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DOI: 10.3791/52056-v
Ruth Tevlin*1, Adrian McArdle*1,2, Charles K.F. Chan2, John Pluvinage2, Graham G. Walmsley1,2, Taylor Wearda1,2, Owen Marecic1,2, Michael S. Hu1, Kevin J. Paik1, Kshemendra Senarath-Yapa1, David A. Atashroo1, Elizabeth R. Zielins1, Derrick C. Wan1, Irving L. Weissman1,2, Michael T. Longaker1,2
1Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Department of Surgery,Stanford University School of Medicine, 2Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine,Stanford University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Os osteoclastos são as células de reabsorção óssea principais no corpo. Uma capacidade de isolar os osteoclastos em grandes números resultou em avanços significativos na compreensão da biologia dos osteoclastos. Neste protocolo, nós descrevemos um método para o isolamento, cultivo e quantificar a actividade dos osteoclastos in vitro.
O objetivo geral deste procedimento é isolar osteoclastos da medula óssea de camundongos em grande número. Isso é feito primeiro colhendo ossos de camundongos sacrificados. Em seguida, as células são liberadas da medula óssea usando um almofariz e pilão para esmagar os ossos em tampão de fatos.
Em seguida, a solução da medula óssea é colocada em camadas no meio de separação de células de gradiente de densidade e a separação de células de gradiente de densidade é realizada. Finalmente, a camada contendo as células de interesse é aspirada e as células são colocadas em meio de indução de micrófagos da medula óssea. Em última análise, a coloração trap é usada para mostrar a presença de um grande número de osteoclastos.
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