Name: Rastreamento contaminação microbiana em ambientes de varejo com fontes fluorescentes Powder - Um ambiente de exemplo Retail Delicatessen (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Aprenda a rastrear a contaminação cruzada por Listeria monocytogenes em ambientes de delicatessen de varejo usando pó fluorescente e espectrometria. Este método ajuda pesquisadores a quantificar vias de propagação de patógenos alimentares.

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Os autores gostariam de agradecer a todos os alunos do laboratório de segurança alimentar e voluntários que ajudaram com este estudo. Esta pesquisa foi financiada por uma concessão Safety Initiative USDA Nacional Integrado de Alimentos (NIFSI) (Prêmio # 10507316).

1. Curva padrão <ol><li> Pesar 37,5 mg pó fluorescente e dissolver em 6 ml de etanol de 200 provas. Fazer diluições em série de 2 vezes desta solução em etanol 200 de prova. </li><li> Vortex todas as amostras de 10 segundos e medir a absorvância a 370 nm. </li><li> Calcula-se a quantidade de pó fluorescente por 1 ml de etanol prova 200. </li><li> Preparar a curva padrão (concentração em mg / ml sobre o eixo y e a absorvância a 370 nm, no eixo dos x) para demonstrar a absorvência com base na concentração do pó fluorescente. </li></ol> 2. Inocular Deli Carnes (Bologna) com pó fluorescente <ol><li> Corte a carne deli em aproximadamente 100 milímetros de espessura amostras usando uma faca limpa e tábua de corte. Preparar três amostras rotulados A, B, e C. </li><li> Brasão amostra A uniformemente com pó fluorescente usando uma esponja limpa ligeiramente úmido. Espalhar o pó na amostra de carne de forma uniforme. Não inocular as amostras B e C com o pó fluorescente. </li&gt; <li> Enrole as amostras com filme plástico e rotular a amostra revestida pó fluorescente como &#39;A&#39; e permanecendo duas amostras como B e C com fita adesiva. </li><li> Coloque as amostras em processo deli frigorífico ou mantidas a 4 ° C na cozinha simulado, onde a experiência será realizada. </li></ol> 3. Mock Deli Cozinha Preparação <ol><li> Fornecer luvas limpas e 70% spray de etanol na cozinha. </li><li> Monte negras lâmpadas fluorescentes compactas, com 13 W lâmpadas ao redor da área de segmentação de dados. </li><li> Prepare a 5 cm x 5 cm do entalhe de folha de alumínio para servir como um modelo para o esfregaço. </li><li> Preparar tubos de 15 ml contendo 6 ml de etanol 95%. </li></ol> 4. Configuração de vídeo Monte três câmeras de vídeo em locais estratégicos para observar todas as áreas da deli falsa ao mesmo tempo. Ligue as câmeras antes de simular o processo de cortador (como explicado no protocolo 5) e analisar os resultados ao mesmo tempo (comoexplicadas no protocolo 7). 5. Simulando Procedimentos Deli Cortando a Track Contaminação Cruzada A fim de melhorar o tamanho da amostra e incorporar variação, realizar este estudo pelos participantes recrutamento após a aprovação do protocolo pelo Conselho de Revisão Institucional da respectiva instituição. O participante pode ser um estudante universitário que pode ou não ter experiência de trabalho em ambientes de varejo deli. Certifique-se que cada participante usa luvas, uma vez que eles entram nas delicatessen. Dê um &quot;antes&quot; imagem sob luz fluorescente preto seguido por uma imagem &quot;depois&quot; após a conclusão do estudo. Fornecer instruções escritas e verbais claras para cada participante da seguinte forma: <ol><li> Ir para geladeira. </li><li> Retirar carne marcado &quot;A&quot;. </li><li> Desembrulhe a carne e salvar filme plástico. </li><li> Coloque a carne na bandeja transporte de fatiador. </li><li> Proteja carne com aperto carne. </li><li> Coloque o interruptor ON. </li><li> Ajuste slibotão índice cer para &quot;2&quot;. </li><li> Slice e dispensar 5 pedaços de carne em papel delicatessen. </li><li> Coloque o interruptor OFF e libertar a pega carne. </li><li> Coloque fatias de carne em saco plástico rotulado como &quot;A&quot;. </li><li> Embrulhe a carne &quot;A&quot; e retornar à geladeira. </li><li> Repita os passos 2-11 com carnes rotulados como &quot;B&quot; e &quot;C&quot;. </li></ol> 6. Quantificar fluorescente Pó Quantificar o pó fluorescente após a conclusão do corte simulada (Seção 5.4) na cozinha delicatessen. Para isso faça o seguinte: <ol><li> Use o estéril 5 centímetros x 5 cm modelo folha de alumínio e coloque-o sobre as áreas marcadas na Figura 1. </li><li> Utilize um cotonete de alginato de cálcio de algodão estéril embebido em etanol a 95%, limpe a área e coloque em 6 ml de etanol 95% em um tubo de polipropileno estéril. </li><li> Vortex do tubo completamente e transferir para uma cuvete de vidro para ler a absorvância a 370 nm. </li><li> Consulte o standard curva para determinar a quantidade de pó fluorescente (y) utilizando a seguinte equação: y = mx + b, onde x é a absorção, m é o declive da curva padrão, e b é a intercepção. </li><li> Para a normalização dos dados, calcular a percentagem de pó fluorescente por área de amostra utilizando a seguinte fórmula: </li></ol><img src="/files/ftp_upload/51402/51402eq1.jpg" alt="Fórmula 1" /> 7. Análise de Vídeo Videotape os participantes como eles completar tarefas 5,1-5,12. Sincronize e guardar as gravações de vídeo para discos DVD, de modo que todos os ângulos podem ser vistos ao mesmo tempo. Assista aos vídeos para registrar o número de toques de mão (o número de vezes que os voluntários tocam áreas no deli simulada) em várias superfícies no ambiente deli (4 diferentes pesquisadores vão analisar o conjunto de dados de forma independente completos).

