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DOI: 10.3791/55578-v
Sandrine Schmutz1, Mariana Valente2,3,4,5, Ana Cumano2, Sophie Novault1
1Flow Cytometry Core Facility, Center for Translational Research-Technical Core,Institut Pasteur, 2Unit for Lymphopoiesis, Immunology Department, INSERM U1223,University Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Cellule Pasteur, Institut Pasteur, 3Stem-Cell Microenvironments in Repair/Regeneration Team,Instituto de Investigação e Inovação em Saúde (i3s), INEB - Instituto de Engenharia Biomédica, 4ICBAS - Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar,Universidade do Porto, 5Stem Cells and Regenerative Medicine Team, UMRS 1166, ICAN - Institute of Cardiometabolism And Nutrition,UPMC - Université Pierre et Marie Curie - Paris 6, INSERM
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Este artigo descreve espectral citometria, uma nova abordagem em citometria de fluxo que usa as formas de espectros de emissão de distinguir fluorocromos. Um algoritmo substitui compensações e pode tratar auto-fluorescência como um parâmetro independente. Esta nova abordagem permite a análise adequada de células isoladas de órgãos sólidos.
O objetivo geral desta técnica de citometria espectral é distinguir diferentes fluorocromos usando todos os seus espectros de emissões. Além disso, este protocolo permite a implementação da autofluorescência como um parâmetro independente, permitindo uma análise adequada de células isoladas de órgãos sólidos. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos da imunologia e do desenvolvimento da biologia de células-tronco, como identificar populações de células raras.
A principal vantagem desta técnica é sua capacidade única de analisar simultaneamente um grande número de parâmetros e gerenciar a autofluorescência de tecidos sólidos. Embora esse método seja usado para a preparação de uma suspensão de célula única derivada do intestino e do coração, ele também pode ser aplicado a outros órgãos, como pulmão, esqueleto, músculo, fígado, gordura e rim. Para começar, isole e lave o intestino delgado de um camundongo adulto.
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