Isolamento de células-alvo baseado em fio funcionalizado: uma técnica ex vivo para isolar células cancerígenas do sangue periférico enriquecido

As moléculas de adesão de células epiteliais, ou EpCAMs, são glicoproteínas transmembranares superexpressas em células epiteliais de proliferação rápida em cânceres de próstata. Para isolar as células que expressam EpCAM, comece com um fio de grau médico com uma ponta revestida de ouro funcionalizada. Camadas de funcionalização de um gel polimérico contendo anticorpos específicos de EpCAM ligados covalentemente.

Mergulhe o fio em uma suspensão de sangue periférico contendo células cancerígenas marcadas com fluorescência. Certifique-se de que a parte funcionalizada permaneça mergulhada na suspensão de sangue. Os EpCAMs nas células cancerígenas reconhecem e se ligam aos seus anticorpos específicos funcionalizados no fio.

Lave com um tampão para remover quaisquer células não ligadas da superfície do fio. Dobre o fio e monte-o em uma lâmina de vidro contendo buffer, com a parte funcionalizada imersa no buffer. Use um microscópio de fluorescência para verificar a fluorescência brilhante do citoplasma e dos núcleos das células e confirmar a presença de células capturadas no fio.

Trate o fio com um tampão de liberação. As enzimas proteolíticas no tampão clivam o gel polimérico, liberando