<ol><li>Sheen, S., Hwang, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+the+cross-contamination+of+Escherichia+coli+O157%3A+H7+on+the+surface+of+ready-to-eat+meat+product+while+slicing%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling the cross-contamination of Escherichia coli O157: H7 on the surface of ready-to-eat meat product while slicing.</a> Food Microbiol. 27, 37-43 (2010).</li>
<li>Crandall, P., Neal, J. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimizing+the+risk+of+Listeria+monocytogenes+in+retail+delis+by+developing+employee+focused%2C+cost+effective+training%5BTitle%5D)+AND+%22Agric.+Food+Anal.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Minimizing the risk of Listeria monocytogenes in retail delis by developing employee focused, cost effective training.</a> Agric. Food Anal. Bacteriol. 1, 159-174 (2011).</li>
<li>Koo, O. K., Sirsat, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+control+of+Salmonella+in+ready-to-eat+products%5BTitle%5D)+AND+%22Agric.+Food+Anal.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical control of Salmonella in ready-to-eat products.</a> Agric. Food Anal. Bacteriol. 2, 56-68 (2012).</li>
<li>Hanning, I. B., Johnson, M. G., Ricke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precut+prepackaged+lettuce%3A+a+risk+for+listeriosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Precut prepackaged lettuce: a risk for listeriosis?</a> Foodborne Pathog. Dis. 5, 731-746 (2008).</li>
<li>Hanning, I. B., Nutt, J. D., Ricke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonellosis+outbreaks+in+the+United+States+due+to+fresh+produce%3A+sources+and+potential+intervention+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Salmonellosis outbreaks in the United States due to fresh produce: sources and potential intervention measures.</a> Foodborne Pathog. Dis. 6, 635-648 (2008).</li>
<li>Zhu, M., Du, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Listeria+monocytogenes+contamination+in+ready%E2%80%90to%E2%80%90eat+meat+products%5BTitle%5D)+AND+%22Compr.+Rev.+Food+Sci.+Food+Safety%22%5BJournal%5D)">Control of Listeria monocytogenes contamination in ready‐to‐eat meat products.</a> Compr. Rev. Food Sci. Food Safety. 4, 34-42 (2005).</li>
<li>Lianou, A., Sofos, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+incidence+and+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+ready-to-eat+products+in+retail+and+food+service+environments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">A review of the incidence and transmission of Listeria monocytogenes in ready-to-eat products in retail and food service environments.</a> J. Food Protect. 70, 2172-2198 (2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+risk+assessment+of+relative+risk+to+public+health+from+foodborne+Listeria+monocytogenes+among+selected+categories+of+ready-to-eat+foods%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Quantitative risk assessment of relative risk to public health from foodborne Listeria monocytogenes among selected categories of ready-to-eat foods.</a> , http://www.fda.gov/downloads(2003 Forthcoming.</li>
<li>Endrikat, S., Gallagher, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+risk+assessment+for+Listeria+monocytogenes+in+prepackaged+versus+retail-sliced+deli+meat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">A comparative risk assessment for Listeria monocytogenes in prepackaged versus retail-sliced deli meat.</a> J. Food Protect. 73, 612-619 (2010).</li>
<li>Pradhan, A. K., Ivanek, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+public+health+impact+of+Listeria+monocytogenes+product-to-product+and+environment-to-product+contamination+of+deli+meats+at+retail%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Comparison of public health impact of Listeria monocytogenes product-to-product and environment-to-product contamination of deli meats at retail.</a> J. Food Protect. 74, 1860-1868 (2011).</li>
<li>Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Handwashing+Technique+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Patent+number+5900067%22%5BJournal%5D)">Handwashing Technique Analysis.</a> Patent number 5900067. , (1999).</li>
<li>Gibson, K. E., Koo, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+and+relative+quantification+of+cross-contamination+within+a+mock+retail+delicatessen+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Observation and relative quantification of cross-contamination within a mock retail delicatessen environment.</a> Food Control. 31, 116-124 (2013).</li>
<li>Xiao, M., Zheng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+and+System+for+Fecal+Detection%5BTitle%5D)+AND+%22Patent+number+5821546%22%5BJournal%5D)">Method and System for Fecal Detection.</a> Patent number 5821546. , (1998).</li>
<li>Waldroup, A., Kirby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+and+System+for+Fecal+Detection%5BTitle%5D)+AND+%22Patent+number+5621215%22%5BJournal%5D)">Method and System for Fecal Detection.</a> Patent number 5621215. , (1997).</li>
<li>Ashby, K. D., Wen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+of+dietary+porphyrins+as+a+basis+for+real-time+detection+of+fecal+contamination+on+meat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Fluorescence of dietary porphyrins as a basis for real-time detection of fecal contamination on meat.</a> J. Agric. Food Chem. 51, 3502-3507 (2003).</li>
<li>Cabrera-Diaz, E., Moseley, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+protein+marked+Escherichia+coli+biotype+I+strains+as+surrogates+for+enteric+pathogens+in+validation+of+beef+carcass+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Fluorescent protein marked Escherichia coli biotype I strains as surrogates for enteric pathogens in validation of beef carcass interventions.</a> J. Food Protect. 72, 295-303 (2009).</li>
<li>Byrd, J., Hargis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+marker+for+the+detection+of+crop+and+upper+gastrointestinal+leakage+in+poultry+processing+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Poult.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fluorescent marker for the detection of crop and upper gastrointestinal leakage in poultry processing plants.</a> Poult. Sci. 81, 70-74 (2002).</li>
<li>Vorst, K. L., Todd, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+Listeria+monocytogenes+during+mechanical+slicing+of+turkey+breast+bologna%2C+and+salami.%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Transfer of Listeria monocytogenes during mechanical slicing of turkey breast bologna, and salami.</a> J. Food Protect. 69, 619-626 (2006).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O objetivo geral deste estudo foi demonstrar como a contaminação cruzada de bactérias pode ocorrer em um ambiente de varejo deli, a fim de desenvolver estratégias para controlar e reduzir o risco de doenças transmitidas por alimentos. O ambiente deli varejo tem um risco especialmente alto para L. monocytogenes contaminação. O USDA-FSIS informou que a carne deli cortado na loja de varejo tem sete vezes maior associação com listeriose que a carne deli cortado e embalado em uma fábrica federal inspecionados 9...

