Imagens de Mudanças Morfológicas em Bactérias usando Microscopia de Fluorescência de Células Vivas

Comece com uma cultura bacteriana imobilizada sob uma placa de agarose em um recipiente de fundo de vidro.

As membranas celulares bacterianas são marcadas com um corante fluorescente.

As bactérias também são projetadas para expressar um RNA antissenso que tem como alvo um mRNA específico, inibindo a produção de uma proteína essencial da divisão celular.

Adicione uma gota de óleo de imersão ao objetivo do microscópio de fluorescência invertida.

Coloque o prato em uma caixa metálica e fixe-o no palco do microscópio.

Aumente o objetivo até o óleo tocar a antena, então foque nas células.

Use softwares de imagem para configurar pilhas Z para capturar imagens em múltiplas profundidades.

Comece a adquirir imagens de lapso de tempo fluorescente.

À medida que as células respondem à expressão de RNA antissentido, elas não se dividem e desenvolvem formas inchadas.

A organização da membrana fica desfeita, resultando em fluorescência desigual e focal que indica divisão celular defeituosa.

Para imagear a amostra, use o botão de foco de ajuste grosseiro para garantir que o objetivo esteja totalmente abaixado antes de inicializar o microscópio no software do microscópio. Coloque uma gota de óleo de índice d