Obtenção de fatias horizontais do cérebro do hipocampo do camundongo

Pegue os hemisférios cerebrais do camundongo em uma solução com alto teor de sacarose. Prenda os hemisférios com o lado ventral voltado para cima em uma placa de amostra de vibratomo usando um adesivo.

Transfira a placa de amostra para a câmara de fatiar.

Adicione uma solução semicongelada com alto teor de sacarose para manter as condições fisiológicas do tecido e solidificar o adesivo.

Forneça uma mistura de dióxido de carbono e oxigênio para manter a oxigenação dos tecidos.

Usando parâmetros definidos, obtenha as fatias iniciais e remova-as. Além disso, obtenha fatias horizontais do hipocampo.

Transfira cuidadosamente essas fatias de cérebro para uma câmara contendo ACSF para recuperação de tecidos.

As fatias horizontais do hipocampo estão prontas para mais experimentações.

Coloque os dois hemisférios no lado dorsal recém-cortado com a parte ventral do cérebro voltada para cima e coloque uma gota de supercola em uma placa de amostra. Use uma ponta de pipeta para espalhar a cola em uma área grande para acomodar os dois pedaços de tecido e toque um pedaço de tira de papel de filtro no lado ventral de um hemisfério. Use outra tira de papel de filtro para secar cuidadosamente o lado dorsal do cérebro e posicione o lado dorsal do hemisfério para baixo na cola na placa da amostra.

Use duas tiras de papel de filtro adicionais para posicionar o segundo hemisfério na cola conforme demonstrado e coloque a placa de amostra na câmara de fatiamento. Em seguida, de forma rápida, mas cuidadosa, cubra o prato com uma solução de fatia de alta sacarose gelada. Para adquirir seções do tecido cerebral, posicione a lâmina do vibratomo na frente do lado medial dos hemisférios e levante a mesa do vibratomo de forma que a lâmina fique na mesma altura dos lados ventrais dos hemisférios, que agora estão voltados para cima.

Use o controle do vibratomo para abaixar a lâmina 600 mícrons mais na direção dorsal e corte o tecido até que as duas primeiras fatias estejam completamente separadas dos dois hemisférios. Quando as duas primeiras fatias de tecido forem obtidas, inverta a direção de corte e abaixe a lâmina mais 300 mícrons antes de cortar novamente. Quando o hipocampo se tornar visível, use uma pipeta de plástico Pasteur alargada para coletar e transferir as fatias para a câmara de recuperação no banho-maria.