Diferenciando células-tronco embrionárias humanas em progenitores neurais

Comece com uma placa de vários poços revestida com uma matriz de membrana basal que inclui polímeros extracelulares e proteínas de adesão.

Semeie os alvéolos com uma suspensão unicelular de células-tronco embrionárias humanas em um meio de crescimento contendo um inibidor de Rho-quinase.

Incubar para permitir a fixação das células-tronco à matriz.

As células absorvem o inibidor, que bloqueia as enzimas Rho-quinase e previne a morte celular por apoptose.

Isso promove a sobrevivência das células e as mantém em um estado indiferenciado.

Substitua o meio de crescimento por um meio de indução neural rico em fatores de crescimento e contendo inibidores que visam receptores ALK específicos.

Esses inibidores interagem com seus receptores e bloqueiam as vias de sinalização BMP e TGF-β, impedindo a diferenciação celular em precursores endodérmicos ou mesodérmicos.

Isso leva à diferenciação seletiva de células-tronco em precursores ectodérmicos.

Esses precursores ectodérmicos utilizam nutrientes e fatores de crescimento do meio para se multiplicar e posteriormente se diferenciar em células progenitoras neurais.

Coloque as células em uma placa de 6 poços revestida com matriz de membrana basal a uma densidade de 2 x^10,5 células por poço em 2 mililitros de mTeSR1 com inibidor de ROCK de 10 micromolares. Após 24 horas, substitua o meio de cultura por meio de indução neural suplementado com 1 dorsomorfina micromolar e 5 SB431542 micromolar. Mude o meio a cada dois dias durante os primeiros quatro dias de indução neural, depois todos os dias, até que a confluência seja alcançada no sétimo dia.