Triagem de morte celular usando coloração DAPI: um método para triagem rápida de morte celular clonogênica induzida por IR em linhagens de células cancerígenas

A exposição a radiações ionizantes, como raios-X, pode causar danos ao DNA, levando à morte celular. Para rastrear o efeito das radiações ionizantes nos perfis de morte celular, comece pegando uma placa de cultura contendo células cancerígenas aderentes colocadas sobre a superfície de uma lamínula.

Irradie a placa de cultura com raios-X durante o período desejado. Este tratamento causa danos ao DNA dentro das células. Em seguida, aspire o meio gasto do prato de cultura e adicione um fixador adequado. Esta solução permeia as células e bloqueia os componentes celulares no lugar durante as etapas de coloração subsequentes.

Descarte a solução fixadora. Remova a lamínula contendo células tratadas com raios-X da placa de cultura. Vire a lamínula e coloque-a na superfície de uma lâmina de vidro carregando uma gota de mancha DAPI sobre ela, de modo que as células fiquem em contato direto com o DAPI.

As moléculas DAPI entram nos núcleos e se ligam aos locais ricos em A-T. do DNA. Agora, visualize as células sob um microscópio de fluorescência. Os núcleos aparecem azuis e exibem morfologias distintas.

As células que mostram núcleos condensados e fragmentados são indicativas de apoptose, mort