for nylig udviklet en lægemiddelfri in vitro-aktiveringsprocedure (IVA), som gør det muligt for os at stimulere tidlige stadier af æggestokkenes follikler til at udvikle sig til den præantrale follikelfase. Disse præantral follikler kan reagere på den unikke protokol af gonadotropin stimulation, hvilket resulterer i øget antal hentede oocytter pr æggestokkene stimulation for kryopræservering. Den stoffri IVA bestod af den kirurgiske tilgang og æggestokkene stimulation. Vi fjernede en del af cortex fra en eller begge æggestokke fra patienter under laparoskopisk kirurgi. Æggestokkene kortikale væv blev skåret i små terninger for at forstyrre Hippo signalering vej og stimulere udviklingen af tidlige stadier follikler. Disse terninger blev podet ortotropisk i de resterende æggestokke samt under serosa af begge æggeledere. Vi har allerede offentliggjort den kirurgiske procedure for den stoffri IVA og protokollen for efterfølgende ovariestimulering, men heri præsenterer vi detaljerne i laboratoriemetoder, der kræves til lægemiddelfri IVA.
Introduction
Æggestokkene funktion falder gradvist under aldring og nogle patofysilogiske tilstande, herunder karyotype abnormitet, autoimmune sygdomme, kemo-og stråling-behandlinger, og æggestokkene operationer. Fertilitetsbevarelse er en af de bedste muligheder for ugifte kvinder med svær ovarie dysfunktion for at bevare deres potentiale for fremtidig graviditet. For fertilitetsbevarelse er der i øjeblikket to metoder, der for det meste er tilgængelige inden for onco-fertilitet. Oocyte cryopreservation er en veletableret procedure for fertilitetsbevarelse , og mange vellykkede tilfælde er blevet rapporteret1,2. På den anden side blev der også etableret kryopræservering af æggestokkene til fertilitetsbevarelse hos kræftpatienter, men det er stadig en eksperimentel strategi3,4. I begge metoder er flere antal modne oocytter nødvendige for at graviditeten kan forekomme. Generelt patienter med for tidlig æggestokke utilstrækkelighed (POI), der bliver amenoré før 40 år, og midaldrende kvinder med lav æggestokkene reserve viste dårlig æggestokkene respons (POR) til æggestokkene stimulation for at give modne oocytter5,6,7. Desuden viste unge patienter med et lavt antal antral follikler også POR til æggestokkene stimulation7. Disse patienter har et meget begrænset antal hentes oocytter selv efter korrekt ovarie hyperstimulation, hvilket kræver flere dyre procedurer for at sikre et tilstrækkeligt antal oocytter til graviditet.
Oocyte donation efterfulgt af in vitro befrugtning (IVF) med mands sæd og embryo overførsel (ET) er den eneste mulighed for disse POI og POR patienter, der har svært ved at få deres egne oocytter8,9,10. Oocytdonation kompliceres dog af etiske spørgsmål samt autoimmune og graviditetskomplikationer11,12,13,14. For at løse disse problemer ønskes etablering af infertilitetsbehandling ved hjælp af patienternes egne oocytter. For POI-patienter har vi udviklet in vitro-aktiveringsmetoden (IVA) for at muliggøre vellykket follikelvækst og generering af modne oocytter, der fører en række graviditeter og leverancer15. I IVA, fragmenterede vi æggestokkene cortexes efter fjernelse af æggestokkene under laparoskopisk kirurgi og dyrkede dem i to dage for at aktivere follikler ved Akt-stimulerende medicin og derefter udføre heterotopisk podning tilbage i kunstige poser lavet under serosa af æggeledere under anden laparoskopisk kirurgi15. Denne procedure fremmet vækst af ur- og primærsække efter fragmentering af æggestokkene for at fremme Hippo signalering disruption16, efterfulgt af to dages kultur med Akt signalering stimulatorer17.
