Visualização da ativação de caspase em macrófagos derivados de monócitos humanos

Nas células imunológicas, a caspase-1, uma caspase inflamatória, é um componente imuno-responsivo chave que existe em uma forma inativa. Essas formas inativas consistem em um pró-domínio fundido com um domínio catalítico e tornam-se ativas por dimerização induzida por proximidade.

Para visualizar a ativação da caspase in vivo, comece com uma cultura de macrófagos derivados de monócitos humanos transfectados expressando proteínas fluorescentes vermelhas e um par de proteínas repórteres de complementação fluorescente. As proteínas repórter contêm um pró-domínio da caspase-1 fundido com fragmentos não fluorescentes da proteína de Vênus, Vênus-N ou Vênus-C.

Trate as células com um meio de imagem contendo lipopolissacarídeos - um estimulante inflamatório derivado de bactérias e ionóforos de potássio - nigericina.

Os lipopolissacarídeos interagem com os receptores de reconhecimento de padrões no macrófago, iniciando a montagem de um complexo inflamassoma.

As moléculas de nigericina entram na célula e se ligam aos íons potássio, causando seu efluxo no meio extracelular e diminuindo a concentração intracelular de íons potássio. Isso leva ao priming de proteínas sensoras do inflamassoma com