Desenvolvendo uma cocultura de neurônios e macrófagos in vitro

Comece com neurônios do gânglio da raiz dorsal murina isolados em um meio de crescimento.

Semeie-os em uma placa de vários poços revestida de polímero para promover a ligação neuronal.

Em seguida, pegue um camundongo dissecado sacrificado e injete PBS gelado em sua cavidade peritoneal.

Massageie suavemente o peritônio para desalojar os macrófagos da parede do peritônio.

Aperte o camundongo para coletar o fluido peritoneal e trate-o com um tampão de lise para lisar seletivamente os glóbulos vermelhos, que aparecem como contaminantes. Centrifugue e ressuspenda as células em um meio de cultura.

Transfira os macrófagos para uma inserção porosa posicionada dentro do poço contendo os neurônios cultivados.

Essa co-cultura permite que neurônios e macrófagos estejam próximos.

Trate a co-cultura com db-cAMP e incube para facilitar sua entrada nas células. Isso ativa os neurônios para secretar as moléculas de sinalização.

Essas moléculas de sinalização, juntamente com o db-cAMP, induzem os macrófagos a adotar um fenótipo pró-regenerativo e secretam fatores essenciais para o crescimento neuronal.

Antes de montar a cultura, pré-cubra uma placa de 6 poços com poli-D-lisina e laminina. Em seguida