Multimer-PAGE para separação de complexos de proteínas nativas: uma técnica de separação híbrida que consiste em Blue Native-PAGE e SDS-PAGE para separar proteínas multiméricas intactas do lisado tecidual

Os complexos proteicos multiméricos são essenciais para vários processos biológicos.

Para separar os complexos de proteínas em seu estado nativo por multímero-PAGE, pegue lisado de tecido contendo os complexos desejados. Carregue o lisado em um conjunto de gel para PAGE nativo azul.

Encha o sistema com um tampão alcalino contendo corante aniônico azul e conecte-o à fonte de alimentação. Em um pH alcalino, as moléculas de corante se ligam ao complexo proteico, conferindo-lhe uma carga negativa geral sem desnaturar. Este complexo proteico intacto e carregado negativamente migra através do gel como uma faixa azul.

Após uma corrida mínima e permitindo que a proteína intacta migre para o gel de resolução, excise a tira que contém o complexo. Incubar a tira em uma solução contendo um agente de reticulação para permitir que seus grupos reativos interajam com os grupos amina da proteína proximal, estabilizando o complexo multimérico.

Substitua a solução de reticulação por um reagente de têmpera para diminuir a atividade dos reticuladores não reagidos. Adicione SDS - um detergente aniônico - que confere uma carga negativa uniforme ao complexo proteico intacto, preservando seu tamanho e comp