A contaminação cruzada de patógenos de origem alimentar no ambiente de preparo de alimentos, especialmente na seção de varejo, é uma grande preocupação, devido a um aumento do risco de doenças transmitidas por alimentos a partir de uma variedade de fontes, incluindo as carnes, bem como os legumes 1-5. Na maioria das vezes, patógenos bacterianos entrar no ambiente de varejo, através de produtos alimentares contaminados 6. Alimentos prontos-a-comer preparados no varejo são particularmente preocupantes como geralmente há mais nenhuma intervenção ou tratamento (ou seja, cozinhar ou aquecimento) antes do consumo 7. Além disso, agentes patogénicos presentes em alimentos contaminados RTE podem, então, ser transferidos para outros produtos alimentares ou superfícies em contacto com alimentos, no ambiente de retalho. Enquanto a contaminação cruzada pode ocorrer dentro de praticamente qualquer tipo de ambiente de varejo de alimentos, delis são de particular interesse especificamente por causa da associação da RTE frios com o patógeno Listeria monocytogenes 2. Com base em uma avaliação de risco analisa conduzido por os EUA Food and Drug Administration (FDA) e os EUA Departamento de Agricultura Segurança Alimentar e Serviço de Inspeção (USDA-FSIS), frios contaminados são provavelmente responsáveis ​​por 90% dos casos de listeriose - uma rara doença humana ainda grave causada por L. monocytogenes - nos Estados Unidos 8. Em geral, frios fatiados em estabelecimentos de serviços de varejo e alimentos têm sido associados com um risco maior de L. monocytogenes em comparação com frios presliced ​​em uma planta inspecionada USDA pelo fabricante 9. Isso pode ser por causa do aumento da probabilidade de introdução de patógenos por manipuladores de alimentos, matérias-primas recebidas, ou alimentos processados, que podem tornar-se contaminados pós-tratamento 7. No geral, a listeriose é responsável por aproximadamente 28% das mortes estimadas causadas por doenças transmitidas por alimentos por ano em os EUA Por causa da emrisco acrescido de L. monocytogenes contaminação em frios fatiados ao nível do retalho, o próprio cortador deli tem sido identificada como um fator importante para a transferência de superfície de patógenos de origem alimentar no ambiente de varejo 2,10. Como indicado por Sheen 1, corte é a última etapa de processamento antes do consumo, portanto, o cortador de delicatessen deve ser considerado um ponto crítico de controle, tanto para a compreensão e prevenção de contaminação cruzada 1. O objetivo geral deste estudo foi desenvolver uma metodologia para monitorar a contaminação no ambiente deli varejo usando um pó fluorescente como Glo Germ. Este é um composto fluorescente que tem sido usado para simular a contaminação cruzada bacteriana e práticas sanitárias 11,12. Este estudo foi desenhado para controlar a transferência de patógenos de carnes contaminadas com o cortador, o meio ambiente, e de outros produtos de charcutaria. É crucial para entender os caminhos de contaminao desenvolver ambas as intervenções eficazes e material educativo para os empregados de varejo e gestores. Uma abordagem semelhante pode ser empregado para simular a transferência do patógeno em outros ambientes de processamento (por exemplo, aves e carne bovina), fazendas e hospitais.

