Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:16 min. • June 17th, 2025
Pegue uma seção de cérebro de camundongo imunomarcada com astrócitos marcados com fluorescência. O citoplasma do astrócito fluoresce em vermelho, enquanto o núcleo fluoresce em azul.
Coloque a lâmina em uma platina de microscópio confocal sob uma lente objetiva adequada.
Usando o software de aquisição, ajuste o foco e selecione os fluoróforos que marcam o citoplasma do astrócito e o núcleo.
Inicie a geração de imagens ao vivo e otimize os parâmetros de imagem para reduzir o ruído na imagem adquirida.
Em parâmetros de aquisição, selecione um modo de digitalização de baixa velocidade para capturar uma imagem bidimensional de alta qualidade.
Identifique a posição superior do astrócito como ponto de partida para a pilha Z e a posição mais baixa como ponto final.
Defina o número de fatias que cobrem toda a profundidade da célula.
Mescle as fatias para gerar uma imagem tridimensional do astrócito.
Para iniciar a microscopia confocal, coloque uma lâmina na platina do microscópio e selecione a objetiva 63x. Depois de abrir o software de aquisição, clique em Smart Setup na guia Aquisição e selecione os fluoróforos adequados. Aqui, DAPI e Alexa Fluor 555 são usados.
Em seguida, clique em Melhor sina
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