Detecção de patógenos de peixes usando análise de repetição em tandem de número variável (VNTR)

Comece com uma placa de PCR contendo uma solução desnaturalizante à base de formamida.

Adicione os amplicons de PCR diluídos derivados de uma bactéria patogênica de peixes em cada poço.

Esses amplicons contêm repetições em tandem com número variável marcado fluorescente (VNTRs), sequências curtas e repetitivas usadas como marcadores genéticos para identificação bacteriana.

Sele a placa e a centrífuga para eliminar bolhas de ar.

Aqueça a placa em um ciclador térmico para desnaturar os VNTRs de dupla fiança.

A formamida melhora a separação dos fios e inibe o recozimento.

Resfrie rapidamente a placa para estabilizar o DNA de fita simples.

Centrifuge para coletar o volume da amostra.

Remova a vedação e fixe a placa com uma estrutura.

Coloque o tubo capilar e realize a eletroforese capilar.

Durante a eletroforese, fragmentos de VNTR migram pelo capilar sob um campo elétrico e se separam pelo tamanho.

Um laser excita as etiquetas fluorescentes em cada fragmento, produzindo sinais codificados por cores.

O eletroferograma resultante mostra padrões de pico de VNTR que correspondem à bactéria patogênica.

Após a confirmação dos amplificadores de PCR, utilize novas tiras ou placas de PCR para diluir os pro