<table><tbody><tr><td>Glo Germ Powder</td><td>Glo Germ Co</td><td></td><td>Comprado do fornecedor</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Marcadores permanentes</td><td>Sharpie</td><td></td><td>Comprado em papelaria</td></tr><tr><td>Luvas</td><td>VWR</td><td>82026-424</td><td></td></tr><tr><td>Deli Meat</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Bologna Chub de mercearia regular Tábua de</td></tr><tr><td>Corte</td><td>NA</td><td>Faca</td> de <td>cozinha regular NA A regukar</td></tr><tr><td>Faca</td> de cozinha <td>NA</td><td>Uma</td><td>faca de cozinha normal&nbsp;</td></tr><tr><td>Modelos estéreis de 5 cm x 5 cm</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Modelos de folha de alumínio cortados em modelos de 5 cm x 5 cm e esterilizados&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de polipropileno de 15 ml</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes</td><td>Puritan</td><td>25-806</td><td></td></tr><tr><td>Cubetas de vidro</td><td>VWR</td><td>470019-186</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr><tr><td>Câmera flip</td><td>Flip Ultra HD</td><td>NA</td><td>Comprado online</td></tr><tr><td>Fatiador de delicatessen</td><td>Bizerba</td><td>SE-12</td><td></td></tr><tr><td>Refrigerador Deli</td><td>True Company</td><td>TDBD-722</td><td></td></tr><tr><td>Escala</td><td></td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro</td><td>Milton Roy Company</td><td>NA</td><td>Spectronic 20D</td></tr></tbody></table>

rastreamento contaminação microbiana em ambientes de varejo com fontes fluorescentes powder - um ambiente de exemplo retail delicatessen

Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example

A contaminação cruzada de patógenos de origem alimentar no ambiente de varejo é um problema de saúde pública significativo contribuindo para um aumento do risco de doenças transmitidas por alimentos. Alimentos processados ​​prontos-a-comer (RTE), como frios, queijos, e em alguns casos, produtos frescos, ter sido envolvido em surtos de doenças transmitidas por alimentos devido à contaminação com patógenos, como Listeria monocytogenes. Com respeito a L. monocytogenes, cortadores de deli são muitas vezes a principal fonte de contaminação cruzada. O objetivo deste estudo foi a utilização de um composto fluorescente para simular a contaminação bacteriana e acompanhar esta contaminação em um ambiente de varejo. Uma cozinha deli simulado foi projetado para simular o ambiente de varejo. Deli carne foi inoculado com o composto fluorescente e voluntários foram recrutados para completar um conjunto de tarefas semelhantes aos esperados de um empregado do varejo de alimentos. Os voluntários foram instruídos a cortar, embalar, e armazenar a carne no frigorífico delicatessen. O potencialcontaminação cruzada foi localizado no ambiente de varejo simulada limpando áreas específicas e medir a densidade óptica da área limpo com um espectrofotômetro. Os resultados indicaram que o refrigerador (isto é deli caso) aderência e diversas áreas na fatiador teve o maior risco para a contaminação cruzada. Os resultados deste estudo podem ser usados ​​para desenvolver material de treinamento mais focado para os empregados de varejo. Além disso, as metodologias semelhantes também podem ser usados ​​para rastrear a contaminação microbiana em ambientes de produção de alimentos (por exemplo, pequenas fazendas), hospitais, lares de idosos, cruzeiros e hotéis.

A Figura 1 representa as zonas do moinho de facas que foram esfregadas após os voluntários completaram as tarefas atribuídas. Os voluntários foram filmados para analisar a freqüência média de contato da mão sobre essas várias superfícies. A freqüência de contato manual foi analisado por quatro observadores diferentes e média. Estes resultados estão demonstrados na Figura 2. Os dados mostram que a aderência carne, deli invólucro, carne deli, deli e papel tiveram as maiores taxas de conta...

O objetivo geral deste estudo foi demonstrar o mecanismo de contaminação cruzada potencial de patógenos de origem alimentar Listeria monocytogenes em um ambiente deli varejo. Esta metodologia pode ser aplicada a uma variedade de ambientes diferentes para controlar a contaminação do patógeno.

Rastreamento contaminação microbiana em ambientes de varejo com fontes fluorescentes Powder - Um ambiente de exemplo Retail Delicatessen

Cross contamination of foodborne pathogens in the retail environment is a significant public health issue contributing to an increased risk for foodborne ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar o mecanismo potencial de contaminação cruzada do patógeno transmitido por alimentos, Listeria monocytogenes, em um ambiente de delicatessen comercial. Isso é realizado primeiramente projetando uma cozinha de delicatessen simulada para reproduzir o ambiente comercial.No segundo passo, embutidos são inoculados com um composto fluorescente, e então voluntários são orientados a fatiar, embalar e armazenar a carne revestida na geladeira. Na etapa final, a possível contaminação cruzada será rastreada mediante observação do composto fluorescente sob luz negra. Em última análise, a espectrometria pode ser utilizada para quantificar o composto fluorescente, ilustrando como ocorre a contaminação cruzada no ambiente de delicatessens comerciais.A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos que utilizam microrganismos é que, com esta técnica, o composto fluorescente pode ser quantificado rapidamente por fotometria espectral. Embora este método possa fornecer informações sobre o varejo, a segurança alimentar também pode ser aplicada a outros sistemas, como pequenas fazendas, fábricas de processamento de alimentos e outras operações de

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Rastreamento contaminação microbiana em ambientes de varejo com fontes fluorescentes Powder - Um ambiente de exemplo Retail Delicatessen (Vídeo) | JoVE Journal

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