Coloração fluorescente de prata: uma técnica para visualizar a proteína total em géis de poliacrilamida

A coloração fluorescente de prata de proteínas em géis de poliacrilamida emprega sondas fluorogênicas para detectar e quantificar as proteínas.

Comece com um gel de poliacrilamida com proteínas, separadas em bandas por eletroforese. Mergulhe em uma mistura fixadora de etanol e ácido acético, que impede que as bandas se difundam desnaturando as proteínas.

Lave o gel para remover o ácido acético residual e o etanol. Mergulhe o gel na mancha de nitrato de prata. Os íons de prata se ligam fortemente a grupos carregados negativamente nas proteínas.

Incubar no escuro. Enxágue o gel em água ultrapura para remover complexos de íons de prata não ligados.

Mergulhe o gel em uma solução de revelação contendo uma sonda fluorogênica multicomponente - TPE-4TA. Esta sonda aniônica tem como alvo os íons de prata ligados à proteína, formando agregados insolúveis que ativam as propriedades fluorogênicas da sonda, conferindo fluorescência.

Como a ativação da fluorescência depende da agregação, as sondas não ligadas não emitem nenhum sinal, permitindo a coloração total da proteína com emissão de fundo reduzida.

Incube o gel no escuro com agitação suave, garantindo um desenvolvimento fluorogênico comple