Método baseado em ELISA para analisar interações entre proteínas de isca e presa

A interação física entre dois parceiros proteicos modula os mecanismos biológicos a jusante.

Para detectar interações proteína-proteína usando o ensaio de imunoabsorção enzimática, ELISA, pegue uma placa de imunoensaio de vários poços. Adicione um tampão de revestimento contendo uma das proteínas que interagem - a proteína da isca - e incuba. As proteínas da isca são adsorvidas na superfície do poço por meio de interações hidrofóbicas não específicas.

Descarte a solução gasta e lave a placa com um tampão para remover as proteínas não ligadas. Adicione uma solução de bloqueio e incuba, permitindo que as moléculas do agente bloqueador da solução bloqueiem locais de ligação não específicos na superfície do poço.

Adicione a proteína parceira de interação - a proteína da presa - marcada com resíduos de histidina para facilitar a quantificação. Incubar, permitindo que a proteína da presa se ligue especificamente ao seu parceiro interativo - a isca. Adicione uma solução de anticorpos anti-histidina conjugados com enzimas peroxidase de rábano que se ligam à presa, formando um complexo isca-presa-anticorpo.

Pipetar uma solução contendo o substrato da enzima e o peróxido de hidrogénio e incu