Isolando a microglia de lesões desmielinizantes do cérebro de camundongos usando classificação de células ativadas por magnetismo

Dissecar lesões desmielinizantes coradas do corpo caloso de um cérebro de camundongo.

Essas lesões contêm micróglia residente no cérebro expressando a integrina CD11b da superfície celular.

Colete o tecido e adicione uma solução contendo uma enzima proteolítica e DNase.

A enzima degrada a matriz extracelular, enquanto a DNase degrada o DNA livre.

Adicione tampão frio e filtre a suspensão através de uma peneira para remover aglomerados celulares.

Centrifugue, descarte o sobrenadante e ressuspenda as células peletizadas em um meio de gradiente de densidade.

Cubra com tampão e centrifugue para coletar os detritos restantes nas camadas superiores; as células intactas se depositam na parte inferior.

Remova os detritos e ressuspenda as células em um tampão.

Adicione esferas magnéticas anti-CD11b para rotular a microglia.

Carregar as células numa coluna contendo esferas ferromagnéticas colocadas no campo magnético do separador magnético.

Sob o campo magnético externo, a microglia ligada ao grânulo é retida na coluna enquanto as células não ligadas fluem.

Remova a coluna do campo magnético. Adicione um tampão para eluir a microglia.

Comece microdissecando as lesões marcadas com corante neu