Desenvolvendo uma rede neural de engenharia de microtecidos usando uma microcoluna baseada em hidrogel

Comece com um prato contendo uma micro-coluna. A micro-coluna tem um invólucro externo de hidrogel e uma matriz extracelular, ou núcleo ECM.

Adicione gotas de meio de cultura ao mesmo prato.

Transfira os agregados de células neuronais para o prato e coloque-os em uma das gotículas médias.

Observar ao microscópio estereoscópico e inserir agregados celulares em ambas as extremidades da microcoluna.

Em seguida, transfira a micro-coluna semeada para o meio para viabilidade celular.

Incubar para permitir a ligação da célula ao ECM.

Usando o estereomicroscópio, confirme a fixação da célula. Em seguida, adicione meio de cultura para cobrir o prato e incube.

Os neurônios ligados começam a estender seus axônios através da MEC.

Substitua regularmente o meio médio por um meio fresco para manter os níveis de nutrientes.

Com o tempo, os axônios crescem e abrangem todo o comprimento da microcoluna, formando redes neurais.

A rede neural desenvolvida com engenharia de microtecidos está pronta para reconstruir os circuitos neurais danificados.

Prossiga para a semeadura de células imediatamente após a incubação. Transfira aproximadamente 10 a 20 microlitros de meio de cultura para duas áreas livres nas placas de Petri que contêm as microcolunas. Use uma micropipeta para coletar os agregados neuronais individualmente e transfira-os para a placa de Petri que contém as construções. Mova os agregados com uma pinça para um dos pequenos pools de meio de cultura para preservar a saúde das células.

Enquanto observa sob um estereomicroscópio, use uma pinça para inserir um agregado em uma extremidade das microcolunas para micro-TENNs unidirecionais ou em cada extremidade para arquitetura bidirecional. Em seguida, mova a microcoluna semeada para o outro pequeno pool de meio de cultura para evitar a desidratação e preservar a saúde dos agregados. Quando todas as microcolunas estiverem carregadas, incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 45 minutos para permitir que os agregados adiram ao ECM.

Após a incubação, verificar se os agregados permanecem nas extremidades das microcolunas, utilizando o estereomicroscópio. Por último, inundar cuidadosamente as placas de Petri que contêm os micro-TENNs com meio de cultura com uma pipeta. Coloque os pratos em uma incubadora a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono para cultura a longo prazo.