I modsætning til alvorlige POI tilfælde, POR patienter med nedsat æggestokkene reserve har flere sekundære follikler. Fordi Hippo signalering forstyrrelser alene er effektiv til at fremme sekundære follikel vækst16, vi for nylig demonstreret vellykkede graviditeter og leverancer til POR patienter ved hjælp af narkotika-fri IVA procedure, der involverer kortikale fragmentering og ortopisk podning uden behandling af Akt stimulerende lægemidler. Stoffri IVA stimulerer tidlige stadier af æggestokkene follikler til at udvikle sig til preantral follikel fase efter kun én operation og øget antallet af hentede oocytter til IVF-embryo overførsel15,18. Den stoffri IVA tilgang har flere fordele i forhold til vores oprindelige IVA med 1) undgå potentielle follikel tab under kultur, 2) minimere invasivitet og omkostninger ved den anden operation, 3) involverer kun kortsigtede post-kirurgi sengeleje og 4) potentiale spontan graviditet på grund af ortopisk podning. Vi har for nylig offentliggjort en videoartikel, der viser de kirurgiske procedurer for stoffri IVA19 og detaljerede protokoller for ovariestimulation efter operationen20. Her præsenterer vi detaljer om laboratoriemetoder, der kræves til lægemiddelfri IVA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Skriftligt informeret samtykke blev indhentet fra hver POR patient med faldende æggestokke reserve, der er indskrevet i stoffri IVA behandling. Denne undersøgelse blev godkendt af etisk udvalg fra International University of Health and Welfare (nr. 17-S-21). Klinisk forsøg blev registreret under nummer UMIN000034464 og udført i overensstemmelse med Den Internationale Lægeforenings etiske kodeks (Helsingfors-erklæringen).
1. Ekstraktion af ovariebark
- Fjern en del af æggestokkene cortex (10 x 10 mm, 2-3 mm tykkelse) fra en eller begge æggestokke under fuldbedøvelse gennem laparoskopisk kirurgi som tidligere beskrevet19,20.
- De opsamlede ovariebarken i en steril beholder, der indeholder 10 mL modificeret HTF (mHTF) anbringes ved 37 °C.
2. Opsplitning af æggestokkene
BEMÆRK: Før dissektion af æggestokkene cortex, varme op mHTF til 37 °C. Opretholde sterile forhold under hele proceduren. Alle værktøjer til denne procedure er angivet i Tabel over materialer.
- De opsamlede ovariebarkener anbringes i en plastskål, der indeholder 5-10 mL mHTF ved 37 °C, og læg dem på varmepladen for at holde vævet ved 37 °C (Figur 2A).
- Tag et billede af hver cortex ved hjælp af et digitalt kamera med patientens navn, før du starter næste procedure for at linke patientens baggrundsdata.
- Placer en individuel cortex på en steril gaze fugtet med mHTF (Figur 2B).
BEMÆRK: Påfør yderligere mHTF med en engangspipette på gaze for at forhindre, at overfladen af cortex tørres ud under denne procedure. - Fjern rest medulla væv, hvor ser pink ud ved hjælp af en mikro-saks, således at tykkelsen af væv når 1-2 mm(Figur 2C og D).
BEMÆRK: For at undgå tab af follikler i det tidlige stadium må kortikale strimler ikke forberedes mindre end 1 mm i tykkelse, fordi de tidlige follikler er placeret inden for 1-2 mm fra overfladen af æggestokkebarken21. - Dissekere en 1 mm x 1 mm x 5 mm vævsstykke fra hver ovarie kortikale strimmel ved hjælp af en fin skalpel og underkaste den histologiske analyser for at bestemme tilstedeværelsen af resterende follikler som tidligere beskrevet18 (Figur 2E).
BEMÆRK: De dissekerede væv til histologi nedsænkes i mHTF og holdes ved 4 °C, indtil de fastgøres (Figur 2F, se trin 4). - Skær cortex i 1mm x 1 mm x 10 mm strimler ved hjælp af en fin skalpel (Figur 2G).
