Coloração com ácido periódico de Schiff ou PAS: um método para avaliar as deformidades estruturais do glomérulo

O glomérulo é uma rede complexa de capilares dentro do rim que filtra os resíduos e remove o fluido extra do sangue. A taxa de filtração renal depende dessa estrutura especializada, que pode ser examinada usando ácido periódico de Schiff ou coloração PAS.

Para começar, pegue uma seção do córtex renal parafinado em uma lâmina de vidro. Trate a lâmina com xileno. As moléculas de xileno dissolvem a cera de parafina da seção de tecido. Em seguida, exponha a amostra a concentrações decrescentes de álcool. O álcool remove vestígios de xileno enquanto reidrata a seção do tecido para posterior ligação da mancha.

Agora, adicione ácido periódico à amostra. O ácido periódico converte os dióis presentes nos polissacarídeos teciduais, como glicogênio ou mucina, em aldeídos. Esses aldeídos reagem com o reagente de Schiff, uma combinação de fucsina e ácido sulfúrico, formando um corante de cor magenta que mancha a seção do tecido. Enxágue a lâmina para remover o excesso de manchas.

Após o enxágue, adicione hematoxilina de ferro, uma contracoloração nuclear que se liga ao DNA e o mancha de roxo. Lave para remover o excesso de mancha. Finalmente, desidrate a amostra com concentrações crescentes de álcool seguido de xileno, que serve como agente de limpeza. Esta etapa ajuda a melhorar o contraste da seção de tecido para exame microscópico.

A doença glomerular pode ser visualizada como espessamento da membrana basal, capilares alterados e células anormais relacionadas à função renal prejudicada.

Para visualização detalhada das células glomerulares e da matriz mesangial, seque as amostras fixas do córtex renal embebido em parafina a 37 graus Celsius por 1 hora, seguida de desparafinização com xileno consecutivo e imersões descendentes de etanol. Reidrate as amostras em água destilada por 5 minutos e incube as lâminas em solução de ácido periódico em uma câmara de exaustão.

Após 5 minutos, enxágue as lâminas com três lavagens de 5 minutos em 100 mililitros de água destilada, seguidas de uma incubação de 15 minutos no reagente de Schiff. No final da incubação, lave as lâminas em água corrente da torneira por 5 minutos e contra-core com hematoxilina por 3 segundos antes de enxaguar abundantemente em água corrente por mais 15 minutos.

Em seguida, desidrate as lâminas com imersões ascendentes de etanol e duas imersões consecutivas de xileno de 3 minutos. Após a secagem ao ar, as lâminas podem ser montadas com meio de montagem à base de xileno para avaliação de sua estrutura glomerular em um microscópio óptico com uma ampliação de 400X.

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