Ensaio de eletroquimioluminescência para quantificação dos níveis de proteína-alvo no lisado cerebral

Para detecção quantitativa de uma proteína específica no lisado cerebral de camundongo usando a eletroquimioluminescência, ECL, imunoensaio, comece com uma placa de ensaio de vários poços.

Os poços compreendem eletrodos de trabalho e contra-eletrodos condutores, completando o circuito elétrico. Uma camada dielétrica separa os eletrodos, melhorando a sensibilidade do ensaio.

Adicione anticorpos monoclonais primários de camundongo contra a proteína-alvo aos poços. Os eletrodos de trabalho, com maior capacidade de ligação, facilitam a imobilização dos anticorpos sobre eles.

Incubar com uma solução contendo proteínas, ligando-se às superfícies de ligação restantes do poço, reduzindo a interferência de fundo.

Adicione lisado de fração nuclear do cérebro de camundongo. A proteína-alvo no lisado se liga especificamente aos anticorpos monoclonais.

Adicione anticorpos policlonais não marcados, reconhecendo e ligando-se a epítopos na proteína, que está ligada a anticorpos monoclonais primários no eletrodo. Adicione anticorpos secundários específicos marcados com complexo de rutênio, ligando-se aos anticorpos não marcados. Adicione um tampão adequado contendo surfactante - fornecendo um ambie