BEMÆRK: Det er lettere at skære ved at trykke ned på skalpellen end ved at trække på den. - Skær disse vævsstrimler i 1 mm x 1 mm x 1 mm små terninger (Figur 2H).
BEMÆRK: For at undgå ændringer i osmotisk tryk i mediet, tilsæt mHTF i moderation før væv autografting.
3. Auto-podning af æggestokkene kortikale fragmenter
- Åbn pakken af IVA-kanylen og læg den på en steril drapering.
- Skyl indersiden af IVA-kanylen med mHTF ved at indsugning og afladning mHTF flere gange.
- Aspirat 100-200 μL mHTF til påfyldning af spidsen af IVA-kanylen for at undgå, at kortikale terninger tørrer ud under lastning (Figur 3A).
- Læg kortikale terninger i spidsen af IVA kanylen ved hjælp af en fin pincet (Figur 3B-E).
BEMÆRK: Antallet af kortikale terninger til lastning afhænger af podningsstedet. Generelt kan 20-30 terninger transplanteres til en ortotropisk resterende æggestok, mens 10-15 terninger kan transplanteres i en pose under serosa af æggelederen. - Efter at have indlæst kortikale terninger, skal du holde spidsen af kanylen, der indeholder kortikale terninger ved fingrene, indtil du overfører IVA-kanylen til en kirurg. Dette vil undgå, at terningtemperaturen falder.
BEMÆRK: Detaljerne i autografting procedure under laparoskopisk kirurgi er blevet rapporteret tidligere19. Til podning af æggestokkene kortikale terninger, en kanyle-formet enhed (IVA kanyle) blev udviklet af vores samarbejdspartner, Kitazato Corporation.
4. Histologisk analyse af æggestokkene cortex
BEMÆRK: For at tælle antallet af resterende follikler skal du udføre histologiske analyser som tidligere beskrevet15.
- Marker kortikale strimler overflade med et væv mærkning farvestof før prøve fiksering. Dette vil indikere siden af cortex i strimler til histologi.
- Vævsstrimlerne fastgørs natten over ved 4 °C ved hjælp af Bouins opløsning.
BEMÆRK: For at detektere atretiske follikler anbefaler vi ikke at bruge paraformaldehyd til fastgørelse for at undgå svind af oocytcytoplasma. - Dehydrer og indlejring af vævsstrimler i paraffin.
- Afsnit paraffinblokken, der indeholder vævsprøven, serielt afsnit.
- Plette hver sektion ved hjælp af hematoxylin og eosin for at visualisere folliklerne.
- Tæl folliklerne som tidligere beskrevet17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I den første offentliggørelse af IVA-tilgangen15transplanterede vi æggestokkene kortikale terninger en efter en i podningsstederne under laparoskopisk kirurgi (Figur 1A). Fordi 100-150 æggestokkene terninger blev brugt, det tog 3-4 timer for væv podning under laparoskopisk kirurgi. Også nogle æggestokkene terninger gik tabt før podning. Fordi IVA-kanylen kunne overføre 20-30 terninger til et podningssted på én gang (Figur 1B), kunne vi forkorte driftstiden til 1-2 timer. Desuden kan IVA kanylen fjerne tabet af æggestokkene kortikale terninger under operationen.
