Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:23 min. • June 17th, 2025
Pegue uma co-cultura de glia de revestimento olfativo humano imortalizado, ou células OEG, e neurônios ganglionares da retina de ratos axotomizados, ou RGNs, em uma lamínula.
As células OEG exibem propriedades neuroregenerativas que facilitam a regeneração axonal em RGNs.
Os RGNs são imunomarcados para que seus somas, ou corpos celulares, fluoresçam em vermelho enquanto seus axônios fluorescem em verde.
Usando a mídia de montagem, monte a lamínula contendo as células.
Use um microscópio de epifluorescência para capturar várias imagens de RGNs.
Abra uma imagem no software de imagem.
Quantifique a porcentagem de neurônios com os axônios em relação ao número total de RGNs.
Em seguida, trace um axônio começando do soma até o final e comece o rastreamento do axônio para determinar os comprimentos de todos os axônios.
Quantifique o índice de regeneração axonal dividindo a soma de todos os comprimentos axonais pelo número total de RGNs.
Monte as lamínulas com meio de montagem e mantenha-as a 4 graus Celsius. Use uma objetiva de 40 vezes de um microscópio de epifluorescência para quantificar a regeneração axonal. Quantifique a porcentagem de neurônios com axônios em relação à população total de ne
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