O que são micro-TENNs?

Micro-TENNs são redes neurais micro-tecido engenheiradas projetadas para imitar e reconstruir circuitos neurais danificados.

Como são preparados os agregados neuronais?

Agregados neuronais são coletados e transferidos para micro-colunas contendo um ECM para suporte.

Qual é o papel do ECM?

O ECM fornece suporte estrutural e promove a adesão e o crescimento das células neuronais.

Quais condições são usadas para incubação?

Os agregados são incubados a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono para facilitar o crescimento.

Como é mantida a viabilidade celular?

A substituição regular do meio é realizada para garantir níveis adequados de nutrientes para os neurônios em crescimento.

Desenvolvendo uma rede neural de engenharia de microtecidos usando uma microcoluna baseada em hidrogel

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:53 min • August 7th, 2025

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Comece com um prato contendo uma micro-coluna. A micro-coluna tem um invólucro externo de hidrogel e uma matriz extracelular, ou núcleo ECM.

Adicione gotas de meio de cultura ao mesmo prato.

Transfira os agregados de células neuronais para o prato e coloque-os em uma das gotículas médias.

Observar ao microscópio estereoscópico e inserir agregados celulares em ambas as extremidades da microcoluna.

Em seguida, transfira a micro-coluna semeada para o meio para viabilidade celular.

Incubar para permitir a ligação da célula ao ECM.

Usando o estereomicroscópio, confirme a fixação da célula. Em seguida, adicione meio de cultura para cobrir o prato e incube.

Os neurônios ligados começam a estender seus axônios através da MEC.

Substitua regularmente o meio médio por um meio fresco para manter os níveis de nutrientes.

Com o tempo, os axônios crescem e abrangem todo o comprimento da microcoluna, formando redes neurais.

A rede neural desenvolvida com engenharia de microtecidos está pronta para reconstruir os circuitos neurais danificados.

Prossiga para a semeadura de células imediatamente após a incubação. Transfira aproximadamente 10 a 20 microlitros de meio de cultura para duas áreas livres nas placas de Petri que contêm as microcolunas. Use uma micropipeta para coletar os agregados neuronais individualmente e transfira-os para a placa de Petri que contém as construções. Mova os agregados com uma pinça para um dos pequenos pools de meio de cultura para preservar a saúde das células.

Enquanto observa sob um estereomicroscópio, use uma pinça para inserir um agregado em uma extremidade das microcolunas para micro-TENNs unidirecionais ou em cada extremidade para arquitetura bidirecional. Em seguida, mova a microcoluna semeada para o outro pequeno pool de meio de cultura para evitar a desidratação e preservar a saúde dos agregados. Quando todas as microcolunas estiverem carregadas, incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 45 minutos para permitir que os agregados adiram ao ECM.

Após a incubação, verificar se os agregados permanecem nas extremidades das microcolunas, utilizando o estereomicroscópio. Por último, inundar cuidadosamente as placas de Petri que contêm os micro-TENNs com meio de cultura com uma pipeta. Coloque os pratos em uma incubadora a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono para cultura a longo prazo.