Figur 1: IVA-kanylens effektivitet( A) Tidligere metode med transplantation af ovariekreknalter en efter en ved hjælp af tang. (B) Den nuværende metode med transplantation 20-30 terninger på én gang ved hjælp af IVA kanylen. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2:Dissektion af æggestokkene til stoffri IVA. (A) Et stykke ovariebark anbringes i en plastfad, der indeholder mHTF ved 37 °C (B) For at fjerne resterende medullavæv placeres æggestokkebarken på en fugtet gaze. (C) Medulla væv fjernes ved hjælp af en fin mikro-saks. (D) Den tykkelse af cortex, der skal fremstilles, er mellem 1 og 2 mm. (E) Efter fjernelse af medullavæv dissekeres en 1 mm x 1 mm x 5 mm vævsstykke fra hver ovarieknækliste til histologisk analyse. f) Det dissekerede væv opbevares i 1,5 mL rør, der indeholder mHTF ved 4 °C, indtil det fastgøres til histologi. (G og H) Den æggestokkene cortex skæres i 1 mm x 1 mm x 10 mm strimler, og derefter yderligere skæres i 1 mm x 1 mm x 1 mm små terninger ved hjælp af en fin skalpel. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3:Automatisk podning af ovarieknæbefragmenter. (A) Inden terninger læsses, indsuges 100-200 μL mHTF for at fylde spidsen af IVA-kanylen for at undgå, at kortikale terninger tørrer ud under pålæsning (B-E) Loading æggestokkene kortikale terninger i spidsen af IVA kanylen. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I dette manuskript viste vi en detaljeret laboratorieprotokol for stoffri IVA. Den stoffri IVA er en ny tilgang til infertilitet behandling for POR patient med faldende æggestokkene reserve til at fremme sekundære follikler vækst, hvilket resulterer i at give mere modne oocytter efter æggestokkene stimulation og stigende i vellykket graviditet20. Hos 15 POR-patienter med faldende æggestokkereservat opnåede denne tilgang en spontan graviditet, in vitro-befrugtning-embryooverførsel tillod fire levende fødsler sammen med en igangværende graviditet19.
Til fremstilling af podning af æggestokkebark blev medullavæv fjernet ved hjælp af en mikrosaks med 1-2 mm tykkelse. Tidligere viste vi, at oprindelige, primære og størstedelen af sekundære follikler var placeret inden for 1 mm tykkelse fra overfladen af æggestokkebarken hos patienter med normal æggestokkereserve21. Hos POI-patienter fandt vi, at sekundære follikler var placeret dybere end 1 mm, men inden for 2 mm fra overfladen af æggestokkebarken21. Antral follikler er kendt for at finde i medulla væv21, men ingen follikel blev fundet i medulla væv hos POI patienter21. Selv om POR patienter med aftagende æggestokkene reserve kunne have antral follikler i medulla væv, antral follikler er vanskelige at overleve efter podning på grund af manglende blodkar kommunikation22. Derfor bestemte vi tykkelsen af æggestokkebarken til at være 1-2 mm, og det kritiske trin i protokollen gør ikke de kortikale strimler < 1-2 mm for at undgå tab af dyrebare resterende follikler. Under forberedelsen af kortikale strimler og terninger brugte vi mHTF, men man kan bruge lignende medium, som omfatter 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonsyre (HEPES) buffer.
I denne procedure transplanterede vi æggestokkebarken efter at have skåret den i 1 mm3 terninger15,20. På grund af vanskelighederne med at håndtere sådanne små fragmenter til podning, tidligere podning æggestokkene terninger én efter én under laparoskopisk kirurgi tog 3-4 timer med nogle terninger lejlighedsvis gik tabt under operationen. Efter udviklingen af IVA-kanylen kunne vi forkorte driftstiden til 1-2 timer, hvilket resulterede i at minimere operationens invasivitet for at tillade, at den lægemiddelfri IVA blev en enkelt dagkirurgi. Desuden kunne vi fjerne tabet af æggestokkene kortikale terninger under operationen. På grund af et begrænset antal follikler i æggestokkene cortex i POR patienter med faldende æggestokkene reserve, er det vigtigt at undgå tab af æggestokkene kortikale terninger. Hvis IVA kanylen ikke er tilgængelig, kan du prøve at finde en lignende kanyle at være i stand til at bruge under laparoskopisk kirurgi.
