Visualizando a distribuição de proteínas bacterianas em três dimensões por meio de imagem por fluorescência

Comece com uma lâmina lacrada contendo células bacterianas marcadas com um marcador fluorescente vermelho citoplasmático e um marcador fluorescente verde específico para proteína.

Observe a lâmina sob um microscópio de fluorescência.

Localize um campo contendo células bacterianas bem isoladas e foque no centro de uma célula representativa.

Defina o primeiro canal de fluorescência e adquira uma imagem do z-stack em parâmetros específicos para capturar a forma tridimensional da célula representativa e suas células próximas.

Depois, mude para o segundo canal de fluorescência e adquira outra imagem z-stack das mesmas células com os mesmos parâmetros.

Ela captura a distribuição das proteínas bacterianas dentro das células.

Corte células individuais de cada pilha z para isolá-las e análise de célula única.

Alinhe essas imagens para visualizar a distribuição das proteínas bacterianas em relação ao formato celular, permitindo uma análise precisa durante as interações hospedeiro-patógeno.

Imediatamente após selar a lâmina de cobertura, coloque a lâmina em um palco de microscópio e, após cinco minutos de equilíbrio térmico, use as rodas de foco do microscópio para focar o centro da célula. No softwa