Detecção de autoanticorpos de ilhotas humanas usando um ensaio de eletroquimioluminescência

Para detectar autoanticorpos de ilhotas - um biomarcador de diabetes tipo 1 - pegue amostras de soro humano e adicione ácido acético para inibir os componentes interferentes.

Incube e adicione um tampão alcalino para neutralizar o ácido.

Transfira o soro tratado para uma placa de vários poços contendo uma mistura de autoantígenos de ilhotas humanas, incluindo captura biotinilada e antígenos conjugados com rutênio, cada um em uma concentração ideal para o ensaio.

O autoanticorpo da ilhota na amostra positiva faz a ponte entre o antígeno conjugado com rutênio e o antígeno de captura biotinilado, formando um complexo antígeno-anticorpo.

Transferir a mistura para uma placa de electroquimioluminescência revestida com estreptavidina, pré-tratada com um agente bloqueador e equipada com eléctrodos de trabalho e contra-eléctrodos.

Incubar para permitir interações complexas biotiniladas com a estreptavidina ligada e depois lavar.

Adicione um tampão contendo tripropilamina ou TPA.

Em um instrumento de eletroquimioluminescência, a aplicação de tensão entre os eletrodos inicia a oxidação do rutênio e do TPA, gerando radicais TPA.

Os radicais TPA excitam complexos de rutênio, que emitem fótons e