A partir de construções de Cristais - Rumo a determinação da estrutura de β-barril exterior Proteínas de Membrana

O objetivo geral deste método é obter quantidades de miligramas de proteínas do barril beta da membrana externa que cristalizarão e desfractarão. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de dobramento e transporte de proteínas de membrana, como a forma como as proteínas do barril beta são inseridas nas membranas celulares. A principal vantagem dessa técnica é que ela é robusta para proteínas de barril beta.

Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades, porque a escolha de detergentes para purificação, cristalização e defração é um desafio. Jeremy Guerin, um pós-doutorado do laboratório de Susan Buchanan, demonstrará o procedimento, além de mim e de meus colegas no laboratório. Comece este procedimento com a construção de um vetor de expressão T7 contendo a proteína de membrana externa alvo otimizada para códons, ou gene OMP, para expressão in vivo na membrana, conforme descrito no protocolo de texto.