Classificação de células baseada em citometria de fluxo para diferentes populações de células B circulatórias

Com base em seus receptores de superfície celular, as células B circulantes humanas são classificadas como células B virgens CD19 positivas, células B de memória CD19 e CD27 positivas e plasmablastos CD19, CD27 e CD38 positivos.

Para classificar essas populações de células, tome uma suspensão purificada de células B. Incubar com anticorpos de imunoglobulina G humana. Os anticorpos bloqueiam os receptores Fc das células B, impedindo a ligação de anticorpos inespecíficos.

Adicione anticorpos marcados com fluorescência direcionados a CD19, CD27 e CD38.

Os anticorpos anti-CD19 se ligam aos receptores CD19 expressos de forma ubíqua nas células B.

Os anticorpos anti-CD27 ligam-se aos receptores CD27 expressos nas células B de memória e nas células plasmáticas plasmablastos.

Os anticorpos anti-CD38 ligam-se aos receptores CD38 expressos nas células plasmáticas plasmablastos.

Adicione um corante fluorescente de ligação ao DNA como marcador de células mortas.

As células mortas exibem uma perda de integridade da membrana, permitindo a entrada celular do corante e a ligação ao DNA de fita dupla; as células vivas permanecem sem coloração.

Centrifugue para remover anticorpos e corantes não liga