Ensaio de invasão de células tumorais: um método baseado em matriz nativa 3D in vitro para avaliar as interações epitelial-mesenquimais

- Para iniciar o ensaio, primeiro pipete uma suspensão de células de fibroblastos suplementada com ácido ascórbico em uma placa de poço e incuba. O ácido ascórbico aumenta a proliferação de fibroblastos. Também estimula a secreção de componentes nativos da MEC, incorporando assim as células em proliferação na espessa matriz extracelular.

Solte suavemente a matriz da superfície da placa e deixe-a flutuar no meio. A matriz se contrai e se torna mais espessa com mais deposição e remodelação da matriz, dando origem a um tecido semelhante à derme nativa. Espalhe a matriz em uma malha porosa. Em seguida, semeie as células epiteliais do câncer sobre a matriz e incube para que as células se estabeleçam e se fixem.

Transfira o conjunto para uma plataforma de malha pré-montada em um prato. Adicione mídia para complementar apenas a camada inferior da matriz para gerar uma interface ar-líquido para as células acima. Durante a cultura, a interface promove a proliferação e diferenciação de células tumorais. As células também secretam proteases que degradam a MEC, facilitando sua migração e invasão na matriz.

No protocolo a seguir, demonstraremos um ensaio de invasão usando células de carcinoma e