Purificação de nanopartículas de proteínas automontáveis usando cromatografia de afinidade

Pegue uma suspensão de bactérias modificadas que expressam nanopartículas de proteína recombinantes de automontagem com etiquetas de poli-histidina.

Sonicar para liberar componentes intracelulares.

Centrifugue para coletar o sobrenadante contendo nanopartículas de proteína. Dilua-o com um tampão sem imidazol.

Pegue uma coluna de cromatografia de afinidade contendo grânulos de agarose com cátions de níquel imobilizados.

Adicione um tampão com baixa concentração de imidazol para equilíbrio da coluna.

Adicione o lisado bacteriano à coluna.

Durante a corrida, a poli-histidina nas nanopartículas de proteína se liga fortemente aos cátions de níquel.

Enquanto isso, contaminantes como lipopolissacarídeos bacterianos e outras proteínas se ligam fracamente à coluna.

Lave com um tampão contendo uma baixa concentração de imidazol para remover as proteínas fracamente ligadas.

Introduza isopropanol para remover os lipopolissacarídeos e depois lave.

Em seguida, introduza um tampão com uma concentração intermediária de imidazol. O imidazol compete com a histidina pela ligação ao cátion níquel, liberando nanopartículas de proteínas ligadas.

Em seguida, adicione um tampão contendo uma alta concentra