Padronização microfluídica e rastreamento baseado em fluorescência do crescimento bacteriano de célula única

Comece com uma cultura bacteriana marcada com fluorescência adicionada a um tampão livre de carbono.

Centrifugue para pellet as bactérias e descarte o sobrenadante.

Ressuspenda o pellet em um tampão fresco sem carbono contendo um detergente neutro.

A falta de uma fonte de carbono interrompe o crescimento, enquanto o detergente evita a aglomeração e mantém as células suspensas.

Carregue a suspensão bacteriana em uma seringa e conecte-a a uma bomba.

Injete a suspensão na entrada de um chip microfluídico contendo um canal com armadilhas embutidas no piso.

Retire lentamente o líquido da saída do canal.

À medida que o líquido recua, as forças capilares guiam as bactérias em direção à saída.

Nesse processo, células bacterianas individuais se instalam nas armadilhas, resultando em padrões bacterianos.

Lave o canal com um caldo pré-aquecido e rico em nutrientes continuamente.

As bactérias retomam o crescimento e formam microcolônias dentro das armadilhas.

Use microscopia de fluorescência para capturar imagens de lapso de tempo e analisar o crescimento bacteriano em um ambiente controlado.

Pipete um mililitro de meio MOPS em um frasco de centrífuga e adicione 10 microlitros de fosfato de potássio 0,132