Nedgangen i æggestokkene funktion er gradvist forårsaget af aldring og nogle patofysiologiske tilstande 23,24,25. Således, i ugifte kvinder med svær æggestokkene dysfunktion, fertilitet bevarelse er vigtigt at tillade fremtidige graviditet. For disse patienter, metoderne til oocytter eller æggestokkene væv cryopreservation blev rapporteret26,27,28,29. Selv oocyt cryopreservation er en etableret metode til fertilitetsbevarelse1,2, disse patienter kunne have meget begrænset antal hentes oocytter selv efter æggestokkene hyperstimulation på grund af lav æggestokkene reserve. Desuden, hos aldrende patienter med ovarie dysfunktion, høj forekomst af kromosom abnormiteter blev rapporteret i ægløsning oocytter26,30. Dette fører til kravet om flere dyre procedurer for at sikre et tilstrækkeligt antal oocytter til at garantere graviditet. For at løse disse problemer har vi udviklet den stoffri IVA-tilgang til at øge antallet af modne oocytter til oocytudtagning. Fordi oocyt cryopreservation ikke længere er en eksperimentel metode31,32, den stoffri IVA efterfulgt af oocyt cryopreservation forventes at være en lovende metode til fertilitetsbevarelse hos ugifte kvinder med svær ovarie dysfunktion. Men fremtidige kliniske undersøgelser ved hjælp af fryse-optøet oocytter opnået fra stoffri IVA vil være forpligtet til at bestemme effektiviteten af denne fremgangsmåde for fertilitet bevarelse hos ugifte kvinder med svær æggestokkene dysfunktion.
Afslutningsvis udviklede vi den lægemiddelfri IVA som en ny tilgang til infertilitetsbehandling for POR-patient med faldende æggestokkereservat og viste detaljer laboratorieprotokollen for at kunne gentage vores procedurer. De metodologiske begrænsninger af stoffri IVA er vanskeligheder med at forudsigelse af resterende follikel nummer før operationen og også manglende evne til at evaluere graft overlevelse. Laboratorieteknikken af stoffri IVA kunne blive grundlaget for fremtidig anvendelse af æggestokkene væv kultur for at opnå modne oocytter uden podning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne bekræfter, at de ikke har nogen interessekonflikt.
Acknowledgments
Vi takker Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto og Mayuko Wakatsuki for at støtte den stoffri IVA-procedure og prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) for kritisk læsning og redigering af manuskriptet. Vi takker også Rebecca Truman og Gregory Truman for at have indsat engelsk fortælling. Denne undersøgelse blev støttet af The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) og Challenging Exploratory Research (18K19624).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
| 60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
| 50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
| Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
| Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
| IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
| KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
| Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
References
- Liang, T., Motan, T. Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).
- Yoon, T. K., et al. Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program. Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).
- Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
- Meirow, D., et al. Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy. New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).
- De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C.
- Scott, R. T., et al. Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome. Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).
- Ferraretti, A. P., et al. ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria. Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).
- Huhtaniemi, I., et al. Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency. Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).
- Męczekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach. Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).
- Baker, V. Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency. Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).
- Englert, Y., Govaerts, I. Oocyte donation: particular technical and ethical aspects. Human Reproduction. 13, Suppl 2 90-97 (1998).
- Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. Oocyte donation: ethical aspects related to the donor. Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).
- Storgaard, M., et al. Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis. BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).
- Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus. Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).
- Kawamura, K., et al. Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).
- Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C.
- Li, J., et al. Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).
- Suzuki, N., et al. Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency. Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).
- Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility. Fertility and Sterility. , (2020).
- Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve. Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).
- Haino, T., et al. Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification. Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).
- Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C. Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).
- Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities. Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).
- Domniz, N., Meirow, D. Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases. Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 60, 42-55 (2019).
- Laven, J. S.
- Grynberg, M., et al.
- Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).
- Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer. Obstetrics & Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).
- Donnez, J., Dolmans, M. M. Ovarian tissue freezing: current status. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).
- Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure. Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).
- De Munck, N., Vajta, G. Safety and efficiency of oocyte vitrification. Cryobiology. 78, 119-127 (2017).
- Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. Oocyte cryopreservation: where are we now. Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).
