Injeção de peptídeos automontáveis e células precursoras neurais para reparo da medula espinhal em um modelo de rato

Prenda um rato anestesiado com uma lesão na medula espinhal cervical em uma estrutura estereotáxica.

O local da lesão consiste em axônios danificados e cavidades cheias de líquido cercadas por células imunes infiltradas, células gliais e fibroblastos, que impedem o crescimento axonal e a recuperação funcional.

Desinfete e faça uma incisão na pele acima da coluna. Disseque os músculos para expor a dura-máter, a cobertura externa da medula espinhal.

Extirpar o tecido cicatricial da dura-máter para revelar o local da lesão da medula espinhal.

Posicione uma microsseringa acima da lesão, contendo peptídeos de automontagem (SAPs), e

injete-os no núcleo da lesão em um lado da linha média.

Repita a injeção no lado oposto para uma distribuição uniforme.

Em seguida, injete células precursoras neurais (NPCs) nos locais ao redor da lesão, evitando o núcleo da lesão inflamada para aumentar a sobrevivência do NPC.

Uma vez injetados, os SAPs se automontam em um andaime que imita a matriz extracelular e une as cavidades. O andaime suporta a sobrevivência e diferenciação de NPCs em células neurais para remodelação de tecidos.

A injeção é realizada 14 dias após a lesão da medula espinhal. Antes de iniciar a cirurgia, prepare os SAPs na concentração de 1% de peso por volume em água estéril e encha um capilar de vidro de 100 micrômetros conectado a uma seringa Hamilton com a solução.

Encaixe a seringa Hamilton na estrutura estereotáxica. Após anestesiar o rato, afixar a cabeça na estrutura estereotáxica e desinfetar o local da cirurgia com iodopovidona e álcool a 70% como antes. Mais uma vez, depois de abrir a pele, dissecar cuidadosamente o par de músculos vertebrais e inserir afastadores.

Use um bisturi número 15 para remover o tecido cicatricial da dura-máter e reexpor o local da lesão. Em seguida, use a ponta de uma agulha afiada para abrir a dura-máter com cuidado. Finalmente, estereotaxialmente, insira o capilar de vidro a uma profundidade de dois milímetros na medula espinhal traumatizada e injete os SAPs.

Após a injeção dos SAPs, deixe o capilar permanecer no local da injeção por um minuto antes da remoção para permitir o alongamento do tecido para acomodar a solução injetada. Em seguida, repita a injeção no próximo local. Aqui, NPCs, foram isolados da zona paraventricular de um camundongo vermelho DS adulto e cultivados de acordo com procedimentos publicados anteriormente.

Pouco antes da microinjeção, dilua os NPCs em meio de crescimento a uma concentração de 50 vezes 10 elevado a um terço de células vivas por microlitro para transplante de células e carregue em um capilar de vidro em uma seringa de Hamilton. Os NPCs são injetados imediatamente após a injeção de SAPs. Para isso, insira o capilar de vidro da seringa de Hamilton a 0,2 milímetros rostral do local da lesão e 1,5 milímetros abaixo da superfície dorsal da medula espinhal.

Injete dois microlitros da suspensão celular a uma taxa de cerca de 0,5 microlitros por minuto. Após a conclusão da primeira injeção, deixe o capilar permanecer na medula espinhal por um minuto como antes. Em seguida, retraia o capilar, mova-o para um local adjacente e repita o procedimento de injeção. Depois de esperar um minuto, como antes, retraia o capilar e mova-o dois milímetros até o local da lesão.

Realize duas injeções de dois microlitros neste local.