Quantificação de interferons bioativos tipo I usando um ensaio repórter de fosfatase alcalina embrionária secretada

Para quantificar os interferons bioativos do tipo I, como interferon-alfa e interferon-beta, em uma amostra de teste, pegue uma placa de vários poços contendo células repórter projetadas. Essas células expressam a fosfatase alcalina embrionária secretada, SEAP, gene repórter sob o controle do promotor induzível por interferon-alfa e beta.

Adicionar a amostra de ensaio que contém uma concentração desconhecida de interferão de tipo I. Pipete uma variedade de concentrações de interferon tipo I humano para outros poços, que atuam como controles padrão. Incubar.

O interferon tipo I no poço de teste se liga a um receptor específico da superfície celular, ativando as Janus quinases. Essas proteínas quinases fosforilam transdutores de sinal e ativadores de proteínas de transcrição, STAT, que dimerizam e formam um complexo com um fator regulador de interferon específico.

Ao entrar no núcleo, o complexo se liga a uma sequência específica de DNA no promotor induzível por interferon-alfa e beta, ativando a transcrição do gene SEAP e produzindo as enzimas SEAP, que são secretadas no meio.

Transferir o meio contendo SEAP para poços de placas de vários poços com um substrato específico para SEAP.