Microscopia de contraste de fase para avaliação de mutantes de desenvolvimento em Streptomyces

Comece com placas de ágar contendo colônias de cepas selvagens e mutantes de Streptomyces coelicolor, uma bactéria filamentosa do solo.

Coloque uma lamínula estéril sobre uma região de denso crescimento de colônias onde os filamentos aéreos, que são filamentos que se estendem acima da superfície da colônia, são claramente visíveis.

Pressione suavemente a lamínula para transferir os filamentos aéreos e os esporos associados para a superfície da lamínula.

Em seguida, pegue uma lâmina de microscópio com mídia de montagem e monte a lamínula com o lado da célula voltado para baixo para preservar as estruturas bacterianas.

Coloque a lâmina em um microscópio stage, adicione uma gota de óleo de imersão na lamínula e alinhe a objetiva.

Usando microscopia de contraste de fase, adquira imagens dos filamentos aéreos de cepas selvagens e mutantes.

Os filamentos do tipo selvagem exibem esporos de tamanho uniforme e regularmente espaçados.

Em contraste, as cepas mutantes exibem defeitos, como filamentos salientes, esporos irregulares ou esporos lisados, revelando diferenças fenotípicas de desenvolvimento entre o tipo selvagem e os mutantes.

Para preparar uma lamínula de crescimento bacteriano, use uma pi